陳柏蓁
- 1. Efficiency of Green Fluorescent
Protein –Targeted Mitochondrion
Via Various Transfection Reagents
陳柏蓁
彰化基督教醫院血管暨基因體研究中心
長榮大學生物科技學系
指導老師:張瑞芝 博士
摘要:
本實驗利用各種Transfection Reagent來測試C2細胞株(Osteosarcoma cell )在GFP Transfection細胞內
的螢光轉染效率,並改變其DNA體積以及Transfection Reagent試劑體積,是否有加強螢光轉染效率。
實驗材料與步驟: Reagent DNA:Reagent 培養時間
jetPEI 1:2 24HR 、36HR
jetPRIME 2:5 24HR、36HR
Plasmid DNA Transfection
Extract T-PRO 1:2 24HR、36HR
Fungene HD 1:3 24HR、36HR
SBI 1:1.6 、1:2.4 、1:3.2 17HR、24HR、48HR
TurboFect 1:1 、 1:1.5 、 1:2 、 1:2.5 24HR 、 48HR
結果:
(一)Plasmid DNA電泳圖 (二)螢光效率以及存活率
(圖三):四種Transfection Reagent在 (圖四):將SBI Reagent做3種DNA與
(圖一):粒線體DNA片段所需 (圖二):Plasmid DNA 跑膠圖
流式細胞儀所檢測的螢光效率 Reagent比例,分別為2.5:4、2.5:6、
的酵素
2.5:8。
(三)六種 Transfection 螢光圖
(圖六):將jetPRIME做3個時間點觀察,分 (圖六):SBI Reagent培養24HR後觀察,可以
別為4、8、24小時,由此可觀察到8HR螢 發現其存活率還還是非常高,雖然圖片螢
(圖五):依照各廠商的Protocol所搭配的比 光效率跟存活率比其他時段更佳 光效率並沒有特別高,但是做出螢光效率
例,可見螢光效率最好的為jetPRIME,而 可得知其螢光效率比其他試劑來的高。
存活率最高者為Fungene HD
討論:
本實驗根據6種Reagent分別以不同比例的DNA以及Reagent,再以培養時間的不同,測試C2骨瘤母細胞Transfection的效率。我們先
測試其4種Transfection Reagent,發現4種存活率沒有特別的好,而在螢光效率方面,jetPRIME比其他3種試劑要來的高。我們又
找了兩種試劑分別測試在Protocol所建議的試劑劑量以及培養時間,發現SBI在24小時之後,其螢光效率以及存活率相對的比其他
五種試劑高。
致謝:
感謝學校提供機會到彰化基督教醫院的血管暨基因體研究中心實習,謝謝瑞芝學姐指導。