3. Triterpenoid tipe dammarane
telah mendapatkan perhatian
dunia sejak lama karena
bioaktivitasnya yang kuat
Latar Belakang
Bioaktivitas dan sifat kimia triterpenoid
tipe dammarane telah diselidiki, dan
beberapa efek farmakologis telah
diungkapkan, termasuk efek
antikelelahan,, antikanker, antiHIV,
antioksidan, dll.
Beberapa spesies Aglaia telah
diselidiki sebelumnya secara
fitokimia dengan aktivitas biologis
yang unik, Dalam pencarian terus
menerus kami untuk konstituen
sitotoksik terhadap sel leukemia
murine P-388 dari tanaman Aglaia
Indonesia
Aglaia secara tradisional digunakan
untuk melembapkan paru-paru,
menurunkan demam dan
mengobati luka memar, batuk dan
penyakit kulit.
mengisolasi dan menggambarkan
dua triterpenoid sitotoksik baru,
aglinone, dan aglinin E, dari kulit
kayu A. smithii dan dari kulit kayu
A. eximia dan satu lignan
4. Alat dan bahan
• Titik leleh diukur pada alat titik leleh
elektrotermal dan tidak dikoreksi.
• Spektrum IR direkam pada FT-IR dalam KBr.
• Spektrum massa diperoleh dengan instrumen
spektrometer massa Synapt G2.
• Data NMR direkam pada spektrometer JEOL ECZ-
600 pada 600 MHz untuk 1H dan 150 MHz untuk
13C dan TMS sebagai standar internal.
• Kromatografi kolom dilakukan pada silika gel 60
(Kanto Chemical Co., Inc., Japan).
• Pelat KLT telah dilapisi dengan silika gel GF254
(Merck, 0,25 mm) dan deteksi dicapai dengan
penyemprotan dengan 10% H2SO4 dalam EtOH,
diikuti dengan pemanasan.
Kulit batang A. argentea dikumpulkan di
Kebun Raya Bogor, Bogor, Provinsi Jawa Barat,
Indonesia pada Juni 2015. Tanaman tersebut
diidentifikasi oleh staf Herbarium Bogoriense,
Bogor, Indonesia dan spesimen voucher (No.
Bo-1288718) diendapkan di herbarium
5. dikromatografi pada kolom silika gel, dielusi
dengan gradien n-heksana–EtOAc (10:0–1:1),
untuk menghasilkan sembilan subfraksi (C01–
C09).
Skema Kerja Isolasi dan Ekstraksi
Ekstraksi
Kulit kering (2,5 kg) A. argentea diekstraksi dengan
metanol secara mendalam (12 L) pada suhu kamar
selama 5 hari.
Setelah penghilangan pelarut di bawah vakum,
pekatan kental ekstrak MeOH (133,5 g) pertama
disuspensikan dalam H2O dan kemudian dipartisi
dengan n-heksana, EtOAc, dan n-butanol,
berturut-turut.
Hasil Ekstraksi
Kromatografi Cair Vakum
Fraksi larut n-hexane
(26,3 g)
Difraksinasi dengan kromatografi cair vakum
pada silika gel 60 menggunakan gradien
nheksana dan EtOAc untuk menghasilkan
sembilan fraksi (A–I)
subfraksi (C01–C09)
Fraksi KCV (A-I)
Kromatografi Kolom
Fraksi C (2,68 g)
6. Skema Kerja Isolasi dan Ekstraksi
Kromatografi Kolom
Subfraksi C05
Dikromatografi pada kolom silika gel, dielusi
dengan CH2Cl2:CHCl3 (9,75:0,25), menghasilkan
empat subfraksi (C05A-C05D).
Subfraksi C05B dipisahkan pada
KLT preparatif, dielusi dengan n-
heksana-EtOAc (9:1), untuk
menghasilkan senyawa 1 (5,3 mg)
Fraksi D (1,65 g) dikromatografi pada
kolom silika gel, dielusi dengan gradien n-
heksana–EtOAc (10:1–1:10), untuk
menghasilkan enam subfraksi (D01–D06).
