Osnovne tehnike staničnih kultura

1. 1
Stanična kultura osnovnih tehnika
Ljubica Glavaš-Obrovac i Katarina Mišković Špoljarić
Uvod
Kultura stanica je poznata tehnika primjenjuje u cijelom svijetu. To je moćan alat istražuje na području
današnje prirodnih znanosti i sastavlja znanja i povezuje istraživanja iz stanične biologije, biokemije, medicine i
laboratorijske medicine. Tehnika je primjenjiva u dijagnostičkim ispitivanjima i u znanstvenom istraživanju
provedenom u molekularnim, citogenetskog ili biokemijskim laboratorijima 1 ( Slide 2 ).provedenom u molekularnim, citogenetskog ili biokemijskim laboratorijima 1 ( Slide 2 ).provedenom u molekularnim, citogenetskog ili biokemijskim laboratorijima 1 ( Slide 2 ).provedenom u molekularnim, citogenetskog ili biokemijskim laboratorijima 1 ( Slide 2 ).
Područje stanične kulture sada se brzo širi od biofarmaceutsko do matičnih stanica istrage i
regenerativne medicine. Danas imamo potpuno funkcionalna, specijalizirane stanice koje su rezultat
kombinacije selektivnih uvjeta uzgoja i ekspresije gena manipulacije.
Povijest kulture stanica započela s Ross Harrison u 1907, koji uzgaja žaba živaca vlakna Carrel i
Burrows 1912, a njihov uspješan uzgoj pilece tkiva 2. Glavni problem je kultura sterilnost i izbor medija zaBurrows 1912, a njihov uspješan uzgoj pilece tkiva 2. Glavni problem je kultura sterilnost i izbor medija zaBurrows 1912, a njihov uspješan uzgoj pilece tkiva 2. Glavni problem je kultura sterilnost i izbor medija za
uzgoj. U 1950. glavni proboj dogodilo 3. Počelo je s upotrebom antibiotika (1948.) po Keilova, nakon s rastomuzgoj. U 1950. glavni proboj dogodilo 3. Počelo je s upotrebom antibiotika (1948.) po Keilova, nakon s rastomuzgoj. U 1950. glavni proboj dogodilo 3. Počelo je s upotrebom antibiotika (1948.) po Keilova, nakon s rastom
od virusa u kulturi stanica po Enders (1949.), polio virusa u stanice bubrega majmuna po Kew (1952.) i
Dulbeccovom korištenje tripsina za generaciju repliciraju kulture (1952) 3. 1952 George Gey izolirani, iDulbeccovom korištenje tripsina za generaciju repliciraju kulture (1952) 3. 1952 George Gey izolirani, iDulbeccovom korištenje tripsina za generaciju repliciraju kulture (1952) 3. 1952 George Gey izolirani, i
kultiviran uspostavio prvi humanog raka stanične linije poznate kao HeLa stanica 4. Završni korak u razvojukultiviran uspostavio prvi humanog raka stanične linije poznate kao HeLa stanica 4. Završni korak u razvojukultiviran uspostavio prvi humanog raka stanične linije poznate kao HeLa stanica 4. Završni korak u razvoju
stanične kulture je izrada prvog, definiranim medijem ili Eagles mediju (1955) 2. Eagles mediju sadržavalastanične kulture je izrada prvog, definiranim medijem ili Eagles mediju (1955) 2. Eagles mediju sadržavalastanične kulture je izrada prvog, definiranim medijem ili Eagles mediju (1955) 2. Eagles mediju sadržavala
najmanje 13 esencijalne aminokiseline, vitamine, 8 glukoza kao izvor energije, različitih soli za održavanje
osmolalnost 3. Nakon četiri godine, promjene Eagle sastav prvog medija i nazvali „Minimal Essential Mediumosmolalnost 3. Nakon četiri godine, promjene Eagle sastav prvog medija i nazvali „Minimal Essential Mediumosmolalnost 3. Nakon četiri godine, promjene Eagle sastav prvog medija i nazvali „Minimal Essential Medium
ili MEM” 3. Modifikacija sadrži više prehrambenih tvari, ali još uvijek je potrebno dodatak proteina poputili MEM” 3. Modifikacija sadrži više prehrambenih tvari, ali još uvijek je potrebno dodatak proteina poputili MEM” 3. Modifikacija sadrži više prehrambenih tvari, ali još uvijek je potrebno dodatak proteina poput
seruma, plazme ili tkiva ekstrakata 3. Do danas, MEM je osnove za nove medijske formulacija i posebnimseruma, plazme ili tkiva ekstrakata 3. Do danas, MEM je osnove za nove medijske formulacija i posebnimseruma, plazme ili tkiva ekstrakata 3. Do danas, MEM je osnove za nove medijske formulacija i posebnim
zahtjevima zbog stanične linije zahtjevima. Od 1960-ih do danas svake godine je bio novi korak u razvoju i
inovacijama u metodama staničnim kulturama i primjerenim radnim tehnikama.
Kako možemo definirati kulturu stanica? Obično se definira kao uklanjanje stanica od fragmenata organa,
prije ili za vrijeme kultivacije, što narušava njihovu normalnu 5.6 veza sa susjednim stanicama) i njihovo održavanje uprije ili za vrijeme kultivacije, što narušava njihovu normalnu 5.6 veza sa susjednim stanicama) i njihovo održavanje uprije ili za vrijeme kultivacije, što narušava njihovu normalnu 5.6 veza sa susjednim stanicama) i njihovo održavanje u
odgovarajućim uvjetima. U trajanju od kulture tkiva 2odgovarajućim uvjetima. U trajanju od kulture tkiva 2
dvije glavne vrste kultura su označeni: kulturi stanica i kultura organa 2.5.6. kulture organa se definira kao kulturadvije glavne vrste kultura su označeni: kulturi stanica i kultura organa 2.5.6. kulture organa se definira kao kulturadvije glavne vrste kultura su označeni: kulturi stanica i kultura organa 2.5.6. kulture organa se definira kao kultura
cijelih organa i / ili neobrezani organa fragmenata s namjerom proučavanja njihovu daljnju funkciju ili razvoj 5,6. Tocijelih organa i / ili neobrezani organa fragmenata s namjerom proučavanja njihovu daljnju funkciju ili razvoj 5,6. Tocijelih organa i / ili neobrezani organa fragmenata s namjerom proučavanja njihovu daljnju funkciju ili razvoj 5,6. To
zapravo znači proučavanje funkcije u trodimenzionalnom obliku ( Slide 3 ).zapravo znači proučavanje funkcije u trodimenzionalnom obliku ( Slide 3 ).zapravo znači proučavanje funkcije u trodimenzionalnom obliku ( Slide 3 ).
