Kst 105.001

2. Candidate cell sources for regenerative medicine include:
1. ES cells, 2. Fetal cells, and 3. Adult stem cells.

3. Umezawa, A., et al.. Mol. Cell. Biol. 11: 920-927, 1991
Marrow stroma serves a microenvironment or niche
for hematopoietic cells

4. Fat Neuron
Bone
Cartilage
Cardiomyocyte
Skeletal myocyte
DefaultDefault With exposure to inducersWith exposure to inducers
Differentiated phenotypes of marrow stromal cells

5. ねずみ５匹ねずみ５匹
エックス線写真エックス線写真
4 weeks
2 weeks
In vivoIn vivo osteogenic activity in marrow stromal cellsosteogenic activity in marrow stromal cells

6. PLGA sheets
CollagenCollagen
microspongemicrosponge
overlay the interstices ofoverlay the interstices of
the fabricated web-likethe fabricated web-like
Generation of bone tissue of desired sizes and shapes
Sheet-style biodegradable polymer,
PLGA (200 um thick) as a scaffold
Hybridization of the PLGA
with collagen microsponge

7. The cell-seeded sheets were rolled up
around a silicone rod,and cultivated
them in vivo for 4 weeks at the
subcutaneous tissue.
Cylinder-shaped bone

8. Bone knots
bone of more complex shapes
We can control bone shape completely

9. Generation of phalanges by the PLGA hybrid sheet
with marrow-derived mesenchymal cells.
phalange-like bone
Thumb of
the graduate student

12. Cell X

13. Transplantation of Cell X pelleted micromasses in the nude mice
2W 4W 8W
toluidine blue
HE
x40

14. Transplantation of Cell X pelleted micromasses in the nude mice
2W 4W 8W
toluidine blue
HE
x200

15. Brain fromBrain from
BoneBoneKUSA-A1 cells started to form axon-like long processe
by the demethylating agent.

16. The transdifferentiation was enhanced
by Noggin, an inhibitor of BMPs.
MAP
2
Isolated mature osteoblasts have strong in vivo osteogenic activity,
and could efficiently convert into functional neurons.

17. The stroma-derived neurons started to respond to depolarizing stimu
and neurotransmitter, glutamate, like functional mature neurons.
Differentiation (Special issue on stem cells) 68: 235-244, 2001
QuickTime˛ Ç∆
GIF êLí£ÉvÉçÉOÉâÉÄ
ǙDZÇÃÉsÉNÉ`ÉÉÇå©ÇÈÇ…ÇÕïKóvÇ≈Ç∑ÅB

18. Mesenchymal Cell Lines
Summary of Lineage Analysis
KUSA/A KUSA/O CMG 9-15c(MSCs) KUM4 KUM5 KUM5A11E1 KUM9 NRG OP9
Endothelial Cells Flk-1 - - - - - - - - -
CD31 - - - - - - - - - -
CD144 - + - + - - - - -
Hematopoietic Cells CD34 - ++ - ++ ++ - - ++ ++ -
c-kit - - - + - - - - - -
Sca-1 +++ ++ +++ +++ +++ + + +++ +++ ++
Mesenchymal Cells CD140 ++ ++ + + ++ ++ ++ ++ +
CD14 - - + - - - - - -
CD29 + ++ ++ ++ + + + + + -
CD41 - - N.D. + - - - - -
CD44 +++ +++ +++ +++ ++ ++ ++ +++ +++ -
CD45 - - - - - - + - -
CD49b - - + - - - + - -
CD49d - - - - - - + - -
CD54 - - + - - - + - -
CD90 - - - - - - + - -
CD102 - - - - - - + - -
CD105 - - - - ++ ++ + - - -
CD106 - ++ + - + ++ ++ ++ - +
Ly-6c ++ + ++ ++ ++ - ++ + ++ +
Ly-6g - - - - - - + - - -

19. Human Marrow Stromal Cells
reach senescence after a limited number of cell division
H4-1H4-1
H4-1H4-1
慶應義塾大学医学部慶應義塾大学医学部
血液内科血液内科
木崎 昌弘 木崎 昌弘
福地 由美 福地 由美
H4-1, senescenceH4-1, senescence

20. Prolongation of the life span of human marrow stromal cell
by transferring Bmi-1, E6, E7, and TERT
The cells with the extended life span retained the multipotency
into osteocytes, chondrocytes, adipocytes, and myocytes in vitro.