Subfraksi D04 direkristalisasi dalam EtOAc,
menghasilkan senyawa 2 (27,6 mg).
Subfraksi C05B dipisahkan pada KLT
preparatif, dielusi dengan n-heksana-
EtOAc (9:1), untuk menghasilkan
senyawa 1 (5,3 mg)
Subfraksi D05
dikromatografi pada kolom silika gel, dielusi
dengan gradien n-heksana–EtOAc (10:1–1:10)
untuk menghasilkan lima subfraksi (D05A-D05E).
Subfraksi D05D dikromatografi pada kolom
silika gel, dielusi dengan gradien CHCl3–
EtOAc (10:1–1:10) untuk menghasilkan
senyawa 3 (4,9 mg).
Fraksi larut EtOAc (12,1 g) difraksinasi dengan
kromatografi kolom pada silika gel menggunakan
gradien n heksana-EtOAc untuk menghasilkan
delapan fraksi (J-Q).
Fraksi K (927,6 mg) dikromatografi pada kolom
silika gel, dielusi dengan nheksana–EtOAc (10:1–
1:1), untuk menghasilkan empat subfraksi (K01–
K04).
Subfraksi K02 dipisahkan pada silika gel KLT
preparatif GF254, dielusi dengan
nheksana:EtOAc (7:3), menghasilkan
senyawa 4 (40,3 mg).
Senyawa 1
Senyawa 2
Senyawa 3
Senyawa 4
7. Skema Kerja Isolasi dan Ekstraksi
Senyawa 4 (12,0 mg) dilarutkan dalam
piridin anhidrat (1 mL) dalam botol (4 mL),
dan CrO3 (20,0 mg) kemudian
ditambahkan.
Setelah didiamkan pada suhu kamar
semalaman, campuran reaksi dipisahkan
melalui kolom silika gel kecil (1 g) (0,5 x 4,2
cm), dielusi dengan n-heksana:Me2CO
(4:1, 20 mL).
Elusi diuapkan sampai kering di bawah
tekanan tereduksi pada 45 °C, untuk
memberikan produk oksidasi senyawa 5,
20-hidroksidammar-24-en-3-on (Rf 0,55;
4,2 mg).
Senyawa 5
8. Hasil dan Diskusi
Senyawa 1 diperoleh sebagai kristal seperti jarum putih. Rumus molekul senyawa 1 adalah
C30H52O berdasarkan analisis NMR dan dengan demikian membutuhkan lima derajat
ketidakjenuhan, yang berasal dari satu pasang C sp2 dan triterpenoid tetrasiklik yang tersisa.
Spektrum IR menunjukkan puncak serapan pada 3345 cm-1 (OH), 2937 dan 2870 cm-1 (CH sp3
), 1464 cm-1 (C=C), 1379 cm-1 (gugus permata-dimetil), dan 1056 cm -1 (CO). Perbandingan
data NMR 1 dengan dammar-24-en-3ÿ-ol [30] mengungkapkan bahwa struktur kedua senyawa
tersebut sangat mirip; akibatnya, senyawa 1 diidentifikasi sebagai dammar-24-en-3ÿ-ol.
Senyawa 2 diperoleh sebagai bubuk amorf putih. Komposisi molekulnya C27H44O3, dibentuk
dari spektrum HRESI-TOFMS (m/ z 417.3105, [M+H]+ ) bersama dengan data NMR (Tabel 1).
Spektrum IR menunjukkan puncak serapan pada 3477 cm-1 (OH), 2942 cm-1 (CH sp3 ), 1715
cm-1 (C=O), 1471 dan 1379 cm-1 (gugus permata-dimetil), dan 1075 cm -1 (CO) Perbandingan
data NMR 2 dengan cabraleahydroxy lactone [22] mengungkapkan bahwa struktur kedua
senyawa sangat mirip, akibatnya, senyawa 2 diidentifikasi sebagai 3-epi-cabraleahydroxy
lactone.