tipova stanica i karakteristike kulture ( Slide 4 )tipova stanica i karakteristike kulture ( Slide 4 )tipova stanica i karakteristike kulture ( Slide 4 )
primarna stanična kultura dobiven je iz roditeljskog tkiva osamljeni organa ili krvi i pripraviti kombinacijomprimarna stanična kultura dobiven je iz roditeljskog tkiva osamljeni organa ili krvi i pripraviti kombinacijom
mehaničkih i / ili enzimskim postupcima 6 se uzgaja u odgovarajućoj podlozi. Stanice se smatraju primarnemehaničkih i / ili enzimskim postupcima 6 se uzgaja u odgovarajućoj podlozi. Stanice se smatraju primarnemehaničkih i / ili enzimskim postupcima 6 se uzgaja u odgovarajućoj podlozi. Stanice se smatraju primarne
kulture do prvog prolaza ili pod-

2. 2
uzgoj 2. To se može utvrditi iz normalne odrasle osobe ili embrionalnog tkiva i od tumorskog tkiva. Alternativauzgoj 2. To se može utvrditi iz normalne odrasle osobe ili embrionalnog tkiva i od tumorskog tkiva. Alternativauzgoj 2. To se može utvrditi iz normalne odrasle osobe ili embrionalnog tkiva i od tumorskog tkiva. Alternativa
uspostavljanja kulture po primarnoj kulturi u laboratoriju je kupiti uspostavljene stanične linije od organizacija
kao što su America Type Culture Collection (ATCC), Europske Zbirka staničnih kultura (ECACC) ili Coriel
Instituta za medicinska istraživanja 7. 8.Instituta za medicinska istraživanja 7. 8.Instituta za medicinska istraživanja 7. 8.
Stanice se dijele u dvije glavne vrste:
• Adherentne stanice ili koje trebaju pričvršćivanje koji zahtijevaju površine, obično se liječi, za rast u kulturi
stanica. Ove vrste stanica su izvedeni iz usamljenim organa poput bubrega, debelog crijeva ili kože u kojima su
nepokretni i ugrađen u vezivno tkivo.
• Ovjes ili ne-ljepljive stanice su uglavnom izvedeni iz krvi, kao što su limfociti. Ove vrste stanica ne
treba površinu privitka in vitro Uzgoj jer su in vivo suspendiran u plazmi.treba površinu privitka in vitro Uzgoj jer su in vivo suspendiran u plazmi.treba površinu privitka in vitro Uzgoj jer su in vivo suspendiran u plazmi.treba površinu privitka in vitro Uzgoj jer su in vivo suspendiran u plazmi.treba površinu privitka in vitro Uzgoj jer su in vivo suspendiran u plazmi.
Nakon prvog pod-uzgoj Kultura stanica sekundarni Dobije. Sub-uzgoj ili prelaženje obavezno korakNakon prvog pod-uzgoj Kultura stanica sekundarni Dobije. Sub-uzgoj ili prelaženje obavezno korakNakon prvog pod-uzgoj Kultura stanica sekundarni Dobije. Sub-uzgoj ili prelaženje obavezno korak
održavanja stanične kulture. To se odnosi na promjenu medija za rast i odvajanje stanica iz kulture površine
posude obično od strane enzima. Najčešće primjenjuje enzim je bio tripsin koristiti samostalno ili u
kombinaciji s strugača stanica za mehaničko odvajanja.
stanične linije ili soj stanica može biti označen kao konačan ili stalan ovisno o njihovoj životni vijek u kulturi.stanične linije ili soj stanica može biti označen kao konačan ili stalan ovisno o njihovoj životni vijek u kulturi.stanične linije ili soj stanica može biti označen kao konačan ili stalan ovisno o njihovoj životni vijek u kulturi.stanične linije ili soj stanica može biti označen kao konačan ili stalan ovisno o njihovoj životni vijek u kulturi.stanične linije ili soj stanica može biti označen kao konačan ili stalan ovisno o njihovoj životni vijek u kulturi.stanične linije ili soj stanica može biti označen kao konačan ili stalan ovisno o njihovoj životni vijek u kulturi.
Konačnih stanična linija ima ograničen broj dioba stanica, a kontinuirana linija stanica je besmrtna i može se
održavati u kulturi na neodređeno vrijeme. Besmrtnost stanica može biti rezultat kemijskom transformacijom, ili
virusne 2, 9. Neke razlike u karakteristikama kultivacije među konačnim i nastavlja staničnim linijama prikazani su u Stolvirusne 2, 9. Neke razlike u karakteristikama kultivacije među konačnim i nastavlja staničnim linijama prikazani su u Stolvirusne 2, 9. Neke razlike u karakteristikama kultivacije među konačnim i nastavlja staničnim linijama prikazani su u Stolvirusne 2, 9. Neke razlike u karakteristikama kultivacije među konačnim i nastavlja staničnim linijama prikazani su u Stol
1, ( Slide 5 ).1, ( Slide 5 ).1, ( Slide 5 ).
Stanice rastu u kulturi kao jednoslojna ili suspenzija kulture ( Klizač 6) Adherentne stanice uglavnom rastu kaoStanice rastu u kulturi kao jednoslojna ili suspenzija kulture ( Klizač 6) Adherentne stanice uglavnom rastu kaoStanice rastu u kulturi kao jednoslojna ili suspenzija kulture ( Klizač 6) Adherentne stanice uglavnom rastu kaoStanice rastu u kulturi kao jednoslojna ili suspenzija kulture ( Klizač 6) Adherentne stanice uglavnom rastu kaoStanice rastu u kulturi kao jednoslojna ili suspenzija kulture ( Klizač 6) Adherentne stanice uglavnom rastu kaoStanice rastu u kulturi kao jednoslojna ili suspenzija kulture ( Klizač 6) Adherentne stanice uglavnom rastu kaoStanice rastu u kulturi kao jednoslojna ili suspenzija kulture ( Klizač 6) Adherentne stanice uglavnom rastu kao
monoslojne kulture obično jedna stanica u debljini koja je vezana za površinu posude, dok stanice rastu u
nonadherent načinu suspenzija ponekad stvara male plutajuće agregate. Zdrave stanice su potrebne za
pouzdano istraživanje i dijagnostičke analize. Rast stanica ovisi o uvjetima kulture i okoliša. To okoliš se obično
sastoji od prikladnog staklenim ili plastičnim kulture posudu koja sadrži tekući ili polukruti medija kao izvor
esencijalnih nutrijenata 6. Rast stanica se prati tijekom nekoliko dana, a karakterizira s tri specifične faze, lag,esencijalnih nutrijenata 6. Rast stanica se prati tijekom nekoliko dana, a karakterizira s tri specifične faze, lag,esencijalnih nutrijenata 6. Rast stanica se prati tijekom nekoliko dana, a karakterizira s tri specifične faze, lag,
prijavite se i platoa, kako je navedeno u Slide 7 , Stanice s odstupanja u krivulje rasta obično zahtijeva promjeneprijavite se i platoa, kako je navedeno u Slide 7 , Stanice s odstupanja u krivulje rasta obično zahtijeva promjeneprijavite se i platoa, kako je navedeno u Slide 7 , Stanice s odstupanja u krivulje rasta obično zahtijeva promjeneprijavite se i platoa, kako je navedeno u Slide 7 , Stanice s odstupanja u krivulje rasta obično zahtijeva promjene
u uvjetima uzgoja: različite kulture posuda, promjenu medija, dodatni dodataka za rast, i za kontrolu pH,
temperatura plina ili okoline. Broj stanica za pokretanje kulturi stanica ovisi o tipu stanica i razlikuje se među
staničnim linijama. Premali ili prevelik broj stanica može dovesti do nenormalnog krivulje rasta. Sjetva broj za
pokretanje i održavanje kulture stanica se obično može naći na web stranicama književnost i kulturu
specijalizirane stanice zbirki kao što su American Type Culture Collection (ATCC) i Europska Zbirka stanične
kulture (ECACC). Vidi tablicu 2, ( Slide 8 )kulture (ECACC). Vidi tablicu 2, ( Slide 8 )kulture (ECACC). Vidi tablicu 2, ( Slide 8 )kulture (ECACC). Vidi tablicu 2, ( Slide 8 )

3. 3
Vrste mediju kulture stanica
Kultura medija sadržavati smjesu različitih nutritiens kao glukoza, amino kiseline, soli i vitamina,
kofaktora i mogu se kupiti ili kao prah ili tekućina. Zahtjevi za sastav medija razlikuju među kultivacija
stanica, a te razlike su odgovorni za broj dostupnih srednjih formulacija.