21. Scheme of
the experimetal protocol

22. QuickTime˛ Ç∆
êLí£ÉvÉçÉOÉâÉÄ
ǙDZÇÃÉsÉNÉ`ÉÉÇå©ÇÈÇ…ÇÕïKóvÇ≈Ç∑ÅB
QuickTime˛ Ç∆
êLí£ÉvÉçÉOÉâÉÄ
ǙDZÇÃÉsÉNÉ`ÉÉÇå©ÇÈÇ…ÇÕïKóvÇ≈Ç∑ÅB

23. 1 week 3 weeks
Recording of action potentials
from spontaneously beating cells
Alexa568
Human marrow stromal cells
with the extended life span
can differentiate into cardiomyocytes
Disorganized
Regular and
stabilized
Recording
microelectrode

24. 最近の U7 の誘導率の増加
movie
QuickTime˛ Ç∆
DV - NTSC êLí£ÉvÉçÉOÉâÉÄ
ǙDZÇÃÉsÉNÉ`ÉÉÇå©ÇÈÇ…ÇÕïKóvÇ≈Ç∑ÅB

25. EPC-100, EPC-214
Gene transfer
Primary culture
EPCs
Limiting dilution
hTERT
E6 (HPV16)
E7 (HPV16)
EPC-100 EPC-214
18S(200bp)
E6(397bp)
E7(178bp)
TERT(144bp)
EPC-100 EPC214
HumanHearthEPC100(RT-)hEPC214(RT-)
hEPC100
hEPC214
DW

26. GFP labeled
Human cell
5-azacytidine/Oxytocin/-
Adeno-virus
Fetal mouse
Primary culture of cardiomyocytes
Co-culture
Start beating
2-3 days later
プロトコール

27. GFP/h-CardiacTroponin-
I/HoechstEPC-100
Hoechst EGFP h-cardiac troponin-I Merge
EPC-214
Hoechst EGFP Merge
h-cardiac troponin-I
Mouse
EPC-100
EPC-214
h-cardiac troponin-I

28. Hoechst/actinin/Connexin 43
EPC-100
Hoechst Cx43α−actinine Merge
EPC-214
Hoechst Cx43α−actinine Merge

29. EPC から した記録 活動電位
Pipette
Pipette
EPC-100EPC-214
1sec
50mV
2 sec
50mV
APD90 MDP AMP Rate Pacemaker(+)
msec mV mV s n
EPC-100 326±12 -55±1 56±7 0.9±0.1 3/17
EPC-214 185 ±16 -48±3 56±3 2.4±0.2 16/22
APD; action potential duration, MDP; Maximum diastolic potential, AMP; amplitude
2sec
50mV
1 sec
50mV
Pacemaker potential(+) Pacemaker potential(-)
Pacemaker potential(+) Pacemaker potential(-)
Mean ± SE
 EPC-100 は同期が強く、活動電位も regular で静止膜電位も深い
 EPC-214 は同期は弱く、活動電位は培養経過中 (3W) は、歩調取り電位を有した洞結節型細胞

30. EPC-100 (2W) Patch clamp Fast Na current was observed in 1/10 cell
EPC-214 (2W) Patch clamp Fast Na current was observed in 1/5 cell
EPC
pipette
Patch clamp from post-FACS EPCs
GFP を陽性細胞 FACS にて 、その から抽出 細胞 patch clamp を った行

31. Non
fusion
EPC-100 AEPC-214
Hoechest EGFP h-cardiac troponin-I Merge
Hoechest EGFP h-cardiac troponin-I Merge
B C D E
F G H I
Feeder cardiomyocyte
Collagen membraneculture dish
EPC