Senyawa 3 diperoleh sebagai minyak tidak berwarna. Komposisi molekulnya C30H52O4,
ditetapkan dari spektrum HRESI-TOFMS (m/ z 477.3951, [M+H]+ ) bersama dengan data NMR
(Tabel 1). Spektrum IR menunjukkan puncak serapan pada 3436 cm-1 (OH), 2945 cm-1 (CH sp3
), 1651 cm-1 (C=C), 1456 cm-1 (gugus permata-dimetil), 1076 cm-1 ( CO), dan 847 cm-1 (OO).
Perbandingan data NMR 3 dengan (E)-25-hydroperoxydammar-23- en-3ÿ,20-diol [22]
mengungkapkan bahwa struktur kedua senyawa tersebut sangat mirip; akibatnya, senyawa 3
diidentifikasi sebagai 3(E)-25-hydroperoxydammar-23-en-3ÿ,20-diol.
9. Hasil dan Diskusi
Senyawa 4 diperoleh sebagai minyak tidak berwarna. Komposisi molekulnya
C30H52O2, ditetapkan dari spektrum HRESI-TOFMS (m/ z 445.0527, [M+H]+ )
bersama dengan data NMR (Tabel 1). Spektrum IR menunjukkan puncak serapan pada
3369 cm-1 (OH), 2939 cm-1 (CH sp3 ), 1639 cm-1 (C=C), 1458 cm-1 (gugus permata-
dimetil), dan 1109 cm-1 (BERSAMA). Perbandingan data NMR 4 dengan dammar-24-
en-3ÿ,20-diol [30,35] mengungkapkan bahwa struktur kedua senyawa tersebut sangat
mirip; akibatnya, senyawa 4 diidentifikasi sebagai damar 24-en-3ÿ,20-diol.
Senyawa 5 diperoleh sebagai minyak tidak berwarna. Komposisi molekulnya
C30H50O2, dibuat dari data NMR (Tabel 1). Spektrum 1H-NMR (CDCl3 600 MHz)
menunjukkan kesamaan dengan 4. Perbedaannya adalah tidak adanya sinyal untuk
oksimetin pada H 3,37 (1H, t, J = 4,5 Hz, H-3), digantikan oleh karbonil keton.
Tunjukkan bahwa produk oksidasi 4 telah terbentuk.
10. Kesimpulan
• Empat senyawa triterpenoid tipe dammarane, dammar-24-en-3ÿ-ol (1), 3-epi-cabraleahydroxy lactone (2), (E)-25-hydroperoxydammar-23-en-3ÿ,20-diol (3) , dan damar-24-en-3ÿ,20-
diol (4), diisolasi dari ekstrak metanol batang batang Aglaia argentea. Senyawa, 1-4, bersama dengan analog sintetik yang diketahui, 20-hydroxydammar-24-en-3-on (5),
12. Latar Belakang
Hepatokarsinoma merupakan penyebab kematian nomor tiga di dunia, terutama di Asia. Saat ini manajemen kanker terdiri dari kombinasi obat-obatan penggunaan,
bedah untuk menghilangkan jaringan kanker, terapi radiasi dan paliatif. Namun masih terdapat keterbatasan dalam pengelolaan kanker, sehingga perlu penelitian lebih lanjut
untuk menghambat pertumbuhan kanker tersebut, salah satunya adalah memanfaatkan tanaman obat. Secara empiris, beberapa tanaman obat telah banyak digunakan untuk
mengobati tumor atau penyakit kanker. Obat antitumor alami mengandung senyawa aktif yang bersifat toksik terhadap fase tertentu dari siklus sel tumor tetapi tidak bersifat
toksik atau mengganggu sel normal. Aglia sp. termasuk dalam famili Meliaceae, berpotensi sebagai antikanker. Rocaglamid merupakan senyawa bioaktif yang terkandung dalam
Aglaia sp. sangat efektif dalam menghambat pertumbuhan sel kanker. Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa berbagai turunan rocaglamid telah diisolasi dan diidentifikasi,
dan sebagian besar menunjukkan potensi sitotoksik yang sangat kuat. Suatu senyawa hasil fraksinasi ranting Aglaia rubiginosab , menunjukkan aktivitas sitotoksik yang potensial
pada sel karsinoma epidermoid oral manusia KB (RiveroCruz, et al., 2004) Banyak senyawa baru analog silvestrol diisolasi dari kulit batang Aglaia foveolate menunjukkan
sitotoksisitas terhadap sel HT-29 (Pan, et al., 2010).
