1. Involvement of nucleostemin
in the p53-mediated regulatory
pathway
in cellular senescence
骨髄由来の間葉系幹細胞で
高発現している
ヌクレオステミンの機能

2. Nucleostemin
Nucleostemin is expressed in nucleoli of CNS stem cells,
mbryonic stem cells and several cancer cells.
Nucleostemin expression decreases rapidly prior to
neuronal differentiation of CNS stem cells.
he N-terminal basic domain specifies the p53 interaction
nd growth regulatory functions.

3. Human nucleostemin
C23 NS merge
epitope1 epitope2
1 549
B CC G4 G1 A
NLS
2
KRPK
5 42 46
KKPRK
86 89
NoLS of p14ARF: RRPR H10-8 H1299 U2OS
B: basic domain
CC: coiled-coil domain
G4: GTP-binding motif MRC5 Hacat U2OS
G1: GTP-binding motif
A: acidic domain
NLS: nuclear localization signal

4. Expression of nucleostemin
in differentiated marrow stromal cells
neuronal differentiation
NS NS NS MAP2
+BDNF
+NGF
uninduced induced
+bFGF2
- NS

5. Expression of nucleostemin
in senescent marrow stromal cells
100
Y S Y S
80 NS NS
60 p53 p53
PD
40
mdm2 mdm2
20
p21 p21
actin GAPDH
0
0 100 200 300
day
SA-βgal SA-βgal young senescent
NS NS
young
X100 X40 X200
senescent
X100 X40 X200

6. Introduction of nucleostemin into
late-passage marrow stromal cells
70
BrdU-positive cell (%)
BrdU 60
P=0.0053
50
p53
40
30
actin
20
10
X40
S
FP
dN
dG
0
A
AdNS
A
S
FP
dN
dG
A
A

7. Introduction of nucleostemin-siRNA
stabilizes p53 protein in marrow stromal cells
marrow stromal cells U2OS cells
siRNA siRNA siRNA siRNA
NS ctrl NS ctrl NS ctrl NS ctrl
NS NS NS NS
p53 p53 p53 p53
mdm2 mdm2 mdm2 mdm2
actin GAPDH actin GAPDH

8. Decreased nucleostemin expression
destabilizes p14ARF and mdm2 proteins.
p14ARF NS merge IP
αp14ARF αNS
p14ARF-
p14ARF NS merge
siRNA siRNA ctrl
NS ctrl NS ctrl
NS NS
p14ARF p14ARF
mdm2 mdm2
NS-siRNA
actin GAPDH

9. Decreased expression of nucleostemin
induces the structural change of nucleoli.
B23 NS merge
ctrl
NS-siRNA

10. Involvement of nucleostemin
in the p53-regulatory pathway
nucleus nucleus
nucleolus nucleolus
ARF
NS
NS
ARF core p53 core p53
NS NS
NS mdm2 mdm2
NS NS
ARF
ARF
ub
ub ub
ub ub
ub
mdm2 p53 mdm2 p53
ub ub
ub ub
ub ub
ARF mdm2
degradation degradation degradation
marrow stromal cells senescent cells
differentiated cells

11. 考察
ヌ ク レ オ ス テ ミ ン の 発 現 量 を 減 少 さ せ る と 、 p14 ARF と
mdm2 タ ン パ ク 質 量 の 減 少 と 、 p53 タ ン パ ク 質 量 の 増 加 が
認められたことから、ヌクレオステミンは p53 制御経路上
で機能していることが示唆された。
細 胞 老 化 の M1 期 は 、 テ ロ メ ア の 短 縮 を 察 知 し た ATM に
よる p53 の安定化によって誘起される細胞周期の停止であ
る と考えられている。本実験から、テロメアの短縮に加え
て 、 ヌ ク レ オ ス テ ミ ン 量 の 減 少 も M1 期 に お け る p53 の 安
定化に関与していることが示唆された。
ヒ ト骨髄間質細胞には寿命があることが、分化させた細胞
を 移植し臓器の機能回復を計る再生医療に役立てる際の大
き な障壁となっている。ヌクレオステミン遺伝子の導入に
よ って細胞周期を回転させ、多くの細胞数を得ることが可
能 となれば、再生医療への実用化に寄与できると考えられ