32. Feeder (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-)
Non 5Az Oxytocin Non 5-Az Oxytocin
EPC-100 EPC-214
Inductionratio
100
50
40
30
20
10
0
(%)
32%
20%19%
3.5% 4.2% 4.6%
44%
27%
15%
21%
19%
31%
Venus/Hoechist での induction ratio

33. C D antigen
EPC-100 EPC-214

34. HumanHeart
hEPC100hEPC100(RT-)
hEPC214hEPC214(RT-)
hEPC100hEPC100(RT-)
hEPC214hEPC214(RT-)
MouseFeeder
DW
co-culture (-) (+)
Expression of cardiomyocyte-specific gene
Csx/Nkx 2.5 (233bp)
GATA4 (475bp)
hANP (406bp)
hBNP (206bp)
TnT (152bp)
TnI (233bp)
Cardiac Actin (400bp)
MYL2v(382bp)
MLC2α (376bp)
HCN2 (230bp)
18S (200bp)

35. 心筋誘導まで
のシェーマ
現在進行中
そろそろ ??

36. GFP labeled
Human cell
5-azacytidine/Oxytocin/-
Adeno-virus
Fetal mouse
Primary culture of cardiomyocytes
Co-culture
Start beating
2-3 days later
共培養のプロトコール

37. Csx/Nkx 2.5
Humanheart
hE-MSC100
hE-MSC100RT-
hE-MSC214
hE-MSC214RT-
UBT-5
UBT-5RT-
UBET-7
UBET-7RT-
UEET-12
UEET-12RT-
UET-13
UET-13RT-
DW
Humanheart
hE-MSC100
hE-MSC100RT-
hE-MSC214
hE-MSC214RT-
UCB
UCBRT-
PL-90
PL-90RT-
PL-112
PL-112RT-
DW

38. 400
300
200
100
0
7006005004003002001000
290
285
280
275
270
265
260
10008006004002000 30
(min.)
20100
心 筋 短 縮 率

39. 間葉系幹細胞
拡大培養に要求される３つの特性
・安・安
全全
・迅・迅
速速
・大・大
量量
再生治療

40. 0 0.5 1 2 10
FCS(%)
0
20
40
60
80
100
120
P
PL
PLV
MSCGM(10%FCS)
UEET-12 無血清培養
改良培地は無血清下でも血清含有培地と同等の増殖性を有する

41. 1053210.50
FCS(%)
0
50
100
150
200
C
No Coat
Fibronectin
UEET-12 細胞接着性
接着性の低下は 1 ％血清の添加で補われる。

42. 0 5 10 15 20 25
培養日数
1
10
100
1000
10000
100000
#2/X
#2/10%DMEM
#4/X
#4/10%DMEM
#5/X
#5/10%DMEM
ヒト の骨髄由来間葉系幹細胞 初代培養

43. ｐ１６ INK ４ a ／ｐ 14ARF 遺伝子領域
ｐ１６ INK ４ a
Cdk4/6
サイクリン
D
Rb
E2F
ｐ１４ ARF
MDM2(HDM2)
ｐ 53
ｐ 21
Cdk2
サイクリン E
細胞増殖
リン酸化 Rb
E2F

44. ＭＳＣＧＭ X
ｐ１６ＩＮＫ４ａ
β tubulin‐
培地 X ではｐ１６ＩＮＫ４ a
発現上昇がみとめられる
蘇生後の継代 １ １ ２ ２ ３ １ １ ２ ２ ３
0 5 10 15 20 25
day
8
10
12
14
16
18
20
22
P
D
L
MCSGM
X
MSC

45. なぜ培地 X で p16 の発現が高いのか？
Q

46. ｐ１６ＩＮＫ４ａ
β tubulin‐
X ＋ FCS -IT
+FCS
-IT -PDGF
- ｂ FGF
-EOP -Sel -P,b
+FCS
-P,b MSC
p16 誘導の主要要因は PDGF, ｂ FGF である。