Bioassay toksisitas udang air asin adalah metode sederhana untuk menyaring ekstrak tumbuhan mentah untuk sitotoksisitas (Meyer, et al., 1982). Metode ini
merupakan pre-screen yang menarik untuk kegiatan tersebut karena relatif sederhana dan murah untuk menguji ekstrak tumbuhan mentah dalam jumlah besar dalam waktu
yang relatif singkat, oleh karena itu sampai saat ini masih banyak digunakan oleh para peneliti, misalnya sebagai bioassay untuk menilai bioaktivitas suatu senyawa.
Toll-like receptor 4 (TLR4) adalah reseptor pengenalan patogen ekstraseluler (PRR) yang mengenali berbagai patogen dan pola molekul terkait kerusakan (PAMP dan
DAMP). Ini dapat mengaktifkan sinyal intraseluler dan faktor transkripsi yang berpartisipasi dalam transkripsi baik dari gen terkait imun atau keganasan. Dengan demikian, TLR4
merupakan reseptor imunitas bawaan yang berperan patogen selama inflamasi kronis dan dapat menginduksi karsinoma hepatoseluler (HCC) pada manusia (Sepehri, et al.,
2017).
Penelitian ini diusulkan untuk mengidentifikasi aktivitas sitotoksik fraksi etil asetat ekstrak daun A. elliptica Blume terhadap sel kanker hepatokarsinoma HepG2, dan
simulasi molecular docking untuk menganalisis interaksi antara rocaglamide dengan TLR4.
13. Skema Kerja Isolasi dan Ekstraksi
Ekstraksi
Serbuk simplisia A. elliptica Blume yang telah
dikeringkan
Selanjutnya, ekstrak kasar metanol
difraksinasi menggunakan pelarut n-
heksana dan etil asetat, hingga diperoleh
tiga fase ekstrak, yaitu fase n-heksana, fase
etil asetat dan fase metanol-air.
Filtrat kemudian dipekatkan dengan vakum
rotary evaporator untuk mendapatkan
ekstrak kasar metanol.
Dimaserasi menggunakan destilat metanol
sambil diaduk, proses tersebut diulang
sebanyak 3 kali. kemudian didiamkan
selama 24 jam dan kemudian didiamkan
tersaring.
Setiap filtrat partisi kemudian diuapkan dan
hasilnya dianalisis secara kualitatif dengan
kromatografi lapis tipis (KLT) dan
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).
Untuk mengkonfirmasi aktivitas biologis
fraksi ekstrak diuji menggunakan brine
shrimp lethality test (BSLT).
14. Selanjutnya fasa etil asetat dipisahkan menggunakan Vacuum Liquid
Chromatography (VLC) dengan panjang kolom 15 cm dan diameter
kolom 4 cm. Silica gel 60 Merck digunakan sebagai fase diam, dan
fase gerak adalah kombinasi antara diklorometana dan metanol
(9,5:0.5) dengan perbandingan gradien sebagai berikut:
diklorometana 100%, 20:80, 60:40, 80:20, 5:100 % metanol.
