1. TÌM HIỂU VỀ HPLC - MS
Giảng viên hướng dẫn Nhóm 3
Nguyễn Thị Diệp Chi 1.Lê Thị Mến (B1304065)
2. Nguyễn Văn Dĩ (B1303904)
3. Trần Quốc Tuấn (B1304001)
4. Dương Thị Kim Nguyên (B1304075)

2. Nội dung báo cáo
TỔNG QUAN VỀ HPLC
•Giới thiệu về HPLC
•Quá trình sắc ký
trong cột HPLC
•Giới thiệu về UHPLC
KHỐI PHỔ
•Sự ion hóa
•Các bộ phân tích khối
lượng
•Ứng dụng
•Ưu điểm và nhược điểm

4. HPLC MS
 MS được sử dụng như một đầu dò của HPLC. Trong đó:
• HPLC = tách
• MS = nhận biết

5. Giới thiệu HPLC
• Được phát triển và cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển.
Sắc ký cột HPLC

6. Giới thiệu HPLC
 Pha động là dung môi mang chất phân tích
 Pha tĩnh là chất rắn dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng
phủ lên một chất mang rắn, hay một chất mang liên kết hóa học
với các nhóm chức hữu cơ.
• Ngày càng được sử dụng rộng rãi và phổ biến vì: có độ nhạy
cao, khả năng định lượng tốt, thích hợp tách các hợp chất khó
bay hơi hoặc dễ phân hủy nhiệt.

7. Injector
Detector
Column
Solvents
Mixer
Pumps
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình sắc ký
trong cột HPLC

8. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình sắc ký
trong cột HPLC

9. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình sắc ký
trong cột HPLC

10. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình sắc ký
trong cột HPLC

11. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình sắc ký
trong cột HPLC

12. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình sắc
trong cột HPL

13. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình sắc
trong cột HPL

14. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình sắc
trong cột HP

15. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình sắ
trong cột H

16. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình s
trong cột H

17. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá trình
trong cột

18. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Quá tr
trong

19. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Qu
tro

20. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time

21. Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time

22. Sắc ký cột
(1978)
HPLC
(1952)
UHPLC
(2004)

23. Giới thiệu UHPLC
• UHPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography) là 1 tiến bộ đạt
được trong kỹ thuật phân tích, là sự cải tiến của HPLC.
Agilent Waters Thermo

24. So sánh giữa HPLC và UHPLC
HPLC UHPLC
Kích thướt hạt <4 µm 1.7 µm
Kích thướt cột
4.6 mm (đường kính) x 250
mm (chiều dài)
2.1 mm (đường kính) x 50
mm (chiều dài)
Tốc độ dòng 1 – 2 mm/phút 250 – 750 µL/phút
Thể tích tiêm mẫu 20 µL 3 – 5 µL
Áp suất vận hành 5000 – 6000 psi 15000 – 18000 psi
Thời gian phân tích 10 – 30 phút <10 phút

25. Điểm ưu việt của UHPLC so với HPLC
Giảm
thời gian
phân tích
Tăng độ
nhạy
Tăng độ
phân giải
Tiêu thụ
ít dung
môi
Giảm chi
phí vận
hành
Tăng độ
chính xác

26. Đầu dò phổ khối có 3
nhiệm vụ chính
Chuyển chất cần
nghiên cứu thành
thể khí
Tạo ra các ion từ
các phân tử khí
Phân tách các ion rồi
ghi lại tín hiệu theo tỉ
số
𝑀
𝑍
Khối phổ (MS)

27. Lưu ý: Thiết bị khối phổ phải đặt trong điều kiện chân không để tất
cả các ion tiến tới detector mà không va chạm vào các phân tử hay
nguyên tử khí khác.
Hệ thống hút chân
không cao
Bộ phận dẫn
mẫu
Nguồn
ion
Bộ phận phân
tích khối lượng
ion
Đầu
dò ion
Hệ thống dữ
liệu

