88 “Оптический журнал”, 78, 1, 2011
В настоящее время микроскопия препаратов
является широко распространенной методикой,
применяемой в практике микробиологических
исследований [1]. Эффективность микроско-
пической диагностики зависит в значительной
степени от многих факторов: от оптических
свойств микроскопов, качества используемых
красителей, способов подготовки препаратов и
практических навыков врача-микробиолога.
До недавнего времени в Российской Фе-
дерации не выпускались микроскопы с опти-
ко-цифровым каналом наблюдения. На ОАО
“ЛОМО” разработано новое поколение микро-
скопов – микровизоров с особой системой на-
блюдения, регистрации и обработки микроизо-
бражений. На экране дисплея микровизора ото-
бражается цветное увеличенное изображение
препарата, полученное в проходящем свете (по
методу светлого поля, темного поля, либо с по-
мощью фазового контраста). Оценку препарата
можно проводить в режиме реального времени
как на экране микровизора, так и на экране
компьютера. На карту памяти фиксируется за-
пись изображения.
Бактериоскопия является субъективным ме-
тодом диагностики и окончательное заключе-
ние полностью зависит от опыта исследователя
[2]. Микровизоры обладают рядом преимуществ
по сравнению с классическими микроскопами
и открывают пути для стандартизации и по-
вышения эффективности лабораторных иссле-
дований.
Мгновенное получение цифрового изображе-
ния в поле зрения позволяет оценивать микро-
скопическую картину самостоятельно или кол-
легиально, а также, используя цифровые сети,
передавать данные в любую страну мира.
Наличие цифровой системы документации
микроизображений позволяет осуществлять
контроль субъективного этапа микроскопиче-
ской диагностики. Исследователь может создать
библиотеку изображений на каждого пациента
и в зависимости от принятого диагностическо-
го решения сопроводить каждое изображение
примечаниями: отметить диагностически зна-
чимые элементы в препарате, в том числе воз-
будителя заболевания.
Наиболее распространенным методом, ис-
пользуемым для оценки качества бактерио-
скопической диагностики, является профес-
сиональное тестирование. Наличие доступной
базы микроизображений позволяет сравнивать
исследуемый образец с контрольными препа-
ратами.
Целью данной работы явилась оценка воз-
можности использования модернизированной
модели микровизора медицинского μVizo-103
для микроскопической диагностики заболева-
ний мочеполовой системы.
Для подготовки панели микрофотографий
были выбраны препараты различного типа: не-
окрашенные (витальные) и окрашенные (фик-
сированные). Окрашивание проводилось в со-
ответствии со стандартными методиками с ис-
УДК 681.723
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МИКРОВИЗОРОВ “ЛОМО” В МИКРОБИОЛОГИИ
© 2011 г. А. М. Иванов, доктор мед. наук; А. Б. Криворучко, канд. мед. наук;
Н. В. Раздольская, канд. биол. наук; О. В. Гаврилова, канд. биол. наук;
Д. В. Заславский, доктор мед. наук
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург
E-mail: iamvma@mail.ru
Рассматривается вопрос о преимуществе проведения микроскопических исследова-
ний с использованием современных отечественных оптических приборов микровизо-
ров (ОАО “ЛОМО”). Продемонстрированы примеры анализа нативных и окрашенных
по стандартным диагностическим методикам препаратов, подготовленных на основе
клинических образцов.
Ключевые слова: микровизор, микробиология.
Коды OCIS: 100.2960, 110.0180
Поступила в редакцию 14.05.2010
89“Оптический журнал”, 78, 1, 2011
пользованием 1% метиленового синего, а также
по методу Грама.
В качестве исследуемых клинических образ-
цов у мужчин использовался соскоб со слизи-
стой уретры и секрет предстательной железы,
у женщин – соскоб со слизистой влагалища и
соскоб со слизистой канала шейки матки. Ка-
чество витальных препаратов оценивалось на
примере Trichomonas vaginalis и Candida spp.
В ходе работы была подготовлена коллекция
цифровых микрофотографий с применением
различных настроек параметров изображений.
Для получения слайдов высокого качества про-
водили регулировку по следующим параме-
трам: яркости, контрастности, насыщенности,
резкости.