47. ｐ１６ＩＮＫ４ａ
β tubulin‐
X-P,b X-P,b/10%FCS MSCGM
PDGF+bFGF(ng/ml) 0 1 10 0 1 10 0 1 10
ｂＦＧＦ，ＰＤＧＦが p16 発現を誘導する。

48. PDGF ＋ｂ FGF によりｐ１６発現が上昇
なぜ培地 X で p16 の発現が高いのか？
Q
A

49. MSC bFGF P-AA
P-BB
P-AB
+bFGF
P-AA,BB
P-AA
P-BB
P-AB
PDGF
-AA
PDGF
-AB
PDGF
-BB
A 鎖 B 鎖
β ﾚｾﾌﾟﾀｰ
CD140 ｂ
α ﾚｾﾌﾟﾀｰ
CD140 ａ
Greb ２
Nck
Ｒａｓ -
GAP
Crk
Src
SHP2
PLC- ｒ
PDGF-AA→Competent Factor
PDGF-BB→Competent and Proguression Factor
IgG CD140a CD140b
p16
βtubulin
― ＋
MSC の p16 発現は PDGF-B 鎖による。
( 細胞 /H10 8)‐

50. M
SC
aFG
F
bFG
F
EG
F
VEG
FPDG
FPDG
F+aFG
F
PDG
F+bFG
F
PDG
F+EG
F
PDG
F+VEG
F
aFG
F+bFG
F
aFG
F+EG
F
aFG
F+VEG
F
bFG
F+EG
F
bFG
F+VEG
F
EG
F+VEG
F
H
eLa
p16p16
βtubulinβtubulin
H4-3
Normalized Flags Raw Common Description
1.0818335 P 2172.2 egfr epidermal growth factor receptor (erythroblastic leukemia viral (v-erb-b) oncogene homolog, avian)
1.1522822 P 657.3 egfr epidermal growth factor receptor (erythroblastic leukemia viral (v-erb-b) oncogene homolog, avian)
0.6146532 A 337.2 egfr epidermal growth factor receptor (erythroblastic leukemia viral (v-erb-b) oncogene homolog, avian)
0.8937527 A 17.8 egfr epidermal growth factor receptor (erythroblastic leukemia viral (v-erb-b) oncogene homolog, avian)
1.0583736 A 167.9 egfr epidermal growth factor receptor (erythroblastic leukemia viral (v-erb-b) oncogene homolog, avian)
0.8768445 A 358.1 egfr ErbB1-S; Human epidermal growth factor receptor precursor (EGFR) mRNA, complete cds.
1.0504522 A 10.4 fgfr2 fibroblast growth factor receptor 2 (bacteria-expressed kinase, keratinocyte growth factor receptor, craniofacial dysostosis 1, Crouzon syndrome, Pfeiffer syndrome, Jac
0.7824624 A 21.5 fgfr2 fibroblast growth factor receptor 2 (bacteria-expressed kinase, keratinocyte growth factor receptor, craniofacial dysostosis 1, Crouzon syndrome, Pfeiffer syndrome, Jac
0.417403 A 9.8 fgfr3 fibroblast growth factor receptor 3 (achondroplasia, thanatophoric dwarfism)
0.54518497 A 27.2 fgfr3 fibroblast growth factor receptor 3 (achondroplasia, thanatophoric dwarfism)
1 A 38.3 fgfr4 fibroblast growth factor receptor 4
1.2821407 A 125.7 fgfr1 fibroblast growth factor receptor 1 (fms-related tyrosine kinase 2, Pfeiffer syndrome)
1 P 652.2 fgfr1 fibroblast growth factor receptor 1 (fms-related tyrosine kinase 2, Pfeiffer syndrome)
1.4052641 A 14.3 fgfr2 fibroblast growth factor receptor 2 (bacteria-expressed kinase, keratinocyte growth factor receptor, craniofacial dysostosis 1, Crouzon syndrome, Pfeiffer syndrome, Jac