stanice rastu in vitro mogu se kultivirati ili pomoću prirodni ili umjetni medij kojem je dodano nekolikostanice rastu in vitro mogu se kultivirati ili pomoću prirodni ili umjetni medij kojem je dodano nekolikostanice rastu in vitro mogu se kultivirati ili pomoću prirodni ili umjetni medij kojem je dodano nekoliko
prirodnih proizvoda (Tablica 3, Slide 9 ).prirodnih proizvoda (Tablica 3, Slide 9 ).prirodnih proizvoda (Tablica 3, Slide 9 ).
prirodni mediji sastoji se pojavljuju prirodno bioloških tekućina i prikladan za široki raspon staničnoj kulturiprirodni mediji sastoji se pojavljuju prirodno bioloških tekućina i prikladan za široki raspon staničnoj kulturi
životinja. Glavni nedostatak prirodnog medija je njegova loša reproducibilnost, zbog nedostatka znanja o
točnom sastavu.
Umjetne ili sintetske medij se dobiva dodavanjem organskih i anorganske hranjive tvari, vitamine, soli,Umjetne ili sintetske medij se dobiva dodavanjem organskih i anorganske hranjive tvari, vitamine, soli,
serumske proteine, ugljikohidrate i kofaktora 1,2. Na temelju sastava umjetne medija ( Slide 10 ) grupirani su userumske proteine, ugljikohidrate i kofaktora 1,2. Na temelju sastava umjetne medija ( Slide 10 ) grupirani su userumske proteine, ugljikohidrate i kofaktora 1,2. Na temelju sastava umjetne medija ( Slide 10 ) grupirani su userumske proteine, ugljikohidrate i kofaktora 1,2. Na temelju sastava umjetne medija ( Slide 10 ) grupirani su userumske proteine, ugljikohidrate i kofaktora 1,2. Na temelju sastava umjetne medija ( Slide 10 ) grupirani su userumske proteine, ugljikohidrate i kofaktora 1,2. Na temelju sastava umjetne medija ( Slide 10 ) grupirani su u
četiri kategorije:
Seruma sadrži medij. Kako bi se dobilo optimalnu kultiviranog medija bez seruma goveđeg fetusa, je kao dodatakSeruma sadrži medij. Kako bi se dobilo optimalnu kultiviranog medija bez seruma goveđeg fetusa, je kao dodatak
jeftine, vrlo često koriste u kulturi stanica dodatak životinja medija. To omogućuje serum nosačima ili helatore za
labilnim ili netopljivih u vodi nutrijenata, hormona i faktora rasta, inhibitora proteaze, te neutralizira toksične spojeve.
Serum-free medija. Prisutnost seruma u medijima može imati mnoge nedostatke. Brojni mediju bez serumaSerum-free medija. Prisutnost seruma u medijima može imati mnoge nedostatke. Brojni mediju bez seruma
razvijeni su općenito formulirana za podršku kulturu određeni tip stanice, kao što su matične stanice i
inkorporirati definirane količine pročišćene čimbenika rasta, lipoproteini i drugih proteina, koji se inače
uobičajeno predviđena od seruma. Ovi mediji su također naziva „definiran kulture medija”, jer je njihov
točan sastav poznat.
Kemijski određen medij. Mediji sadrže bez kontaminacije ultra-čista anorganske i organske tvari, a moguKemijski određen medij. Mediji sadrže bez kontaminacije ultra-čista anorganske i organske tvari, a mogu
također sadržavati aditive čistih proteina, poput faktora rasta. Njihovi sastojci se proizvode bakterije ili gljivice
genetskim inženjeringom s dodatkom vitamina, kolesterol, specifičnih aminokiselina, i masne kiseline.
Proteini bez medija. Proteini bez medija ne sadrže bjelančevine i sadrže samo nonprotein sastojke. UProteini bez medija. Proteini bez medija ne sadrže bjelančevine i sadrže samo nonprotein sastojke. U
odnosu na medij bez seruma uz dodatak, korištenje medija bez proteina potiče vrhunski rast stanica i
proteina i olakšava pročišćavanje nizvodno bilo eksprimiranog produkta. Pripravci kao što su minimalni
Eagle mediju (MEM) ili RPMI-1640 bez-proteinski se i dodatak protein daje kada je to potrebno.
Kultura stanica laboratorij
Kultura stanica laboratorij ne zahtijeva veliki prostor (minimum je 12 m². M). Kada dizajnirate laboratorij za
eksperimente sa staničnim kulturama, glavna ideja mora biti kako odvojiti čistu i antiseptičkim dio od
ostatka laboratorija. Pranje i sterilizacija treba biti u posebnoj prostoriji, potpuno fizički odvojen od čistog
dijela laboratorija. Središnji dio

4. 4
prostora kulture stanica je biološku sigurnost kabinet, a ostatak opreme će se oko nje prema raspoloživosti
prostora.