Метод микроскопии нативных препаратов
широко используется в микробиологических
лабораториях для диагностики различных за-
болеваний урогенитального тракта. Для оцен-
ки общей морфологии используется объектив с
увеличением 40×
, позволяющий быстро просмо-
треть достаточно большую площадь. После об-
наружения объекта требуется более детальный
его анализ, поэтому необходим переход к боль-
шему увеличению.
Микровизор оснащен программой, позво-
ляющей осуществить дополнительное цифровое
увеличение изображения без смены объектива.
На рис. 1а, б, в приведены микроизображения
нативного препарата – дрожжеподобного гриба
Candida spp. при различных цифровых увеличе-
ниях (1×
; 2×
; 4×
) при следующих настройках: яр-
кость 6,7; контрастность 1; насыщенность 1.
На примере возбудителя трихомониаза по-
казаны изображения различных морфологиче-
ских форм T. vaginalis, выделенных из клини-
ческого материала (рис. 1). Типичные клетки
грушевидной формы со жгутиками подвижные
выделены от пациентки с острой формой трихо-
мониаза (рис. 1г). Другие (рис. 1д) – округлой
формы от больного с хронической формой. Вид-
но, что клетки данной формы отличаются от
типичных форм по следующим признакам: гра-
нулированностью цитоплазмы, отсутствию под-
вижности и размерами.
Возможность дополнения микровизора тем-
нопольным конденсором или дополнительным
фазово-контрастным приспособлением значи-
тельно повышает качество микроскопической
диагностики воспалительных заболеваний мо-
чеполовой системы. Так на рис. 1 (е, ж) нагляд-
но продемонстрированы особенности грушевид-
ных и округлых клеток, выявленных с исполь-
зованием темнопольного устройства КОН-7Т,
устанавливаемого на микровизор. Это позволя-
ет увидеть характерные элементы жгутикового
аппарата (подвижные и неподвижные жгутики,
ундулирующая мембрана, аксостиль). Зареги-
стрировать изображение подвижных грушевид-
ных форм сложно, но парализованные жгутики
округлых форм отчетливо видны. У округлых
форм отсутствует аксостиль и ундулирующая
мембрана.
Следует отметить, что некоторые методики
подразумевают количественный учет клеток, с
последующим определением их линейного раз-
мера. Микровизор обеспечивает данные функ-
ции. Учет количества микроорганизмов в поле
зрения удобно проводить при включении режи-
ма “работа с указкой”. С помощью этой функ-
ции можно определять соотношение различ-
ных морфологических форм трихомонад (гру-
шевидных к округлым).
Крайне удобна в микровизоре функция оп-
ределения линейных размеров объектов, кото-
рая не требует установки дополнительного про-
граммного обеспечения. С помощью данной
функции измеряются размеры объекта по гори-
зонтали (Х), вертикали (Y), по диагонали пря-
моугольника X–Y (L), а также площадь пря-
моугольника (Sпр.) и вписанного в него площадь
овала (Sов.). Каждое изображение сопровожда-
ется учетной записью по исследуемому объекту.
Метод окраски препаратов 1% метиленовым
синим является общераспространенным и ши-
роко применяется в микробиологической прак-
тике [3]. На рис. 2 (а, б) продемонстрированы
клинические препараты из влагалища женщи-
ны с выявленным возбудителем трихомониа-
за – T. vaginalis. Данный возбудитель трудно
диагностируется при окраске метиленовым си-
ним. С использованием микровизора удалось
показать основные цитоморфологические при-
знаки, необходимые для его идентификации:
зернистая цитоплазма, продолговатое ядро в
центре клетки.
На рис. 2в, г показаны клинические пре-
параты отделяемого уретры мужчины с выяв-
ленным возбудителем гонореи – N. gonorrhoea.
Этот возбудитель характеризуется особой
бобовидной формой клеток, которые распола-
гаются попарно вогнутыми сторонами друг к
другу [2].
Согласно руководящим документам по диа-
гностике гонореи, необходимо подтверждение
диагноза с использованием окраски по Граму.