Dari proses ekstraksi dan partisi diperoleh tiga fase ekstrak,
yaitu fase n-heksana, fase etil asetat, dan fase metanol-air.
Hasil isolasi senyawa aktif
Skema Kerja Isolasi Senyawa Aktif
Fraksi yang dihasilkan
kemudian dianalisis dengan
KLT menggunakan
campuran fasa gerak yang
sama yaitu metanol
diklorometana dan untuk
fasa diamnya adalah silika
gel GF 254. serta dianalisis
secara kualitatif
menggunakan HPLC.
Pemurnian ekstrak dilanjutkan dengan HPLC semi preparatif
menggunakan fase diam C18 fase terbalik, dan kombinasi fase gerak
metanol-air. Panjang kolom 15 cm dan diameter 5 mm, volume
injeksi 200 L dan laju alir 4,70 mL/menit.
15. Sampel ini dilarutkan dalam 5 mL larutan laut dengan 1%
DMSO (v/v), dan 20 nauplii udang air asin ditambahkan ke
dalam setiap labu dan dipertahankan kontak langsung
dengan larutan sampel selama 24 jam. Kaca pembesar,
fokus terang dan latar belakang gelap digunakan untuk
melakukan pengamatan.
Skema Kerja Uji Letalitas Udang Air Garam
Penapisan awal aktivitas biologis ekstrak kasar dan
fraksi hasil partisi menggunakan HPLC semi preparatif
dan VLC ekstrak A. elliptica menjadi sasaran BSLT
Prosedur yang sama diikuti
dengan sampel dari HPLC
semipreparatif yang dibuat dalam
50 g/mL, dan sampel dari
fraksinasi VLC disiapkan pada
konsentrasi 5, 10, 20, 40 dan 60
g/mL dalam rangkap tiga
Hasil penentuan Uji Letalitas Udang Air Garam
16. Sel hepatocarninoma manusia HepG2 dipertahankan
sebagai kultur monolayer dalam media Roswell Park
Memorial Institute (RPMI) 1640, ditambah dengan
antibiotik 100 IU/mL penisilin dan 100 g/mL streptomisin
dan 10% serum janin sapi dalam inkubator yang
dilembabkan yang mengandung 5% CO2 pada 37°C.
Subkultur diperoleh dengan perlakuan tripsin dari kultur
konfluen.
Uji Sitotoksisitas Menggunakan Metode MTT
Penapisan awal aktivitas biologis ekstrak kasar dan
fraksi hasil partisi menggunakan HPLC semi preparatif
dan VLC ekstrak A. elliptica menjadi sasaran BSLT
Sel di-plating dalam 100 L
medium ke dalam 96 micro well
plate dengan kepadatan 5x103
sel/sumur, dan diinkubasi pada
inkubator 37oC dan 5% CO2 .
Satu hari kemudian media kultur
sel di setiap sumur dibuang dan
ditambahkan dengan 100 L media
segar yang mengandung
konsentrasi yang ditunjukkan (0,
5, 10, 20, 40, 60 dan 80 g/mL)
ekstrak dalam rangkap tiga
Setelah 24 jam perlakuan, media kultur sel
dipindahkan dan diganti dengan media segar yang
mengandung 0,5 mg/ml MTT dan dipertahankan
pada suhu 37ºC dalam inkubator CO2 5% selama 4
jam untuk memungkinkan MTT diubah menjadi
kristal formazan dengan mereaksikannya dengan sel
yang aktif secara metabolik.