0.75333506 A 59.2 fgfr2 fibroblast growth factor receptor 2 (bacteria-expressed kinase, keratinocyte growth factor receptor, craniofacial dysostosis 1, Crouzon syndrome, Pfeiffer syndrome, Jac
1.3886433 P 124.5 fgfr2 fibroblast growth factor receptor 2 (bacteria-expressed kinase, keratinocyte growth factor receptor, craniofacial dysostosis 1, Crouzon syndrome, Pfeiffer syndrome, Jac
1.1120172 A 13.6 fgfr2 fibroblast growth factor receptor 2 (bacteria-expressed kinase, keratinocyte growth factor receptor, craniofacial dysostosis 1, Crouzon syndrome, Pfeiffer syndrome, Jac
1.0663294 P 2619.3 fgfr1 fibroblast growth factor receptor 1 (fms-related tyrosine kinase 2, Pfeiffer syndrome)
1 A 11.1 fgfr4 fibroblast growth factor receptor 4
1.1922568 A 46.9 fgfr2 fibroblast growth factor receptor 2 (bacteria-expressed kinase, keratinocyte growth factor receptor, craniofacial dysostosis 1, Crouzon syndrome, Pfeiffer syndrome, Jac
3.1074321 A 73.5 fgfr2 fibroblast growth factor receptor 2 (bacteria-expressed kinase, keratinocyte growth factor receptor, craniofacial dysostosis 1, Crouzon syndrome, Pfeiffer syndrome, Jac
1 A 67.3 fgfr2 fibroblast growth factor receptor 2 (bacteria-expressed kinase, keratinocyte growth factor receptor, craniofacial dysostosis 1, Crouzon syndrome, Pfeiffer syndrome, Jac
1 A 8.2 fgfr2 fibroblast growth factor receptor 2 (bacteria-expressed kinase, keratinocyte growth factor receptor, craniofacial dysostosis 1, Crouzon syndrome, Pfeiffer syndrome, Jac
1.3065747 P 3125.7 fgfr1 fibroblast growth factor receptor 1 (fms-related tyrosine kinase 2, Pfeiffer syndrome)
3.3271298 P 4049.1 pdgfrb platelet-derived growth factor receptor, beta polypeptide
1.0704594 P 4990.3 pdgfra platelet-derived growth factor receptor, alpha polypeptide
1.0662563 P 366.9 pdgfrl platelet-derived growth factor receptor-like
0.8164289 A 6.2 pdgfra platelet-derived growth factor receptor, alpha polypeptide
2.3044996 A 403.1 pdgfra platelet-derived growth factor receptor, alpha polypeptide
0.6091959 A 19.5 flt4 fms-related tyrosine kinase 4
1.7572612 A 61.6 kdr kinase insert domain receptor (a type III receptor tyrosine kinase)
aFGF-R ○
bFGF-R ○
EGF-R ◎
VEGF-R ×
PDGF-R ◎
受容体の有無
p16 発現は増殖因子の
種類による。

51. b
PA
PB
hP
bPA
bPB
bhP
bPAB
a
E
V
Pa
PE
PV
ab
bE
bV
aE
aV
EV
-
0 20 40 60 80 100 120
mAbs=450nm
MSC äeëùêBàˆéqÇ…ÇÊÇÈëùêBå¯â

52. 細胞増殖に都合の良い増殖因子ほど p16 の発現を誘導する？
相関係数：
０．７０0 50 100 150 200 250
cell growth
0
20
40
60
80
100
120
p16/cell growth

53. 時間
分裂回数
MSC ： MSCGM ？
毛乳頭細胞： 10%FCS-DMEM
表皮角化細胞： 3T3 ﾌｨｰﾀﾞｰ培
養
乳腺上皮細胞： 3T3 ﾌｨｰﾀﾞｰ培
養
MSC ：培地 X ？
毛乳頭細胞：低血清培地
表皮角化細胞：無血清培地
乳腺上皮細胞：無血清培地
血清培地
増殖因子