Положительный диагноз ставится на основа-
(д)
(а)
(е)
(б)
(ж)
(в)
(г)
Рис.  1. Неокрашенные, витальные препараты. Увеличение объектива 40×
. а, б, в – отделяемое
влагалища с выявлением дрожжеподобных грибов рода Candida spр., цифровое увеличение 1×
, 2×
и
4×
; г, е – грушевидная форма T. vaginalis в светлом и темном поле; д, ж – округлая форма T. vaginalis
в светлом и темном поле.
(а) (б)
(в) (г)
Рис. 2. Препараты, окрашенные 1% метиленовым синим. Увеличение объектива 100×
. а,
б – отделяемое влагалища с выявлением Trichomonas vaginalis; в, г – отделяемое уретры с
выявлением Neisseria gonorrhoea.
Рис. 3. Окрашенные препараты по методу Грама. Увеличение объектива 100×
. а – грамотрицательные
кокки, Acinetobacterspр.;б–грамотрицательныепалочки,Pseudomonasspр.;в–грамположительные
кокки, Staphylococcus spр.; г – грамотрицательные диплококки, Neisseria gonorrhoea.
(а) (б)
(в) (г)
90 “Оптический журнал”, 78, 1, 2011
нии выявления грамотрицательных внутри-
клеточных и внеклеточно расположенных ди-
плококков (рис. 3г). Окрашивание по методу
Грама широко используется в микробиологии.
Использование микровизора позволяет точно
проводить дифференцировку различных грам-
отрицательных (рис. 3а, б) и грамположитель-
ных (рис. 3в) микроорганизмов благодаря пра-
вильно настроенной цветопередачи.
В случаях, когда наблюдается типичная
микроскопическая картина, возбудитель легко
идентифицируется или наоборот – нет сомне-
ний в его отсутствии, микроскопист производит
съемку соответствующих полей зрения и сохра-
няет их на карте памяти микровизора в папке
с номером пробы пациента [2]. Если у специали-
ста возникли сомнения в правильности оценки
увиденного, то он привлекает коллег для со-
вместного просмотра препарата.
После выполнения серии снимков и при со-
хранении их на внешний носитель расширяется
круг лиц, способных оценить материал. В ко-
нечном итоге, после микроскопической оцен-
ки поступившего в лабораторию клинического
материала для каждого пациента должна быть
создана база электронных изображений, позво-
ляющих стороннему эксперту ретроспективно
оценивать качество микроскопической диаг-
ностики в данной лаборатории.
Таким образом, использование микровизора
позволяет добиться ряда преимуществ по срав-
нению с традиционными микроскопическими
устройствами:
мгновенное получение цифрового изобра-–
жения, соответствующего по своим характери-
стикам оригиналу;
цифровая документация изображений и–
решение проблемы субъективности микроско-
пирования;
возможность коллегиальной оценки ми-–
кроскопической картины;
простота и удобство проведения экспертно-–
го профессионального тестирования;
возможность “цифрового” увеличения изо-–
бражения;
удобство и простота определения соотно-–
шения размеров различных морфологических
форм;
светодиодная система освещения, позволя-–
ющая проводить тонкую регулировку яркости;
щадящий режим микроскопирования (сни-–
жение зрительного утомления исследователя).
Микровизоры, в отличие от цифровых си-
стем визуализации (микроскоп + компьютер),
более компактны, что позволяет размещать их
в условиях небольших лабораторий и упрощает
режим дезинфекции.
Преимуществом микровизора перед класси-
ческой микроскопической техникой является
возможность создания цифровой базы изобра-
жений, сопровождаемых текстовыми приме-
чаниями и отмеченным на изображении возбу-
дителем.
При использовании микровизора наблюдает-
ся уменьшение площади поля зрения по сравне-
нию с обычным световым микроскопом, но это
не оказывает существенного влияния на резуль-
тативность исследования.
В результате комплексной оценки было сде-
лано заключение о перспективности использо-
вания микровизора для качественной микро-
скопической диагностики заболеваний уроге-
нитального тракта.
ЛИТЕРАТУРА
1. Савичева А.М., Соколовский Е.В., Домейка М.
Краткое руководство по микроскопической ди-
агностике инфекций, передаваемых половым
путем. СПб.: Фолиант, 2004. 125 с.