Kultura stanica laboratorijske opreme
Kultura stanica laboratorij treba biti opremljen s osnovne i specifične opreme, ovisno o vrsti istraživanja
provedenog ili dijagnostike i kliničke primjene ( Slide 11 ).provedenog ili dijagnostike i kliničke primjene ( Slide 11 ).provedenog ili dijagnostike i kliničke primjene ( Slide 11 ).
u osnovna oprema uključene su: kultura stanica poklopac (tj biosigurnosti ormar ili za laminarni protok poklopac),u osnovna oprema uključene su: kultura stanica poklopac (tj biosigurnosti ormar ili za laminarni protok poklopac),u osnovna oprema uključene su: kultura stanica poklopac (tj biosigurnosti ormar ili za laminarni protok poklopac),
CO 2 inkubator i cilindar s CO 2, centrifuga, hladnjak i zamrzivač (-20 ° C), spremnici s tekućim dušikom, okrenutaCO 2 inkubator i cilindar s CO 2, centrifuga, hladnjak i zamrzivač (-20 ° C), spremnici s tekućim dušikom, okrenutaCO 2 inkubator i cilindar s CO 2, centrifuga, hladnjak i zamrzivač (-20 ° C), spremnici s tekućim dušikom, okrenutaCO 2 inkubator i cilindar s CO 2, centrifuga, hladnjak i zamrzivač (-20 ° C), spremnici s tekućim dušikom, okrenutaCO 2 inkubator i cilindar s CO 2, centrifuga, hladnjak i zamrzivač (-20 ° C), spremnici s tekućim dušikom, okrenuta
mikroskopa, ili za brojenje stanica, hemocitometra oblik opreme sterilizaciju (parna autoclave- sterilizatora,
sterilizaciju peći) 2,9,10 ( Slide 12-14 )sterilizaciju peći) 2,9,10 ( Slide 12-14 )sterilizaciju peći) 2,9,10 ( Slide 12-14 )sterilizaciju peći) 2,9,10 ( Slide 12-14 )
dodatna oprema pH metar su, aspiracija pumpa (peristaltička ili vakuum) konfokalnim mikroskopom, protočnomdodatna oprema pH metar su, aspiracija pumpa (peristaltička ili vakuum) konfokalnim mikroskopom, protočnom
citometru, orbitalnoj mućkalici, mini spin, vrtlog, kamera za invertiranom mikroskopu, čitača ploča, u vodenoj kupelji.
Kultura stanica napa (laminarno ili biološku sigurnost kabinet) je bitno u svakom manipulira korak u veziKultura stanica napa (laminarno ili biološku sigurnost kabinet) je bitno u svakom manipulira korak u vezi
kulture stanica (Slika 2, Slide 12 ). Hood je ventilirana ormar sa skupom HEPA filtera i pozitivnim tlakom. Njegovakulture stanica (Slika 2, Slide 12 ). Hood je ventilirana ormar sa skupom HEPA filtera i pozitivnim tlakom. Njegovakulture stanica (Slika 2, Slide 12 ). Hood je ventilirana ormar sa skupom HEPA filtera i pozitivnim tlakom. Njegovakulture stanica (Slika 2, Slide 12 ). Hood je ventilirana ormar sa skupom HEPA filtera i pozitivnim tlakom. Njegova
uloga je osigurati čistu i antiseptičkim radni prostor. Nape su klasificirani kao klasa I, II i III, ovisno o razini zaštite
oni pružaju. Kultura stanica uglavnom zahtijeva klasa II laminarnog kapuljaču. II napa klasa stvara sterilan okoliš i
štiti od kontaminacije pomoću vertikalne cirkulacije zraka unutar tri strane zatvorene klupe i nacrtana kroz HEPA
filter 2. Oni mogu biti samostojeći ili klupa vrhu, tako da možete odabrati onaj koji odgovara vašim smještaj.filter 2. Oni mogu biti samostojeći ili klupa vrhu, tako da možete odabrati onaj koji odgovara vašim smještaj.filter 2. Oni mogu biti samostojeći ili klupa vrhu, tako da možete odabrati onaj koji odgovara vašim smještaj.
CO 2 inkubator. Stanične kulture mogu uzgajati u dva glavna tipa CO 2 inkubatori: suha inkubator i vlažan CO 2CO 2 inkubator. Stanične kulture mogu uzgajati u dva glavna tipa CO 2 inkubatori: suha inkubator i vlažan CO 2CO 2 inkubator. Stanične kulture mogu uzgajati u dva glavna tipa CO 2 inkubatori: suha inkubator i vlažan CO 2CO 2 inkubator. Stanične kulture mogu uzgajati u dva glavna tipa CO 2 inkubatori: suha inkubator i vlažan CO 2CO 2 inkubator. Stanične kulture mogu uzgajati u dva glavna tipa CO 2 inkubatori: suha inkubator i vlažan CO 2CO 2 inkubator. Stanične kulture mogu uzgajati u dva glavna tipa CO 2 inkubatori: suha inkubator i vlažan CO 2CO 2 inkubator. Stanične kulture mogu uzgajati u dva glavna tipa CO 2 inkubatori: suha inkubator i vlažan CO 2
inkubator (Slika 3, Slide 13 ). Svrha inkubatora je pružiti odgovarajuću okolinu kontrolirajući temperaturu,inkubator (Slika 3, Slide 13 ). Svrha inkubatora je pružiti odgovarajuću okolinu kontrolirajući temperaturu,inkubator (Slika 3, Slide 13 ). Svrha inkubatora je pružiti odgovarajuću okolinu kontrolirajući temperaturu,inkubator (Slika 3, Slide 13 ). Svrha inkubatora je pružiti odgovarajuću okolinu kontrolirajući temperaturu,
koncentraciju ugljičnog dioksida i vlage. Atmosfera obično sadrži 5-10% CO 2 za održavanje optimalnog pHkoncentraciju ugljičnog dioksida i vlage. Atmosfera obično sadrži 5-10% CO 2 za održavanje optimalnog pHkoncentraciju ugljičnog dioksida i vlage. Atmosfera obično sadrži 5-10% CO 2 za održavanje optimalnog pH
između 7.2-7.4. Vlage sprečava isparavanje medija, što može rezultirati s izmijenjenom soli i koncentracije
hranjivih tvari.
Centrifuga je neizostavni dio svakog laboratorija (Slika 4, Slide 14 ). Kultura stanica zahtijeva centrifugi s mogućnošću kontroleCentrifuga je neizostavni dio svakog laboratorija (Slika 4, Slide 14 ). Kultura stanica zahtijeva centrifugi s mogućnošću kontroleCentrifuga je neizostavni dio svakog laboratorija (Slika 4, Slide 14 ). Kultura stanica zahtijeva centrifugi s mogućnošću kontroleCentrifuga je neizostavni dio svakog laboratorija (Slika 4, Slide 14 ). Kultura stanica zahtijeva centrifugi s mogućnošću kontroleCentrifuga je neizostavni dio svakog laboratorija (Slika 4, Slide 14 ). Kultura stanica zahtijeva centrifugi s mogućnošću kontrole
temperature, emendable popraviti ili swing rotora u mogućnosti vrtjeti cijevi u rasponu 14000 - 20000 okretaja u minuti.
U slučaju kultiviranja stanične suspenzije velikog kapaciteta,
centrifuga mora moći rotirati 4x1 ili 6x1 L boce u hladnom okruženju 2.centrifuga mora moći rotirati 4x1 ili 6x1 L boce u hladnom okruženju 2.
