4. •Гены – участки ДНК
•ДНК образует комплексы с белками и формирует хромосомы
•Каждая хромосома представлена 2-мя копиями – отцовской и
материнской
•Т.о. каждый ген также представлен 2-мя копиями (аллелями) –
отцовской и материнской
5. mat pat mat pat
Биаллельная экспрессия
Моноаллельная экспрессия
Экспрессия генов
9. Геномный импринтинг (ГИ) –
дифференциальная модификация отцовского и
материнского генетического материала в процессе
созревания гамет, следствием чего являются различия
в экспрессии родительских аллелей как в процессе
раннего эмбриогенеза, так и у взрослых особей
10. Волны эпигенетического репрограммирования генома
млекопитающих
ДНК примордиальных половых клеток значительно метилирована;
при миграции клеток в недифференцированные гонады в них наблюдается резкое
деметилирование;
реметилирование (метилирование de novo) ДНК половых клеток происходит на поздних
стадиях созревания.
После оплодотворения уровень метилирования остается высоким в импринтированных
генах, но резко снижается в неимпринтипрованных отцовских и материнских генах.
К стадии бластоцисты уровень метилирования ДНК повышается.
11.
12. Импринтированный ген - ген, который
дифференциально экспрессируется в зависимости от
материнского или отцовского происхождения.
Импринтированные гены в диплоидной клетке
млекопитающих обычно экспрессируются только с
одного аллеля.
mat pat
Эпигенотип (импринт) - совокупность модификаций, которые по-разному
маркируют родительские аллели и обеспечивают моноаллельный характер
экспрессии импринтированных генов на хромосомах отцовского или
материнского происхождения.
Пример:
Материнская аллель экспрессируется,
отцовская – нет (она импринтирована)
14. Характерные черты импринтированных генов
1. Кластеризация
Общие черты кластеров:
1) находятся на достаточно большом расстоянии;
2) наличие в кластере генов, экспрессирующихся только с
отцовской или материнской хромосомы;
3) наличие генов, которые продуцируют нетранслируемую РНК.
2. Консервативность импринтинга
Характер импринтинга генов H19, IGF2, p57KIP и SNRPN идентичен у
человека и мыши.
3. Асинхронность репликации ДНК импринтированных генов
Импринтированные гены имеют асинхронную репликацию, показанную в
кластерах импринтированных генов с использованием гибридизации in situ.
15. 4. Онтогенетическая и тканевая регуляция импринтинга.
KvLQT1 экспрессируется с материнской аллели во всех тканях кроме
сердца;
E6-AP - экспрессируется биаллельно во всех тканях, а в мозге - только с
материнской аллели;
IGF2 имеет отцовскую экспрессию в большинстве тканей, но обе аллели
экспрессируются в определенных структурах в течение развития мозга и в
зрелом состоянии. Кроме того, IGF2 в процессе развития экспрессируется с трех
различных промоторов.
5. Импринтированные гены кодируют как белки, так и
нетранслируемые РНК.
H19 кодирует РНК, аккумулирующуюся в больших количествах в течение
развития фетальных тканей мезодермального и эндодермального
происхождения.
XIST. Транскрипция гена с инактивированной отцовской Х-хромосомы в
экстраэмбриональных тканях заставляет предполагать регуляторную роль
импринтированной РНК.
IPW, PAR-SN, PAR1 и PAR5 экспрессируются с отцовской хромосомы и их
продуктом является нетранслируемая РНК.
16. Фенотипические проявления геномного импринтинга
Андрогенез (мужской партеногенез) -
диплоидный, хромосомы только
отцовского происхождения
Гиногенез (женский партеногенез)
диплоидный, хромосомы женского
происхождения
Пузырный занос
Эмбриональная тератома
19. Однородительская дисомия (ОРД=UPD) – наличие у
потомков в кариотипе фрагментов или целых хромосом
одного (материнского или отцовского) происхождения
Гетеродисомия – наследование потомком двух разных гомологов
от одного родителя
Изодисомия – наследование двух репликационных копий одной из
хромосом
47 типов ОРД
-44 типа ОРД по 22 аутосомам
материнская (mat) и отцовская (pat)
-3 типа по половым хромосомам
UPDХmat, UPDXpat, UPDXYpat
30. Andrew Z. Fire Craig C. Mello
Нобелевская премия
по физиологии и медицине
2006 год
"RNA interference – gene silencing by double-stranded RNA"
31. Предположение Fire & Mello:
Двуцепочечные РНК (dsRNA)
– запускающий механизм (триггер)
системы интерференции РНК.
32. Интерференция РНК
– это замолкание (сайленсинг) генов,
обеспечиваемое двуцепочечными
молекулами РНК (dsРНК).
Явление интерференции РНК открыто
в 1998 г. у Nematoda (Fire et al., 1998)
33. dsРНК в 10-100 раз более эффективно активируют
систему интерференции РНК, по сравнению с ssРНК.
Инъекция в C.elegans РНК мышечного белка
34. Fire A., Xu S.Q., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver
S.E., Mello C.C. Potent and specific genetic interference by
double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature
391, 806–811 (1998).
Эффект генетического сайленсинга
посредством интерференции РНК:
распространяется в тканях организма (!)
наследуется (!!!)
35. Механизм интерференции РНК
• при исследовании интерференции РНК у растений
обнаружены короткие молекулы РНК, маркирующие ген,
подверженный сайленсингу;
• в условиях in vitro воспроизведены биохимические
реакции интерференции РНК.
Малые интерферирующие РНК (siRNAs – short
interfering RNAs) – класс 21-22 нуклеотидных
двуцепочечных РНК, образующихся из более
длинных двуцепочечных РНК.
36. Общая схема регуляции генетической экспрессии за счет
интерференции РНК (по Novina, Sharp, 2004)
37. Функции siРНК
1.Сайленсинг мобильных генетических элементов;
2.Сайленсинг гетерохроматиновых повторов;
3.Сайленсинг генетического материала вирусного
происхождения;
4.Ограничение степени экспрессии гена в
определенных тканях.
38. При выделение фракций коротких РНК (19-25
нуклеотидов) из различных организмов обнаружен
еще один класс малых РНК – микроРНК.
МикроРНК (miRNAs - micro RNAs) – класс
19-25 нуклеотидных одноцепочечных РНК,
закодированных в уникальных генах
геномов многоклеточных организмов.
40. Функция miРНК
Обеспечивают сайленсинг различных генов,
обычно, за счет частично комплементарного
связывания с мРНК, в результате которого
блокируется ее трансляция.
• один тип miРНК может регулировать
трансляцию мРНК более 100 различных
генов;
• степень ингибирования зависит от
количества связывающихся miРНК (в
3’UTR мРНК содержится несколько
сайтов связывания).
41. • Продукт dsРНК,
закодированных в уникальных
генах геномов многоклеточных
организмов (>1% от всех генов
у человека);
• мРНК может не разрушаться;
• Один тип miРНК регулирует
разные гены.
• Продукт dsРНК,
образующихся в результате
транскрипции транспозонов,
гетерохроматиновых
повторов или генетического
материала вирусного
происхождения ;
• мРНК разрушается;
• Один тип siРНК обычно
регулирует только один тип
мРНК.
miРНК siРНК
Отличия miРНК и siРНК
42. • созданы библиотеки коротких РНК и ДНК-
векторов, кодирующих короткие РНК,
мишенями которых является около 8000 генов
генома человека;
• внедряется в практику терапевтическое
применение синтетических коротких РНК для
целенаправленного подавления генетической
экспрессии при некоторых заболеваниях.