2. Криворучко А.Б. Совершенствование методов кон-
троля качества микробиологической диагностики
инфекций, передаваемых преимущественно по-
ловым путем // Автореф. канд. дис. СПб.: ВМедА,
2008. 24 с.
3. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бакте-
риальных урогенитальных инфекций. М.: Меди-
цинская книга, 2003. 336 с.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МИКРОВИЗОРОВ “ЛОМО” В МИКРОБИОЛОГИИ

  • 1.
    88 “Оптический журнал”,78, 1, 2011 В настоящее время микроскопия препаратов является широко распространенной методикой, применяемой в практике микробиологических исследований [1]. Эффективность микроско- пической диагностики зависит в значительной степени от многих факторов: от оптических свойств микроскопов, качества используемых красителей, способов подготовки препаратов и практических навыков врача-микробиолога. До недавнего времени в Российской Фе- дерации не выпускались микроскопы с опти- ко-цифровым каналом наблюдения. На ОАО “ЛОМО” разработано новое поколение микро- скопов – микровизоров с особой системой на- блюдения, регистрации и обработки микроизо- бражений. На экране дисплея микровизора ото- бражается цветное увеличенное изображение препарата, полученное в проходящем свете (по методу светлого поля, темного поля, либо с по- мощью фазового контраста). Оценку препарата можно проводить в режиме реального времени как на экране микровизора, так и на экране компьютера. На карту памяти фиксируется за- пись изображения. Бактериоскопия является субъективным ме- тодом диагностики и окончательное заключе- ние полностью зависит от опыта исследователя [2]. Микровизоры обладают рядом преимуществ по сравнению с классическими микроскопами и открывают пути для стандартизации и по- вышения эффективности лабораторных иссле- дований. Мгновенное получение цифрового изображе- ния в поле зрения позволяет оценивать микро- скопическую картину самостоятельно или кол- легиально, а также, используя цифровые сети, передавать данные в любую страну мира. Наличие цифровой системы документации микроизображений позволяет осуществлять контроль субъективного этапа микроскопиче- ской диагностики. Исследователь может создать библиотеку изображений на каждого пациента и в зависимости от принятого диагностическо- го решения сопроводить каждое изображение примечаниями: отметить диагностически зна- чимые элементы в препарате, в том числе воз- будителя заболевания. Наиболее распространенным методом, ис- пользуемым для оценки качества бактерио- скопической диагностики, является профес- сиональное тестирование. Наличие доступной базы микроизображений позволяет сравнивать исследуемый образец с контрольными препа- ратами. Целью данной работы явилась оценка воз- можности использования модернизированной модели микровизора медицинского μVizo-103 для микроскопической диагностики заболева- ний мочеполовой системы. Для подготовки панели микрофотографий были выбраны препараты различного типа: не- окрашенные (витальные) и окрашенные (фик- сированные). Окрашивание проводилось в со- ответствии со стандартными методиками с ис- УДК 681.723 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МИКРОВИЗОРОВ “ЛОМО” В МИКРОБИОЛОГИИ © 2011 г. А. М. Иванов, доктор мед. наук; А. Б. Криворучко, канд. мед. наук; Н. В. Раздольская, канд. биол. наук; О. В. Гаврилова, канд. биол. наук; Д. В. Заславский, доктор мед. наук Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург E-mail: iamvma@mail.ru Рассматривается вопрос о преимуществе проведения микроскопических исследова- ний с использованием современных отечественных оптических приборов микровизо- ров (ОАО “ЛОМО”). Продемонстрированы примеры анализа нативных и окрашенных по стандартным диагностическим методикам препаратов, подготовленных на основе клинических образцов. Ключевые слова: микровизор, микробиология. Коды OCIS: 100.2960, 110.0180 Поступила в редакцию 14.05.2010
  • 2.