Reaksi dihentikan dengan
menambahkan sodium
dodecyl sulfate (SDS) 10%, dan
absorbansi diukur pada 570
nm menggunakan ELISA plate
reader (Wang, et al., 2000
17. Hasil dan Diskusi
Ekstraksi serbuk daun kering A. elliptica Blume 1,8 kg menggunakan pelarut metanol menghasilkan
rendemen ekstrak metanol kasar sebesar 15,52% sebanyak 279,36 g. Proses partisi ekstrak kasar
metanol diperoleh fase ekstrak sebagai berikut, yaitu fase n-heksana, fase etil asetat dan fase
metanol-air. Aktivitas biologis dari ekstrak kasar dan fase ekstrak pada BSLT 100 g/mL menghasilkan
persen kematian sekitar 60-86,67% (Tabel 1). Kemudian semua ekstrak dan fase ekstrak dianalisis
secara kualitatif dengan KLT yang terdeteksi pada 366 nm UV . (Gambar 1A).
Enam fraksi dihasilkan dari 20 g ekstrak fase etil asetat menggunakan VLC. Setiap fraksi kemudian
dianalisis menggunakan KLT (Gambar 1B) dan juga ditentukan aktivitas biologisnya dengan BSLT
pada 50 g/mL. Tes toksisitas dengan BSLT menunjukkan bahwa fraksi F.EA.2 paling toksik diantara
fraksi lainnya dengan skor mortalitas 76,67% diikuti oleh F.EA.3 dengan skor mortalitas 70% (Tabel
2). Sedangkan rendemen F.EA.3 (4,588 g) jauh lebih tinggi dibandingkan fraksi F.EA.2 (2,075 g).
Isolasi Senyawa Aktif Enam fraksi dihasilkan dari 20 g ekstrak fase etil asetat menggunakan VLC.
Setiap fraksi kemudian dianalisis menggunakan KLT (Gambar 1B) dan juga ditentukan aktivitas
biologisnya dengan BSLT pada 50 g/mL. Tes toksisitas dengan BSLT menunjukkan Oleh karena itu
fraksi F.EA.3 akan dilanjutkan ke proses pemurnian selanjutnya menggunakan kromatografi kolom.
Persiapan ekstrak
Isolasi Senyawa Aktif
19. Hasil dan Diskusi
Fraksinasi F.EA.3 menggunakan kromatografi kolom menghasilkan 8 subfraksi. Kemudian aktivitas
biologis masing-masing subfraksi diuji pada BSLT 50 g/mL dan untuk mengidentifikasi senyawa aktif
yang terkandung dalam subfraksi dianalisis menggunakan KLT (Gambar 1C). Rendemen masing-
masing subfraksi, dan aktivitas biologis pada BSLT dapat dilihat pada Tabel 3.
Uji Toksisitas
Uji sitotoksisitas dilakukan pada tiga
subfraksi yang menunjukkan efek paling
toksik pada BSLT, yaitu F.EA.3.3; subfraksi
F.EA.3.4 dan F.EA.3.5. Aktivitas sitotoksik
subfraksi tersebut dianalisis terhadap sel
hepatokarsinoma manusia HepG2
menggunakan metode MTT. Pengaruh
masing-masing subfraksi terhadap
viabilitas sel hepatokarsinoma dapat
dilihat pada Tabel 4 dan Gambar 2.
20. Hasil dan Diskusi
Pemisahan HPLC semi-preparatif fraksi FEA 3,5
dilakukan dan diperoleh 10 isolat yang ditampung pada
menit 11, 12, 13, 14, 17, 19, 21, 23 dan 24. Isolat
kemudian dianalisis dengan HPLC analitik.Tiga isolat
yaitu 4, 5 dan 6 diidentifikasi pada HPLC analitik dan
diprediksi sebagai turunan rocaglamid, kromatogram
isolat tersebut dapat dilihat pada Gambar 3 -5.
Pemisahan HPLC semi-preparatif
Simulasi molekuler docking rocaglamide ke TLR4
dilakukan untuk memprediksi mekanisme sitotoksik.
