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Efficiency of Green Fluorescent
                                      Protein –Targeted Mitochondrion
                                      Via Various Transfection Reagents
                                                    陳柏蓁
                                    彰化基督教醫院血管暨基因體研究中心
                                           長榮大學生物科技學系
                                           指導老師:張瑞芝 博士

  摘要:

     本實驗利用各種Transfection Reagent來測試C2細胞株(Osteosarcoma cell )在GFP Transfection細胞內
     的螢光轉染效率,並改變其DNA體積以及Transfection Reagent試劑體積,是否有加強螢光轉染效率。

   實驗材料與步驟:                                     Reagent        DNA:Reagent                 培養時間
                                         jetPEI                1:2                         24HR 、36HR
                                         jetPRIME              2:5                         24HR、36HR
     Plasmid DNA     Transfection
        Extract                          T-PRO                 1:2                         24HR、36HR
                                         Fungene HD            1:3                         24HR、36HR
                                         SBI                   1:1.6 、1:2.4 、1:3.2         17HR、24HR、48HR
                                         TurboFect             1:1 、 1:1.5 、 1:2 、 1:2.5   24HR 、 48HR

  結果:

   (一)Plasmid DNA電泳圖                                  (二)螢光效率以及存活率




                                                      (圖三):四種Transfection Reagent在   (圖四):將SBI Reagent做3種DNA與
(圖一):粒線體DNA片段所需      (圖二):Plasmid DNA 跑膠圖
                                                      流式細胞儀所檢測的螢光效率                  Reagent比例,分別為2.5:4、2.5:6、
的酵素
                                                                                     2.5:8。
  (三)六種 Transfection 螢光圖




                                (圖六):將jetPRIME做3個時間點觀察,分           (圖六):SBI Reagent培養24HR後觀察,可以
                                別為4、8、24小時,由此可觀察到8HR螢              發現其存活率還還是非常高,雖然圖片螢
 (圖五):依照各廠商的Protocol所搭配的比       光效率跟存活率比其他時段更佳                     光效率並沒有特別高,但是做出螢光效率
 例,可見螢光效率最好的為jetPRIME,而                                            可得知其螢光效率比其他試劑來的高。
 存活率最高者為Fungene HD


  討論:
    本實驗根據6種Reagent分別以不同比例的DNA以及Reagent,再以培養時間的不同,測試C2骨瘤母細胞Transfection的效率。我們先
    測試其4種Transfection Reagent,發現4種存活率沒有特別的好,而在螢光效率方面,jetPRIME比其他3種試劑要來的高。我們又
    找了兩種試劑分別測試在Protocol所建議的試劑劑量以及培養時間,發現SBI在24小時之後,其螢光效率以及存活率相對的比其他
    五種試劑高。
  致謝:
    感謝學校提供機會到彰化基督教醫院的血管暨基因體研究中心實習,謝謝瑞芝學姐指導。

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