Roma 16.12.2017 Biomarcatori nella Malattia di Huntington: l’importanza dei predittori ricavabili da sangue periferico. “Il cammino della speranza: novità sul silenziamento genico e i molti altri percorsi di ricerca nella Malattia di Huntington”

1. Biomarcatori
• caratterizzare le diverse condizioni
pre-manifesti, pazienti e soggetti sani di controllo
• monitorare la progressione della malattia e
l’efficacia dei trattamenti (predittori)
• trovare quadri periferici che possono
‘rispecchiare’ alterazioni cerebrali,
(contribuiscono al meccanismo della malattia e
possono quindi diventare bersagli terapeutici)

2. Predittori clinici
Studi Track-HD
• Segni neurologici
• Segni cognitivi-comportamentali
• Segni di neuroimmagine
• Predittori biologici (sangue, liquor)

3. Preclinical
testing
Phase I Phase II Phase III Regulatory
approval
12 years
A
Phase II Phase III Regulatory
approval
7.5 years
B
Phase II Phase III Regulatory
approval
6-7 years (approval for more than 1 disease)
C
Phase III
Companion Clinical Trial

4. Segni precoci di alterazioni dello stato
psichico
• Test psicologici predittori di tendenze
suicidiarie
• Arruolati 21 soggetti

5. Biomarcatori biologici «periferici»
• Plasma
• Leucociti circolanti

6. Piccoli RNA non-codificanti
• Micro-RNA (miRNA o anche miR con un numero
che li designa)
• snoRNA (piccolo RNA nucleolare)
• Attualmente molto studiati per caratterizzare
diverse condizioni morbose
• Sono facilmente accessibili come biormacatori
(basta fare un prelievo di sangue)

7. Figure 1. microRNA deregulated in a specific way in patients with Huntington disease (HD)
compared with healthy subjects (HS) and with schizophrenic patients (SZ)
HD HS SZ HD HS SZ
Figure 2. snoRNA dysregulated in a specific way in patients with Huntington disease (HD) compared
with healthy subjects (HS) and with schizophrenic patients (SZ)
HD HS SZ HD HS SZ

8. Risultati e Progetti
• Sono stati identificati due miR e due snoRNA che risultano
differentemente espressi tra pazienti con corea e soggetti
di controllo
• Il gruppo di controllo con pazienti schizofrenici è stato
incluso per escludere l’effetto di farmaci (i pazienti
psichiatrici e i pazienti con corea condividono schemi
terapeutici)
• E’ in corso una validazione di questi dati con una metodica
innovativa (droplet PCR) mirata sui piccoli RNA già
individuati aggiungendo il gruppo dei soggetti pre-manifesti
per valutare il potere «predittivo» di questo risultato

9. Biomarcatori biologici «periferici»
• L’ huntingtina (HTT) è espressa in quasi tutti i
tessuti
• La sua variante mutata induce stress
ossidativo e danno del DNA in molte cellule
dell’organismo
• Le conseguenze sulle cellule di questi danni
dipendono dal tipo di tessuto oltre che da
concomitanti fattori genetici ed ambientali

10. E’ possibile visualizzare il danno al DNA?
Neurone
di Controllo
Neurone
HD
pH2AXGFP

11. E’ possibile visualizzare il danno al DNA?
Fibroblasto
di Controllo
Fibroblasto
HD

12. E’ possibile visualizzare il danno al DNA?
Linfociti
di Controllo
Linfociti
HD
pH2AX

13. Se misuriamo il danno del DNA con due diversi
metodi si nota che è nettamente aumentato in HD,
anche nei Premanifesti (in assenza di malattia)
0
2
4
6
8
10
12
14
Controlli HD Pre
sintomatici
HD
sintomatici
pH2AX
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
Controlli HD Pre
sintomatici
HD
sintomatici
Lunghezza del Telomero
pH2AXindex
-1/TS
LINFOCITI da sangue PERIFERICO

14. Il Marcatore di Danno pH2AX è più alto nei pazienti in
cui la malattia progredisce iù velocemente
5.9
15
3.6
18
0
5
10
15
20
25
Basso indice Alto indice
Variazione del punteggio UHDRS dopo 3 anni dal dosaggio di pH2AX

15. Il Marcatore di Danno pH2AX è più alto nei pazienti in
cui la malattia progredisce iù velocemente
Variazione del punteggio UHDRS dopo 3 anni dal I prelievo

16. I valori di pH2AX aumentano progressivamente fino
alla manifestazione dei sintomi
MESI
Variazione del pH2AX durante 3 anni
Inizio della sintomatologia
conclamata