Struktur 3D TLR4 diunduh dari Protein Data Bank (PDB ID:
4G8A) yang membentuk kompleks dengan LPS (Gambar
6). Rocaglamide sebagai ligan ditambatkan pada
penggantian posisi LPS. Rocaglamid terbentuk kompleks
dengan TRL4 dengan prediksi ikatan energi afinitas sekitar
-63 kkal/mol. Ini berinteraksi dengan residu asam amino
Ser 120 rantai C dan Lys133 Rantai D dari TLR4 (Gambar
7). Interaksi tersebut akan berpengaruh terhadap
penghambatan aktivitas TRL4 pada proliferasi sel HepG2.
Interaksi antara Rocaglamid dengan TLR4
21. Hasil dan Diskusi
Evaluasi aktivitas biologis fraksi etil asetat ekstrak daun A. elliptica . Serbuk kering daun aglaia diekstraksi dengan metanol secara maserasi, kemudian dipartisi menggunakan pelarut
heksana dan etil asetat dengan dipandu BSLT. Partisi yang dihasilkan diperoleh dengan fase etil yang paling beracun asetat dalam uji BSLT. Selanjutnya fase etil asetat difraksinasi
dengan kromatografi kolom dan diperoleh 8 fraksi, dimana 3 fraksi menunjukkan aktivitas tertinggi dalam BSLT. Hasil subfraksi A. elliptica Blume hasil fraksinasi kromatografi kolom
pada BSLT menunjukkan aktivitas yang kuat sedangkan LC50 adalah 13,40-40,81 g/mL karena dalam BSLT sampel termasuk toksisitas kuat bila LC50 Selanjutnya tiga subfraksi dari
kromatografi kolom yang aktif pada BSLT dilanjutkan dengan uji sitotoksisitas pada sel hepatokarsinoma HepG2 dengan metode MTT. Pada uji sitotoksik diketahui bahwa ketiga fraksi
FEA 3.3, FEA 3.4 dan FEA 3.5 menunjukkan nilai IC50 masing-masing sebesar 35.10, 14.36 dan 14.09 g/mL. Pengaruh masingmasing subfraksi terhadap viabilitas sel hepatokarsinoma
bergantung pada dosis, peningkatan konsentrasi sampel akan menurunkan viabilitas sel. Diantara ketiga fraksi tersebut, F.EA.3.5 menunjukkan aktivitas sitotoksik paling banyak
dibandingkan yang lain, ditunjukkan dengan nilai IC50 terkecil yaitu sekitar 14,9 g/mL. Hasil uji sitotoksisitas berkorelasi positif dengan BSLT, sedangkan yang paling toksik pada BSLT
juga paling sebaliknya kurang toksik pada BSLT juga menunjukkan kurang sitotoksik pada sel HepG2. Penelitian sebelumnya menggunakan berbagai turunan rocaglat dari ekstrak daun
Aglaia perviridis terhadap sel HepG2 menunjukkan bahwa aktivitas sitotoksik senyawa tersebut dengan nilai IC50 bervariasi antara 0,014 - lebih dari 50 M (An, et al., 2016). Setelah
diduga rocaglamid merupakan fraksi aktif ekstrak A. elliptica dalam menghambat proliferasi sel HepG2, maka dilakukan simulasi docking untuk memprediksi interaksi antara
rocaglamid dengan TLR4, sedangkan rocaglamid sebagai ligan ditambatkan pada penggantian posisi Lipopolisakarida. Downregulation TLR4 menginduksi efek supresi pada karsinoma
hepatoseluler terkait virus hepatitis B, dibuktikan dengan kadar mRNA dan protein TLR4 meningkat secara signifikan dalam sel HepG2.2.15. Downregulation TLR4 secara signifikan
menurunkan proliferasi dan menginduksi apoptosis pada sel-sel tersebut. Selain itu, TLR4 menunjukkan interaksi fisik dengan HBx, yang memainkan peran pemicu tumor dalam sel
HCC terkait HBV, oleh karena itu TLR4 dapat menjadi target terapi potensial untuk HCC terkait HBV (Wang, et al., 2015).