Hlađenje i zamrzavanje. Stanične kulture dodataka, mediji i druge kemikalije moraju se čuvati u hladnom prostoru kaoHlađenje i zamrzavanje. Stanične kulture dodataka, mediji i druge kemikalije moraju se čuvati u hladnom prostoru kao
hladnu prostoriju ili hladnjaku na + 4 ° C. Hladnu sobu je luksuzni i obično klasični hladnjak (+ 4 ° C) ili u kombinaciji hladno /
zamrzavanje (+ 4/20 ° C) je dio stanične kulture laboratorija. Još jedna mogućnost za produljeno „ljuske života” je -80 ° C
zamrzivaču s CO 2 sigurnosna kopija. Spremnici s tekućim dušikom (4, 10 i 50-70 respektivno L) su obvezni dio laboratorijuzamrzivaču s CO 2 sigurnosna kopija. Spremnici s tekućim dušikom (4, 10 i 50-70 respektivno L) su obvezni dio laboratorijuzamrzivaču s CO 2 sigurnosna kopija. Spremnici s tekućim dušikom (4, 10 i 50-70 respektivno L) su obvezni dio laboratoriju
stanične kulture namijenjene za očuvanje dionica staničnim kulturama (slika 5, Slide 14 ).stanične kulture namijenjene za očuvanje dionica staničnim kulturama (slika 5, Slide 14 ).stanične kulture namijenjene za očuvanje dionica staničnim kulturama (slika 5, Slide 14 ).
Mikroskop. Invertirani mikroskop je bitno za stanične kulture (Slika 6 Slide 14 )).Mikroskop. Invertirani mikroskop je bitno za stanične kulture (Slika 6 Slide 14 )).Mikroskop. Invertirani mikroskop je bitno za stanične kulture (Slika 6 Slide 14 )).Mikroskop. Invertirani mikroskop je bitno za stanične kulture (Slika 6 Slide 14 )).
Praćenje stanice na dnevnoj bazi je bitno otkriti svaki mogući morfološke promjene i

5. 5
Potencijal mikrobiološkog ili gljivičnog kontaminacije. To je dobro imati obrnuti mikroskop s fotocijev za digitalno
snimanje i gledanje na monitoru. Fotoaparat obrazovni dio novih djelatnika i studenata mnogo lakše i otkriva
promjene u realnom vremenu. Osim invertiranom mikroskopu, mikroskopom se koristi za seciranje tkiva kao što
su male kralježnjaka i embrionalnom tkivu 2.su male kralježnjaka i embrionalnom tkivu 2.
Brojenje stanica. Za izjednačava i usporedivih istraživanja podataka, pripremu pokusa i procjenom rasta stanica, brojBrojenje stanica. Za izjednačava i usporedivih istraživanja podataka, pripremu pokusa i procjenom rasta stanica, broj
stanica mora biti poznat. Za brojanje stanica, mogu se koristiti hemocitometra (Bürker-Turk, Neubauer) ili protu
elektronički stanica.
Sterilizacija opreme. Kultura stanica rad zahtijeva sterilizirane pomagala i laboratorijske materijala. Većina pomagalaSterilizacija opreme. Kultura stanica rad zahtijeva sterilizirane pomagala i laboratorijske materijala. Većina pomagala
su plastika, sterilizirana i pripremljeni za jednokratnu uporabu. No, može ponovno upotrijebiti stakla i moraju
sterilizirati po mogućnosti suhe topline, dok se tekućina (voda, puferi) i suhi proizvodi sterilizira u autoklavu s vrućom
parom (Slika 7 , Slide 14 ).parom (Slika 7 , Slide 14 ).parom (Slika 7 , Slide 14 ).parom (Slika 7 , Slide 14 ).
Potrebne zalihe su stanične kulture posude (boce, Petrijevim, više jažica) pipete i motorizirani pipeta kontroler,Potrebne zalihe su stanične kulture posude (boce, Petrijevim, više jažica) pipete i motorizirani pipeta kontroler,
štrcaljke i igle, plastične centrifugalne epruvete, kriobočice, uz hlađenje kutije, filteri za šprice i boce, spremnici
za otpad, deionizirane vode, laboratorijskog stakla jela, dezinficijensi (izopropil ili 70% etanola, Na-hipoklorit) 2 ( Slideza otpad, deionizirane vode, laboratorijskog stakla jela, dezinficijensi (izopropil ili 70% etanola, Na-hipoklorit) 2 ( Slideza otpad, deionizirane vode, laboratorijskog stakla jela, dezinficijensi (izopropil ili 70% etanola, Na-hipoklorit) 2 ( Slide
15 )15 )
dodatna oprema je stvar izbora i dostupnosti na tržištu.dodatna oprema je stvar izbora i dostupnosti na tržištu.
Rad u sterilnim uvjetima
Za održavanje sterilnost svi materijali koji dolaze u neposredan dodir s kulturama stanica moraju biti
sterilni, a ne sterilan okolnih mora biti ograničena bez izravnog kontakta s kulturom stanica. Aseptičnu tehniku
​​znači prakse i postupaka koji uključuju stroge radne pravila kako bi se spriječilo onečišćenje od patogena 11. Kako​​znači prakse i postupaka koji uključuju stroge radne pravila kako bi se spriječilo onečišćenje od patogena 11. Kako​​znači prakse i postupaka koji uključuju stroge radne pravila kako bi se spriječilo onečišćenje od patogena 11. Kako
bi se osiguralo sterilnom stanju potrebno je nositi čistu laboratorijski ogrtač, kirurške rukavice, masku, a
ponekad i zaštitne naočale. Sterilnost i čistoća napa radnoj površini je sačuvana pomoću UV lampe. Osim
toga, ona je obvezna brisanje 70% etanola sve što dolazi i odlazi iz haube, uključujući i radni prostor. Protok
zraka mora se održavati tijekom radnog vremena u uvjetima propisanim od strane proizvođača za održavanje
sterilnost radni prostor. Dok je radio u napa, nose u samo potrebne materijale i opremu te ih organizirati u na
način da se izbjegne prijelaz staze u manipulacije. Previše gužve područje rada ometa laminarnog toka i
remeti obuzdavanje i sterilnost (Slika 8, Slide 16 ).remeti obuzdavanje i sterilnost (Slika 8, Slide 16 ).remeti obuzdavanje i sterilnost (Slika 8, Slide 16 ).