54. 時間
分裂回数
第一世代（血清培地）
第二世代（無血清培地）
第三世代（いやし培地）第三世代（いやし培地）

55. 増殖因子 ストレス
Ras
Raf
MEK1/2
ERK1/2
Ets1/2
MLK ｓ、 TAK
ASK1
MKK3/6
ｐ３８ MAPK
A
B
ｐ１６ INK4a
p16ink4a
β-tubulin
X
10%FCS
X
A B

56. 間葉系幹細胞
拡大培養に要求される３つの特性
・安・安
全全
・迅・迅
速速
・大・大
量量
再生治療

57. 移植細胞の体内動態追跡システム
細胞治療において移植された細胞がどこに、どのように
存在しているかを知ることは治療評価において重要。
現在までに移植細胞の体外検出システムは存在しない。
ドナー細胞およびレシピエントに影響を及ぼさない標識マーカ
ーで細胞をラベリングし、体外画像機器にて検出するシステム
を確立する。
【 目的 】
ナノバイオトレースシステム
マーカー；造影剤
画像機器； MRI

58. Super Paramagnetic Iron Oxide (SPIO)
Feridex 150~250nm Resovist 57nm
T2 短縮効果強い
超常磁性体酸化鉄
1mL 中にフェルカルボトラン 540mg （鉄 24.9mg ）
添加物： D- マンニトール、乳酸、水酸化ナトリウム

59. SPIO 効果 ； T2 短縮（信号低下）
T2 強調 SPIO 造影 T2 強調
•正常肝細胞は鉄コロイド
を貪食するので信号が低下
する•貪食能のない病変は信号
が低下しないので白く浮き
出て見える
Labeling
Fe
Fe
Fe
Fe
Fe Fe
Fe Fe
Fe
Fe
Fe Fe
Fe
Fe
Fe
Fe
FeFe
Fe Fe
Fe
Fe
Fe
Fe
Fe
Phagocytosis
or
Pinocytosis
SPIO labeled cell
SPIO

60. で な国内 使用可能 SPIO リゾビストを い、用
ヒト への 、および に骨髄間質細胞 導入 生体内
おける の長期間 観察を えるか行 ？

61. 10% FBS DMEM
0.1% Risovist
Berlin Blue stain

62. Pinocytotic vesicle
1500x
TEM
Risovist particles
SPIO incubation for 2 days

63. Ex vivo Relaxometry
MR spectrometer
Minispec NMS-120 (Bruker Japan)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
control
Risovist
Control
Risovist
Control
Risovist
cells/mL
1.44x106
2.88x106
5.75x106
1.15x107
2.3x107
T2 weightT2 value

64. In vivo MRI analysis
5x106
cells labeled with Risovist
Suspend into 50µL medium
Injection into the leg muscle
MRI analysis at various time points

65. 3 hours 2 weeks 4 weeks
MRI
T2W
H-E
BB

66. Risovist
Polymer sheet
Implantation with scaffolds
T2W
2 weeks after transplantation

67. Risovist labeled cell onto PLGA sheet
H-E BB

68. H-E B-B
Eight weeks after injection
T2W

69. 細胞を用いたムコ多糖症 VII 型マウスに対する
中枢神経病変に対する細胞治療・遺伝子治療
（大橋十也、島田隆）
出生前診断・胎児治療
（末岡浩、林聡）
先天性代謝異常症に対する
造血幹細胞移植
日本国における現状（加藤俊一）
細胞治療におけるヒト細胞の
安全性の検討ならびにバリデーション
（梅澤明弘）
リソソームの電子顕微鏡写真
リソソーム病とは
遺伝的要因によるリソソーム酵素活性の低下
リソソーム内に分解されない分子が発生
これがリソソーム外に排泄されず進行的に蓄積する。
細胞機能が低下し、臨床症状を呈する。
de Duve (1966)
ムコ多糖の分解酵素の欠損
グリコサミノグリカン分子（デルマタン硫
酸・ヘパラン硫酸・ケラタン硫酸・コンドロ
イチン硫酸・ヒアルロン酸）がリソソーム内
に蓄積することにより、細胞・組織・器官の
機能異常が生じる。
特異顔貌、骨形成異常、聴覚・視覚・気道・
心血管・関節可動域の異常、精神発達遅滞
に する の先天性代謝異常症 対 幹細胞治療法 開発
ホルモン（インスリン）
産生細胞を用いた細胞治療
（中村公俊、宮本薫）