    89“Оптический журнал”, 78,1, 2011 пользованием 1% метиленового синего, а также по методу Грама. В качестве исследуемых клинических образ- цов у мужчин использовался соскоб со слизи- стой уретры и секрет предстательной железы, у женщин – соскоб со слизистой влагалища и соскоб со слизистой канала шейки матки. Ка- чество витальных препаратов оценивалось на примере Trichomonas vaginalis и Candida spp. В ходе работы была подготовлена коллекция цифровых микрофотографий с применением различных настроек параметров изображений. Для получения слайдов высокого качества про- водили регулировку по следующим параме- трам: яркости, контрастности, насыщенности, резкости. Метод микроскопии нативных препаратов широко используется в микробиологических лабораториях для диагностики различных за- болеваний урогенитального тракта. Для оцен- ки общей морфологии используется объектив с увеличением 40× , позволяющий быстро просмо- треть достаточно большую площадь. После об- наружения объекта требуется более детальный его анализ, поэтому необходим переход к боль- шему увеличению. Микровизор оснащен программой, позво- ляющей осуществить дополнительное цифровое увеличение изображения без смены объектива. На рис. 1а, б, в приведены микроизображения нативного препарата – дрожжеподобного гриба Candida spp. при различных цифровых увеличе- ниях (1× ; 2× ; 4× ) при следующих настройках: яр- кость 6,7; контрастность 1; насыщенность 1. На примере возбудителя трихомониаза по- казаны изображения различных морфологиче- ских форм T. vaginalis, выделенных из клини- ческого материала (рис. 1). Типичные клетки грушевидной формы со жгутиками подвижные выделены от пациентки с острой формой трихо- мониаза (рис. 1г). Другие (рис. 1д) – округлой формы от больного с хронической формой. Вид- но, что клетки данной формы отличаются от типичных форм по следующим признакам: гра- нулированностью цитоплазмы, отсутствию под- вижности и размерами. Возможность дополнения микровизора тем- нопольным конденсором или дополнительным фазово-контрастным приспособлением значи- тельно повышает качество микроскопической диагностики воспалительных заболеваний мо- чеполовой системы. Так на рис. 1 (е, ж) нагляд- но продемонстрированы особенности грушевид- ных и округлых клеток, выявленных с исполь- зованием темнопольного устройства КОН-7Т, устанавливаемого на микровизор. Это позволя- ет увидеть характерные элементы жгутикового аппарата (подвижные и неподвижные жгутики, ундулирующая мембрана, аксостиль). Зареги- стрировать изображение подвижных грушевид- ных форм сложно, но парализованные жгутики округлых форм отчетливо видны. У округлых форм отсутствует аксостиль и ундулирующая мембрана. Следует отметить, что некоторые методики подразумевают количественный учет клеток, с последующим определением их линейного раз- мера. Микровизор обеспечивает данные функ- ции. Учет количества микроорганизмов в поле зрения удобно проводить при включении режи- ма “работа с указкой”. С помощью этой функ- ции можно определять соотношение различ- ных морфологических форм трихомонад (гру- шевидных к округлым). Крайне удобна в микровизоре функция оп- ределения линейных размеров объектов, кото- рая не требует установки дополнительного про- граммного обеспечения. С помощью данной функции измеряются размеры объекта по гори- зонтали (Х), вертикали (Y), по диагонали пря- моугольника X–Y (L), а также площадь пря- моугольника (Sпр.) и вписанного в него площадь овала (Sов.). Каждое изображение сопровожда- ется учетной записью по исследуемому объекту. Метод окраски препаратов 1% метиленовым синим является общераспространенным и ши- роко применяется в микробиологической прак- тике [3]. На рис. 2 (а, б) продемонстрированы клинические препараты из влагалища женщи- ны с выявленным возбудителем трихомониа- за – T. vaginalis. Данный возбудитель трудно диагностируется при окраске метиленовым си- ним. С использованием микровизора удалось показать основные цитоморфологические при- знаки, необходимые для его идентификации: зернистая цитоплазма, продолговатое ядро в центре клетки. На рис. 2в, г показаны клинические пре- параты отделяемого уретры мужчины с выяв- ленным возбудителем гонореи – N. gonorrhoea. Этот возбудитель характеризуется особой бобовидной формой клеток, которые распола- гаются попарно вогнутыми сторонами друг к другу [2]. Согласно руководящим документам по диа- гностике гонореи, необходимо подтверждение диагноза с использованием окраски по Граму. Положительный диагноз ставится на основа-
  • 3.