Veliki problem u stanične kulture je mikrobiološka kontaminacija bakterijama, mikoplazme, kvasac ili gljivične spore
koje mogu nastati primjenom operatora, atmosfere, radnu površinu, rješenja, kontaminirane stanične linije ili radnog
materijala poput plastike i stakla, instrumenata i pipeta. Da bi se smanjio rizik od infekcije, sterilnom tehnikom
vrijedi. Održavanje dobre aseptičkim tehnikama sprječava većinu onečišćenja koja se mogu pojaviti u staničnim
kulturama. No, događa se ponekad infekcija. Da biste ograničili štetu, pregledajte kulture svaki dan po oku i
mikroskopom, održavati ih bez antibiotika kako bi se spriječilo grobni onečišćenja, koristiti sterilne reagense, ne
dijele medije i druge reagense, i zadržati nove kulture u karanteni. Gljivične i kontaminacija kvasac lako otkriti,
bakterijska kontaminacija može vizualno otkriti

6. 6
Nakon kulture dosegne ušću pozornicu zbog medija zamućivanje i promjena boje zbog promjene pH vrijednosti.
Najveći problem je skriven, mikoplazma kontaminacija. Neotkriven, mogu zaraziti svi ostali stanice. Ako je nešto
neobično u stanične morfologije i stopa rasta, odnosno onečišćenja kontinuirano dalje postoji, napravite test
Mycoplasma 7.Mycoplasma 7.
Držite osobne higijene pranjem ruku. Perilica će navlažiti kožu i ukloniti suhu kožu koja će vrlo vjerojatno
puhati na kulturi stanica. Duga kosa treba biti kravata u leđa. Govoreći je dopušteno, ali zadržati staklo barijeru
između vas i vaših kultura. Ako imate hladno, izbjegavajte rad sa staničnim kulturama, ali ako morate nositi
masku za lice.
Reagensi i mediji dobiveni u originalnoj ambalaži su sterilni, ali izvan, te boce treba obrisati 70%
etanola. Također, obrišite ih kada ih se iz vodene kupke ili hladnjaka za uklanjanje rosu. Otvori ih u
ventiliranim pokrovom.
Kultura posude (tanjuri, boce) otvorena je samo u kapuljačom i držati ih pod kutom kako bi se zaštitili od izlijevanja.
Otvori samo za obavljanje korak manipulacije.
Rukovanje tekućine je najlakše s jednokratnim ili standardne staklene pipete. Staklene pipete su za višekratnu
upotrebu i moraju se sterilizirati u kući, a plastične, za jednokratnu upotrebu pipete su sterilni, a namijenjen je za jednu
potrošak vremena. Na vrhu svake pipete, pamučni sloj bi trebao postojati kako bi se spriječilo onečišćenje, držati pipetu
sterilni tijekom manipulacije i spriječiti tekućine ulaska motornog pipete kontroler. Ponekad male količine izdaju sa špricom,
pogotovo u slučaju sterilna filtracija. Za veće količine, odgovarajući filtri su na raspolaganju.
Standardni operativni postupak - SOP 12,13 je dio dobrih aseptičkim tehnikama i standardne dobreStandardni operativni postupak - SOP 12,13 je dio dobrih aseptičkim tehnikama i standardne dobreStandardni operativni postupak - SOP 12,13 je dio dobrih aseptičkim tehnikama i standardne dobre
laboratorijske prakse. Svaki laboratorij razvija privatni SOP protokol, ovisno o vrsti zahtjeva istraživanja s
obzirom na temeljna načela aseptičkim tehnikama.
Rad u laboratoriju za uzgoj stanica je zahtjevna, ali jednostavno. Usklađenost s laboratorijskom SOP i odgovarajuće
opreme osigurava sigurne i pouzdane znanstvene podatke.
Osnovni protokoli za staničnu precjepljivanje 1, 2, 10Osnovni protokoli za staničnu precjepljivanje 1, 2, 10
Trypsinizing i presađivanja stanica raste u jednoslojne
Stanice uzgojene u monosloju proliferaciju na konfluentnom stanje u kojem se stanice pokrivaju površinu rasta
tikvice ( Slide 17 ). Neke stanice mogu se održavati u ovom plato fazi rasta dana do nekoliko tjedana, dok drugitikvice ( Slide 17 ). Neke stanice mogu se održavati u ovom plato fazi rasta dana do nekoliko tjedana, dok drugitikvice ( Slide 17 ). Neke stanice mogu se održavati u ovom plato fazi rasta dana do nekoliko tjedana, dok drugitikvice ( Slide 17 ). Neke stanice mogu se održavati u ovom plato fazi rasta dana do nekoliko tjedana, dok drugi
zahtijevaju tipizacije i subkulturu kako bi preživjeli. Kao stanice doći do ušće, oni moraju biti presađuju ili
propušten je. Neuspjeh u supkulturu sjedinjene stanicama dovodi do smanjenog indeksa mitoze i na kraju smrt
stanica. Prvi korak u Poduzgoj se odvojiti stanice s površine primarne posude za kulturu tripsinizacijom ili
mehanički. Mehanička metoda uključuje fizički uklanjanjem stanica pomoću stanica struganjem, što uključuje
korištenje spatule ili strugalica za lagano uklanjanje stanica od dna, a enzimska metoda koristi proteolitičke
enzime, obično tripsina, probaviti proteine ​​koji odgovaraju stanice u posudu. Stanice se oslobađaju iz posude uz
razbijanje stanica protein interakcije s površinom posude. Suspenzija se rezultanta stanica se zatim dijeli, ili
presađene, u svježe kulture. Sekundarni kulture se provjeravaju za rast i hranio povremeno,

7. 7
i nakon toga se mogu proizvesti subkultivirati tercijarne kulture. Vrijeme između pasaža stanica ovisi o
staničnoj liniji i ovisi o stopi rasta.
Stavljanjem stanica koje rastu u suspenziji
Presađivanja suspenzije stanica manje složena nego stavljanjem adherentne stanice, jer je ta vrsta stanica
već se suspendira u mediju za rast ( Slide 18 ) , Zamjena svih medija za rast se ne provodi u suspenzijiveć se suspendira u mediju za rast ( Slide 18 ) , Zamjena svih medija za rast se ne provodi u suspenzijiveć se suspendira u mediju za rast ( Slide 18 ) , Zamjena svih medija za rast se ne provodi u suspenzijiveć se suspendira u mediju za rast ( Slide 18 ) , Zamjena svih medija za rast se ne provodi u suspenzijiveć se suspendira u mediju za rast ( Slide 18 ) , Zamjena svih medija za rast se ne provodi u suspenziji
kulture. To se može učiniti izravno razrjeđivanje stanice u boci kulture i nastaviti ih širi, ili povlačenjem dijela
stanice iz tikvice s kulturom i razrjeđivanje preostale stanice do gustoćom odgovara stanične linije. Obično,
zaostajanje razdoblje nakon pasaže je kraći nego što je uočena kod spojenih kultura. Stanice se održavaju
hraneći ih svaka 2 do 3 dana dok ne dođe na ušće. Međutim, za stanične linije koje rastu u nakupinama
možda će biti potrebno donijeti stanica u jednu suspenzije stanica centrifugiranjem i suspendiranjem
kapaljkom u manjem volumenu prije brojanja.
