Title: New angular pyrroloquinolinones as potential photochemiotherapic agents: study of the mechanism of action.

1. Nuovi pirrolochinolinoni angolari quali potenziali agenti fotochemioterapici: studio del meccanismo d’azione.

2. Introduzione: Furocumarine 8-metossipsoralene (8-MOP) Angelicina Pirido[3,4-c]psoralene Benzo[4’,5’-d]psoralene Pirrolo[3,2,1-ij]chinolin-4-one 4,7-dimetilfuro[2,3-g]chinolin-2-one

3. Pirrolo[2,3- h ]chinolin-2-oni B-86 B-87 B-88 B-89 B-94 B-95 B-96 B-120 (lead compound)

5. Caratteristiche spettroscopiche

6. Solubilità e coefficienti di ripartizione

7. Rese quantiche di fluorescenza B-86

8. Determinazione dell’attività antiproliferativa (HL-60)

9. Determinazione dell’attività antiproliferativa (HT-1080)

10. Determinazione dell’attività antiproliferativa (LoVo)

12. Fotodegradazione dei composti (photobleaching)

14. Caratterizzazione dei fotoprodotti: LC/TOF-MS (B-86)

15. LC-TOF/MS (B-86)

16. Spettri di assorbimento dei fotoprodotti

18. Produzione di specie reattive dell’ossigeno Produzione di 1 O 2 mediante RNO bleaching. Produzione di O 2 -. attraverso il saggio dell’NBT.

19. Microscopia ad epifluorescenza * Per capire dove i pirrolochinolinoni agissero si è effettuata una localizzazione intracallulare tramite microsc. ad epifl. B-86 B-95 B-96 U.V. Campo chiaro

20. Localizzazione intramitocondriale tramite TMRM (B-88) B-88 TMRM B-88 + TMRM

21. Localizzazione intralisosomiale tramite acridina orange (B-88) B-88 AO B-88 + AO

24. Elettroforesi orizz. su gel di agarosio (plasmide pBR322) Controllo B-86 B-88

26. Elettroforesi verticale su gel di acrilammide (fotodanno alle proteine di membrana) In condizioni aerobiche avviene la polimerizzazione proteica In condizioni anaerobiche non si assiste alla formazione di legami crociati

28. Dicroismo circolare 0 20 Albumina RNAasi

33. Fotodegradazione B-96

34. *Caratterizzazione dei fotoprodotti1(MS)

35. *Caratterizzazione dei fotoprodotti2 Cinetiche di fotodegradazione di alcuni pirrolochinolinoni studiati.

36. Localizzazione cellulare dopo irradiazione U.V. B.F.