Inmunologia reacciones-de precipitacion

1. Reacciones de precipitación I
Mata Vite Carlos
6QV1 E:4
INSTITUTO POLITÉCNICO
NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO
DEPARTAMENTO DE INMUNOLOGÍA
LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA

2. Reacción Antígeno-
Anticuerpo
 Unión molecular reversible específica entre el
epítopo del Ag y la región hipervariable del Ac
por medio de interacciones no covalentes.
◦ Mayor complementariedad = Mayores interacciones.
 Definida termodinámicamente por
◦ 𝐾𝐴 =
[𝐴𝑔−𝐴𝑐]
[𝐴𝑔][𝐴𝑐]
Ag+Ac Ag-Ac
Afectada por: pH, Tiempo, Temperatura, [Relativa] y Fuerza iónica

3. Reacción Antígeno-
Anticuerpo
 Depende de tres factores
◦ Afinidad
◦ Avidez
◦ Especificidad
 Ocurre en dos etapas
◦ Primaria: Formación del complejo Ag-Ac
◦ Secundaria: Visualización del complejo

4. Técnicas de precipitación
 Reacción de precipitación clásica
◦ Efectuada en medio líquido
◦ Baja sensibilidad
◦ Cuantitativa
◦ []Constante de Ac
Zona de equivalencia
Figura 1. Curva de precipitación teórica

5. Técnicas de precipitación
 Inmunodifusión simple (Técnica de
Mancini)
◦ Ac embebido en agar
◦ Ag difunde desde el pozo
◦ Formación de halo de precipitación
◦ Cuantitativo
Figura 2. Inmunodifusión radial de Mancini

6. Técnicas de precipitación
 Inmunodifusión doble (Técnica de Ouchterlony)
◦ 1 pozo central con Ac
◦ Pozos de Ag alrededor del Ac
◦ Relación inmunológica entre 2 Ag
◦ Estimación de pureza de Ag o Ac
◦ Baja sensibilidad
Figura 3. Patrones de precipitación identificados en la inmunodifusión doble de Ouchterlon

7. PROCEDIMIENTO
Diluciones 1:2 del Ag
hasta 1:1024.
…
1. Precipitación en medio líquido
Dividir 12 capilares en
tres partes iguales.
Llenar 1/3 del capilar
con el Ag.
Llenar otro 1/3 del
capilar con el Ac y
centrar.
Ag: Ovoalbúmina
Ac: Anti Ovoalbúmina
Colocar en el soporte
Repetir con el resto de
diluciones, testigo de
Ac y testigo de Ag
Temperatura ambiente
24-48hrs.

8. Resultados de P.P. en medio
Liquido
Dilución [OvoAlb]
(mg/mL)
P.P
(mm)
1:2 15 3
1:4 7.5 5
1:8 3.75 8
1:16 1.8 9
1:32 0.9 8
1:64 0.45 7
1:128 0.22 6
1:256 0.11 6
1:512 0.05 5
1:1024 0.025 3
Figura 4. Resultados prácticos del equipo 4 de la
precipitación en capilar.
Tabla 1. Datos prácticos
obtenidos de la precipitación en
capilar del E:4

9. Curva de precipitación
0
2
4
6
8
10
0 2 4 6 8 10 12 14
Precipitación
(mm)
Ovoalbúmina (mg/mL)
0
2
4
6
8
10
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Precipitación
(mm)
Número de tubo
Figura 5 y 6. Curvas de precipitación en medio líquido obtenidas por el equipo

10. PROCEDIMIENTO
 II. Técnica de Ouchterlony.
Preparar porta con agarosa 1%
Colocar Ag y Ac en los pozos de esta maner
Incubar en cámara humeda 24 a 48 hrs.

11. Resultados de Ouchterlony
SHT
ASH
Gamm
aG
ASH
ASH
ASH
Gamm
aG
SHT
Figuras 7 y 8. Resultados prácticos de la T. de Ouchterlony

12. PROCEDIMIENTO
 Técnica de Mancini.
Preparar porta con agarosa 1%
+ 2-3% del antisuero. Colocar 10 uL de las sol. de Albumina
sérica humana (ASH) y el problema de
ASH.
Incubar 24-48hrs a
temperatura ambiente en
cámara húmeda

13. Resultados Mancini
7mm
7mm
5mm 5mm
3mm
4mm
3mm
4mm
6mm
5mm
Figuras 9 y 10. Resultados prácticos de la T. de Mancini

14. Resultados Mancini
y = 22.504x + 3.6522
R² = 0.997
0
10
20
30
40
50
60
0 0.5 1 1.5 2 2.5
mm²
ASH (mg/mL)
Problema:
𝑦−3.6522
22.504
=
30.25−3.6522
22.504
= 1.18mg/mL
Figura 11. Curva tipo obtenida de la T. de Mancini para determinar la concentración del pro

15. Referencias
 Lomonte, B., Mata, E., (s.f), Producción de placas de
inmunodifusión radial para la cuantificación de IgG
humana, San José, Costa Rica, pdf en línea:
http://www.binasss.sa.cr/revistas/rccm/v6n4/art9.pdf
(04/18)
 Stock, R., Calderón, R., (2007), Inmunología, ed.
UNAM, México, D.F., pp: 20-23
 Universidad Mariano Gálvez, (2009), Imunodifusión
radial, Guatemala, pdf en línea:
https://microinmuno.files.wordpress.com/2011/07/inm
unodifusic3b3n-radial.pdf (04/18)