Usporedba Poduzgoj suspenzije i adheriranih staničnih kultura prikazan inthe tablici 4 ( Slide 19 ).Usporedba Poduzgoj suspenzije i adheriranih staničnih kultura prikazan inthe tablici 4 ( Slide 19 ).Usporedba Poduzgoj suspenzije i adheriranih staničnih kultura prikazan inthe tablici 4 ( Slide 19 ).
Zamrzavanje stanice ( Slide 20 )Zamrzavanje stanice ( Slide 20 )Zamrzavanje stanice ( Slide 20 )
Najbolji način za dugoročno skladištenje stanice je da ih zamrznuti i čuvati u tekućem dušiku. Važno je da
zamrzne stanice kada su u optimalnoj gustoće (80-90% nagomilavanja). Postupak počinje s smrzavanja
tripsinizacijom stanica, nakon ponovnog suspendiranja u mediju, prenijeti u sterilnu staklenu cijev i hlađenje
na ledu tijekom pola do jednog sata. Brzina hlađenja koristiti za zamrzavanje kultura mora biti samo usporiti
dovoljno da bi se stanicama vrijeme dehidrirati, ali dovoljno brzo da spriječi prekomjerno oštećenje
dehidraciju. Brzina hlađenje -1 ° C do -3 ° C po minuti je zadovoljavajuća za većinu kulturama životinjskih
stanica. Veće stanice ili stanice koje imaju manje propusne membrane može zahtijevati sporije
zamrzavanja jer je njihova dehidracija će trajati dulje. Bitno je da zamrzne stanice što je prije moguće, jer je
toksičnosti krioprotektant.
Otapanja i oporavlja stanice ( Slide 20 )Otapanja i oporavlja stanice ( Slide 20 )Otapanja i oporavlja stanice ( Slide 20 )
Bitno je odmrznuti stanice što je prije moguće, jer je toksičnosti krioprotektant. Ukratko, smrznute stanice
oporaviti tako da malo se zagrijavaju u ruke i medij sa stanica vrlo brzo sipati u cijev sa svježim medijem i
centrifuga 3000 g za 5 minuta. Na ovaj način stanice se isperu iz krioprotektant i stavljen na dno epruvete.
Odmah nakon centrifugiranja supernatant je uklonjen, a stanice ponovno suspendirane u 5-10 ml medija i
prebačena u posudu za stanične kulture, a pohranjene su u CO 2 inkubator.prebačena u posudu za stanične kulture, a pohranjene su u CO 2 inkubator.prebačena u posudu za stanične kulture, a pohranjene su u CO 2 inkubator.

8. 8
aplikacija za stanične kulture
Kultura stanica kao istražni tehnika ima širok spektar primjene u mnogim različitim znanstvenim područjima ( SlideKultura stanica kao istražni tehnika ima širok spektar primjene u mnogim različitim znanstvenim područjima ( Slide
21 ). To se može koristiti kao modelni sustav za proučavanje staničnih događaja na molekularnoj razini (sintezu21 ). To se može koristiti kao modelni sustav za proučavanje staničnih događaja na molekularnoj razini (sintezu21 ). To se može koristiti kao modelni sustav za proučavanje staničnih događaja na molekularnoj razini (sintezu
DNA, transkripciju, prevođenje interakcije receptora hormona, kinetike u diobi stanica i morfologije), procesi i koje
potiču stanični starenja i. Također se koristi za proučavanje interakcije između stanica i uzročnika bolesti kao što
su bakterije i virusi i načinu infekcije previše. Jer uzgojene stanice mogu se genetski promijenjena i može se
koristiti za gensku terapiju tehnici. Životinja kulture stanica koji se koristi za proučavanje učinaka novih lijekova,
kozmetike i kemikalija na sposobnost rasta i proliferacije niza tipova stanica. Nadalje, korištenjem kulturi stanica
mehanizam i uzrok raka i lijekovima protiv raka učinkovitost može se proučavati kao dobro. 14 Dodatno, kulturemehanizam i uzrok raka i lijekovima protiv raka učinkovitost može se proučavati kao dobro. 14 Dodatno, kulturemehanizam i uzrok raka i lijekovima protiv raka učinkovitost može se proučavati kao dobro. 14 Dodatno, kulture
životinjskih stanica se koriste u vakcinama i za proizvodnje genetički proteina, kao što su monoklonalna antitijela,
inzulin, i hormona. Otkriti fetalni poremećaja fetusa stanična kultura se može koristiti za proučavanje ili ispitati
abnormalnosti kromosoma i gena pomoću karyotyping. Tehnike organa kulture i istraživanja se provode i na
embrionalne i odrasle kulture matičnih stanica previše. Danas, stanična kultura se koristi za proizvodnju umjetne
kože za liječenje bolesnika s opeklinama i čireva i najnovijim istraživanjima je usmjerena na razvoj umjetne
kulture organa i otkrivanju lijeka za poboljšanje zdravlja i kvalitete života pacijenata koji boluju od različitih života-
prijeti bolesti 15.prijeti bolesti 15.
Reference:
1 a) Phelan, MC Tekući protokoli u stanične biologije Poglavlje 1, Jedinica 1.1 (John Wiley &1 a) Phelan, MC Tekući protokoli u stanične biologije Poglavlje 1, Jedinica 1.1 (John Wiley &1 a) Phelan, MC Tekući protokoli u stanične biologije Poglavlje 1, Jedinica 1.1 (John Wiley &1 a) Phelan, MC Tekući protokoli u stanične biologije Poglavlje 1, Jedinica 1.1 (John Wiley &1 a) Phelan, MC Tekući protokoli u stanične biologije Poglavlje 1, Jedinica 1.1 (John Wiley &
Sons, Inc., 2007) .; b) Phelan, K. i May, KM Tekući protokoli u staničnu biologiju 66, 1.1.1-1.1.22Sons, Inc., 2007) .; b) Phelan, K. i May, KM Tekući protokoli u staničnu biologiju 66, 1.1.1-1.1.22Sons, Inc., 2007) .; b) Phelan, K. i May, KM Tekući protokoli u staničnu biologiju 66, 1.1.1-1.1.22Sons, Inc., 2007) .; b) Phelan, K. i May, KM Tekući protokoli u staničnu biologiju 66, 1.1.1-1.1.22
(John Wiley & Sons, Inc., 2015).
2 Freshney, RI Kultura životinjskih stanica. ( John Wiley & Sons, Inc., 2010). doi: 10,1002 /2 Freshney, RI Kultura životinjskih stanica. ( John Wiley & Sons, Inc., 2010). doi: 10,1002 /2 Freshney, RI Kultura životinjskih stanica. ( John Wiley & Sons, Inc., 2010). doi: 10,1002 /2 Freshney, RI Kultura životinjskih stanica. ( John Wiley & Sons, Inc., 2010). doi: 10,1002 /
9780470649367
3 Jayme, D., Watanabe, T, Shimada, T. bazalnom mediju za razvoj kultura bez seruma: a3 Jayme, D., Watanabe, T, Shimada, T. bazalnom mediju za razvoj kultura bez seruma: a
povijesna perspektiva. Citotechnology 23, 95-101 (1997).povijesna perspektiva. Citotechnology 23, 95-101 (1997).povijesna perspektiva. Citotechnology 23, 95-101 (1997).povijesna perspektiva. Citotechnology 23, 95-101 (1997).