28. Sự ion hóa mẫu
• Sự ion hóa là một quá trình phân tử tích điện.
• Phân tử tích điện được đo bằng một khối phổ kế.
Có hai phương pháp
ion hóa
Phương pháp ion hóa cứng (HIS)
Dùng năng lượng lớn để tách phân
tử thành nhiều mảnh nhỏ bền
vững.Những mảnh này không có sự
phân tách tiếp theo.
Phương pháp ion hóa mềm (SIS)
Sử dụng một năng lượng nhỏ tách phân
tử thành những mảnh không bền có thể
tiếp tục phân tách

29. Các nguồn ion hóa trong khối phổ
Ion hóa tia điện (ESI)
Ion hóa hóa học tại áp suất
khí quyển (APCI)
Ion hóa photon tai áp suất
khí quyển (APPI)

30. Ion hóa tia điện (ESI)
• Dung dịch rửa giải được phun vào
buồng ion với sự hiện diện của
trường tĩnh điện và khí khô nóng.
• Khí được đun nóng sẽ làm cho
dung môi hóa thành những giọt hơi.
• Nhờ lực đẩy tĩnh điện mà ion được
chuyển thành thể khí và đị vào bộ
phân tích khối.

31. Ion hóa hóa học tại áp suất khí quyển (APCI)
• Nhiệt hóa hơi chất lỏng kết quả
dung môi khí được ion hóa bởi
sự điện hóa bằng cách các
electron thoát ra.

32. Ion hóa hóa học tại áp suất khí quyển (APCI)
• Một đèn UV được đặt vào để
phóng điện tạo ra các photon
trong phạm vi hẹp của nguồn
năng lượng ion hóa.

33. Các bộ phân tích khối lượng
• Bộ phân tích sẽ làm cho các ion
lệch hướng di chuyển qua một
ống được uốn cong trong từ
trường dựa vào động năng của
ion ,các ion được xác định bởi
khối lượng, điện tích và vận tốc.
• Từ trường được quét để đo các
ion khác nhau này.
• Các bộ phân tích khối lượng
• Tứ cực
• Bẩy ion
• Thời gian bay

34. Bộ phân tích tứ cực
• Một bộ lọc khối tứ cực bao gồm
bốn thanh kim loại.
• Ứng với một thế DC và AC cho
trước, chỉ có các ion có tỷ lệ
𝑀
𝑧
tương ứng mới có thể di chuyển
đến detector và được nhận biết.
Các ion khác sẽ bay ra khỏi quỹ
đạo ban đầu của chúng.

35. Bộ phân tích tứ cực
• Bẩy ion sử dung một để tách các ion
theo
𝑀
𝑧
.
• Điện trường trong hộp do các điện
cực ion gây ra, các ion có
𝑀
𝑧
nhất
định sẽ đi vào không gian quỹ đạo.

36. Thời gian bay (TOF)
• Các ion được tách ra riêng biệt theo thời gian dựa vào động năng và
vận tốc mà không cần sử dung điện trường hay từ trường.

37. Đầu dò các ion của mẫu
• Một dòng điện nhỏ được sản xuất
ra khi ion đi qua đầu dò.
• Máy dò khuếch đại các tín hiệu
sau đó truyền đến hệ thống dữ
liệu được biểu diễn bằng một
peak trên phổ khối.
• Đồ thị biễu diễn khả năng ion
được tách theo tỉ lệ
𝑀
𝑧

38. Ví dụ
Mass spectrometry

39. Ứng dụng
• Hoocmon kích thích tăng trưởng
• Xác định các loại vitamin
• Phân tích dư lượng các loại thuốc kháng sinh
• Dư lượng thuốc trừ sâu nhóm Carbamate…
• Có thể xác định các hợp chất chưa biết bằng cách dựa vào khối lượng
và thành phần của các nguyên tố trong hợp chất đó.
• Xác định cấu trúc đồng vị của các nguyên tố trong hợp chất.

40. Ưu điểm
• Độ nhạy cao
• Giới hạn phát hiện cao
• Độ đặc hiệu cao do tính phân mảnh riêng biệt của các ion
• Thời gian phân tích nhanh
• Có thể định lượng đồng thời các chất có thời gian lưu giống nhau mà
phương pháp sắc ký lỏng thường không làm được.
• Độ phân giải cao

41. Nhược điểm
• Những sự không tương thích cơ bản giữa hai loại máy (HPLC-MS)
• Không áo dụng cho những chất không bền nhiệt hoặc không bay hơi
• Giá thành cao