22. Hasil dan Diskusi
Evaluasi aktivitas biologis fraksi etil asetat ekstrak daun A. elliptica . Serbuk kering daun aglaia diekstraksi dengan metanol secara maserasi, kemudian dipartisi
menggunakan pelarut heksana dan etil asetat dengan dipandu BSLT. Partisi yang dihasilkan diperoleh dengan fase etil yang paling beracun asetat dalam uji
BSLT. Selanjutnya fase etil asetat difraksinasi dengan kromatografi kolom dan diperoleh 8 fraksi, dimana 3 fraksi menunjukkan aktivitas tertinggi dalam BSLT.
Hasil subfraksi A. elliptica Blume hasil fraksinasi kromatografi kolom pada BSLT menunjukkan aktivitas yang kuat sedangkan LC50 adalah 13,40-40,81 g/mL
karena dalam BSLT sampel termasuk toksisitas kuat bila LC50 Selanjutnya tiga subfraksi dari kromatografi kolom yang aktif pada BSLT dilanjutkan dengan uji
sitotoksisitas pada sel hepatokarsinoma HepG2 dengan metode MTT. Pada uji sitotoksik diketahui bahwa ketiga fraksi FEA 3.3, FEA 3.4 dan FEA 3.5
menunjukkan nilai IC50 masing-masing sebesar 35.10, 14.36 dan 14.09 g/mL. Pengaruh masingmasing subfraksi terhadap viabilitas sel hepatokarsinoma
bergantung pada dosis, peningkatan konsentrasi sampel akan menurunkan viabilitas sel. Diantara ketiga fraksi tersebut, F.EA.3.5 menunjukkan aktivitas
sitotoksik paling banyak dibandingkan yang lain, ditunjukkan dengan nilai IC50 terkecil yaitu sekitar 14,9 g/mL. Hasil uji sitotoksisitas berkorelasi positif
dengan BSLT, sedangkan yang paling toksik pada BSLT juga paling sebaliknya kurang toksik pada BSLT juga menunjukkan kurang sitotoksik pada sel HepG2.
Penelitian sebelumnya menggunakan berbagai turunan rocaglat dari ekstrak daun Aglaia perviridis terhadap sel HepG2 menunjukkan bahwa aktivitas
sitotoksik senyawa tersebut dengan nilai IC50 bervariasi antara 0,014 - lebih dari 50 M (An, et al., 2016). Setelah diduga rocaglamid merupakan fraksi aktif
ekstrak A. elliptica dalam menghambat proliferasi sel HepG2, maka dilakukan simulasi docking untuk memprediksi interaksi antara rocaglamid dengan TLR4,
sedangkan rocaglamid sebagai ligan ditambatkan pada penggantian posisi Lipopolisakarida. Downregulation TLR4 menginduksi efek supresi pada karsinoma
hepatoseluler terkait virus hepatitis B, dibuktikan dengan kadar mRNA dan protein TLR4 meningkat secara signifikan dalam sel HepG2.2.15. Downregulation
TLR4 secara signifikan menurunkan proliferasi dan menginduksi apoptosis pada sel-sel tersebut. Selain itu, TLR4 menunjukkan interaksi fisik dengan HBx, yang
memainkan peran pemicu tumor dalam sel HCC terkait HBV, oleh karena itu TLR4 dapat menjadi target terapi potensial untuk HCC terkait HBV (Wang, et al.,
2015).
23. Kesimpulan
• Subfraksi aktif diperoleh dari pemisahan kromatografi fraksi etil asetat daun A. elliptica Blume yang
menunjukkan aktivitas yang kuat terhadap A. salina di BSLT dan juga secara signifikan mengurangi
viabilitas sel hepatokarsinoma HepG2. Aktivitas ini dikarenakan rocaglamid terdapat pada subfraksi
aktifnya, dimana simulasi molekuler docking menunjukkan bahwa rocaglamid membentuk kompleks
dengan TLR4 pada sel hepatokarsinoma HepG2 dan mempengaruhi penghambatan proliferasi selnya.