4 Lucey, BP, Nelson-Rees, WA, Hutchins, GM Henrietta Lacks, HeLa stanice i stanične4 Lucey, BP, Nelson-Rees, WA, Hutchins, GM Henrietta Lacks, HeLa stanice i stanične
onečišćenje kulture. Arch. Patk. Laboratorija. Med. 133, 1463-7 (2009).onečišćenje kulture. Arch. Patk. Laboratorija. Med. 133, 1463-7 (2009).onečišćenje kulture. Arch. Patk. Laboratorija. Med. 133, 1463-7 (2009).onečišćenje kulture. Arch. Patk. Laboratorija. Med. 133, 1463-7 (2009).
5 Uvod u: Kultura stanica životinja 1-10 (John Wiley & Sons, Inc., 2011).5 Uvod u: Kultura stanica životinja 1-10 (John Wiley & Sons, Inc., 2011).5 Uvod u: Kultura stanica životinja 1-10 (John Wiley & Sons, Inc., 2011).5 Uvod u: Kultura stanica životinja 1-10 (John Wiley & Sons, Inc., 2011).
doi: 10,1002 / 9780470649367.ch1
6 Ryan, JA Uvod u kulturi stanica životinja tehničkom biltenu. Životne znanosti. 34, 1-8 (2008).6 Ryan, JA Uvod u kulturi stanica životinja tehničkom biltenu. Životne znanosti. 34, 1-8 (2008).6 Ryan, JA Uvod u kulturi stanica životinja tehničkom biltenu. Životne znanosti. 34, 1-8 (2008).6 Ryan, JA Uvod u kulturi stanica životinja tehničkom biltenu. Životne znanosti. 34, 1-8 (2008).6 Ryan, JA Uvod u kulturi stanica životinja tehničkom biltenu. Životne znanosti. 34, 1-8 (2008).
7 Geraghty, RJ et al. Smjernice za korištenje staničnih linija u biomedicinskim istraživanjima. Br. J.7 Geraghty, RJ et al. Smjernice za korištenje staničnih linija u biomedicinskim istraživanjima. Br. J.7 Geraghty, RJ et al. Smjernice za korištenje staničnih linija u biomedicinskim istraživanjima. Br. J.7 Geraghty, RJ et al. Smjernice za korištenje staničnih linija u biomedicinskim istraživanjima. Br. J.7 Geraghty, RJ et al. Smjernice za korištenje staničnih linija u biomedicinskim istraživanjima. Br. J.
Rak 111, 1021-1046 (2014).Rak 111, 1021-1046 (2014).Rak 111, 1021-1046 (2014).
8 Plaštevi-Davis, A. et al. Provjerite svoje kulture! Popis unakrsno kontaminiranih ili pogrešno identificirati staničnim linijama. Int. J.8 Plaštevi-Davis, A. et al. Provjerite svoje kulture! Popis unakrsno kontaminiranih ili pogrešno identificirati staničnim linijama. Int. J.8 Plaštevi-Davis, A. et al. Provjerite svoje kulture! Popis unakrsno kontaminiranih ili pogrešno identificirati staničnim linijama. Int. J.8 Plaštevi-Davis, A. et al. Provjerite svoje kulture! Popis unakrsno kontaminiranih ili pogrešno identificirati staničnim linijama. Int. J.8 Plaštevi-Davis, A. et al. Provjerite svoje kulture! Popis unakrsno kontaminiranih ili pogrešno identificirati staničnim linijama. Int. J.
Cancer 127, 1-8 (2010).Cancer 127, 1-8 (2010).Cancer 127, 1-8 (2010).
9 Invitrogen, stanična kultura Osnove Handbook. ThermoFisher Scientific Inc., 1-61 (2010).9 Invitrogen, stanična kultura Osnove Handbook. ThermoFisher Scientific Inc., 1-61 (2010).9 Invitrogen, stanična kultura Osnove Handbook. ThermoFisher Scientific Inc., 1-61 (2010).9 Invitrogen, stanična kultura Osnove Handbook. ThermoFisher Scientific Inc., 1-61 (2010).
10 Nema, R.and Khare, S. staničnoj kulturi životinja: Advance tehnologija suvremenih istraživanja.10 Nema, R.and Khare, S. staničnoj kulturi životinja: Advance tehnologija suvremenih istraživanja.
Adv. Biosci. Biotehnologiji. 3 219-226 (2012).Adv. Biosci. Biotehnologiji. 3 219-226 (2012).Adv. Biosci. Biotehnologiji. 3 219-226 (2012).
11 Sterilnom tehnikom: Uses, Prednosti i komplikacija. Dostupno na:11 Sterilnom tehnikom: Uses, Prednosti i komplikacija. Dostupno na:
https://www.healthline.com/health/aseptic-technique. (Pristup: 2 siječanj 2018)
12 http://www.sop-standard-operating-procedure.com/(Accessed: 2. studenoga 2017)12 http://www.sop-standard-operating-procedure.com/(Accessed: 2. studenoga 2017)

9. 9
13 JI Moss, MB Padovi, PJ Hansen, Standardni operativni postupci (SOP) za kulturu stanica Sobe (2010).13 JI Moss, MB Padovi, PJ Hansen, Standardni operativni postupci (SOP) za kulturu stanica Sobe (2010).
14 Lee MKK, Dilq. Drug Development u kulturi stanica: Preslušavanje iz industrijske perspektive. J Bioequiv dostup. 6 96-11414 Lee MKK, Dilq. Drug Development u kulturi stanica: Preslušavanje iz industrijske perspektive. J Bioequiv dostup. 6 96-11414 Lee MKK, Dilq. Drug Development u kulturi stanica: Preslušavanje iz industrijske perspektive. J Bioequiv dostup. 6 96-11414 Lee MKK, Dilq. Drug Development u kulturi stanica: Preslušavanje iz industrijske perspektive. J Bioequiv dostup. 6 96-11414 Lee MKK, Dilq. Drug Development u kulturi stanica: Preslušavanje iz industrijske perspektive. J Bioequiv dostup. 6 96-114
(2014). doi: 10,4172 / jbb.10000188
15 Yamamoto Y. i Ochiya T. epitela matičnih stanica kulture: modeliranje ljudske bolesti i aplikacije za15 Yamamoto Y. i Ochiya T. epitela matičnih stanica kulture: modeliranje ljudske bolesti i aplikacije za
regenerativne medicine. Upala i regeneracija 37: 3 (2017),regenerativne medicine. Upala i regeneracija 37: 3 (2017),regenerativne medicine. Upala i regeneracija 37: 3 (2017),regenerativne medicine. Upala i regeneracija 37: 3 (2017),