    (д) (а) (е) (б) (ж) (в) (г) Рис.  1. Неокрашенные, витальныепрепараты. Увеличение объектива 40× . а, б, в – отделяемое влагалища с выявлением дрожжеподобных грибов рода Candida spр., цифровое увеличение 1× , 2× и 4× ; г, е – грушевидная форма T. vaginalis в светлом и темном поле; д, ж – округлая форма T. vaginalis в светлом и темном поле.
  • 4.
    (а) (б) (в) (г) Рис.2. Препараты, окрашенные 1% метиленовым синим. Увеличение объектива 100× . а, б – отделяемое влагалища с выявлением Trichomonas vaginalis; в, г – отделяемое уретры с выявлением Neisseria gonorrhoea. Рис. 3. Окрашенные препараты по методу Грама. Увеличение объектива 100× . а – грамотрицательные кокки, Acinetobacterspр.;б–грамотрицательныепалочки,Pseudomonasspр.;в–грамположительные кокки, Staphylococcus spр.; г – грамотрицательные диплококки, Neisseria gonorrhoea. (а) (б) (в) (г)
  • 5.
    90 “Оптический журнал”,78, 1, 2011 нии выявления грамотрицательных внутри- клеточных и внеклеточно расположенных ди- плококков (рис. 3г). Окрашивание по методу Грама широко используется в микробиологии. Использование микровизора позволяет точно проводить дифференцировку различных грам- отрицательных (рис. 3а, б) и грамположитель- ных (рис. 3в) микроорганизмов благодаря пра- вильно настроенной цветопередачи. В случаях, когда наблюдается типичная микроскопическая картина, возбудитель легко идентифицируется или наоборот – нет сомне- ний в его отсутствии, микроскопист производит съемку соответствующих полей зрения и сохра- няет их на карте памяти микровизора в папке с номером пробы пациента [2]. Если у специали- ста возникли сомнения в правильности оценки увиденного, то он привлекает коллег для со- вместного просмотра препарата. После выполнения серии снимков и при со- хранении их на внешний носитель расширяется круг лиц, способных оценить материал. В ко- нечном итоге, после микроскопической оцен- ки поступившего в лабораторию клинического материала для каждого пациента должна быть создана база электронных изображений, позво- ляющих стороннему эксперту ретроспективно оценивать качество микроскопической диаг- ностики в данной лаборатории. Таким образом, использование микровизора позволяет добиться ряда преимуществ по срав- нению с традиционными микроскопическими устройствами: мгновенное получение цифрового изобра-– жения, соответствующего по своим характери- стикам оригиналу; цифровая документация изображений и– решение проблемы субъективности микроско- пирования; возможность коллегиальной оценки ми-– кроскопической картины; простота и удобство проведения экспертно-– го профессионального тестирования; возможность “цифрового” увеличения изо-– бражения; удобство и простота определения соотно-– шения размеров различных морфологических форм; светодиодная система освещения, позволя-– ющая проводить тонкую регулировку яркости; щадящий режим микроскопирования (сни-– жение зрительного утомления исследователя). Микровизоры, в отличие от цифровых си- стем визуализации (микроскоп + компьютер), более компактны, что позволяет размещать их в условиях небольших лабораторий и упрощает режим дезинфекции. Преимуществом микровизора перед класси- ческой микроскопической техникой является возможность создания цифровой базы изобра- жений, сопровождаемых текстовыми приме- чаниями и отмеченным на изображении возбу- дителем. При использовании микровизора наблюдает- ся уменьшение площади поля зрения по сравне- нию с обычным световым микроскопом, но это не оказывает существенного влияния на резуль- тативность исследования. В результате комплексной оценки было сде- лано заключение о перспективности использо- вания микровизора для качественной микро- скопической диагностики заболеваний уроге- нитального тракта. ЛИТЕРАТУРА 1. Савичева А.М., Соколовский Е.В., Домейка М. Краткое руководство по микроскопической ди- агностике инфекций, передаваемых половым путем. СПб.: Фолиант, 2004. 125 с. 2. Криворучко А.Б. Совершенствование методов кон- троля качества микробиологической диагностики инфекций, передаваемых преимущественно по- ловым путем // Автореф. канд. дис. СПб.: ВМедА, 2008. 24 с. 3. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бакте- риальных урогенитальных инфекций. М.: Меди- цинская книга, 2003. 336 с.