70. Transduction of human GUSB gene
into BMS cells with a retroviral
vector
MND Human GUSB LTRSV40 Neo
GUSB activity
5.9×10
(nmol/hr/mg)
1.9×106
GUSB
staining
KUSA/A1
(before)
KUSA/HBG
(after)
äeéÌç◊ñEÇÃGUSBäàê´
840.3
141.8
70.6
24.8
61.6
126.1
0.0
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
1000
ê_åoä≤ç◊ñE
DEC Th1
KUSA/A1
H162 H123 3521
U/mg protein î|ó{è„ê¥ÇÃGUSB äàê´
34.2
1.3 2.5
13.7
1.0
3.9
0.0
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
ê_åoä≤ç◊ñE
DEC Th1
UET13
KUSA/A1
‰`ë—ååcontrol
U/mg protein神経幹細胞と
骨髄間葉系幹細胞の
GUSB 活性値の比較
、 らによる福原康之 奥山虎之

71. Histochemical detection of GUSB-
positive cells in treated mouse brain
Bar equals 200 mm
Cortex
Subventricl
e
Olfactory
Distribution of GUSB activity
in the brain 2 or 8 wk after
transplantation

72. Reduction of GAGs contents after
transplantation
T-CS
0
100
200
300
400
500
600
Untreated
MPS VIITreatedMPS VIINormal
Untreated
MPS VIITreatedMPS VIINormal
Untreated
MPS VIITreatedMPS VIINormal
4wk 8wk 16wk
nmol/hr/mg
HA
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
UntreatedMPS VII
TreatedMPS VIINormal
UntreatedMPS VII
TreatedMPS VIINormal
UntreatedMPS VII
TreatedMPS VIINormal
4wk 8wk 16wk
nmol/hr/mg
*
* * **** **

73. Improvement of cognitive function
Acquisition (d0-d5)
Probe test
(d6)
NormalTreated
MPS VII
Untreate
d MPS VII
Target quadrant
Mean non-target
quadrants

74. 先天性代謝異常疾患に対する造血幹細胞移植の実施状況
梅沢班・辻 班・日本小児血液学会合同調査
梅沢明弘、辻 省次、加藤剛二、
加藤俊一、麦島秀雄、土田昌宏
移植実施調査期間
1985 ～ 2002 年
初回移植症例数
123 例
再移植
15 回、 3 回目の移植 1
回
実施施設
35 施設
疾患
ムコ多糖症： 63 （ I:9, IS:3,
II:39, III:2, IV:4, VI:4, VII:2)
副腎白質ジストロフィー： 35
I-cell 病： 6
異染性ロイコジストロフィ： 5
Gaucher 病： 4
GM1 gangliosidosis ： 4
その他： 6 （ Krabbe, Galactosialidosis, Alfa-
Mannosidosis, Nieman-Pick, Pompe,
Multiple sulfatase def.)
性別 男性： 100, 女性： 23
初回移植時年齢
0 歳： 5 ， 1 歳： 9 ， 1 歳： 19 ， 3 歳：
10 、 4 歳： 16 ， 5 歳： 10, 6 歳： 11 ，
7 歳： 12 、 8 歳： 7 ， 9 歳： 6 ， 10 歳
以上： 18

75. 移植の概要（初回移植）
• ドナー
同胞：５９例、両親：７例、非血縁者：５７
• ＨＬＡ適合度
一致：９８例、部分一致：２４例、不明：１例
• 移植細胞源
骨髄：１０３例、末梢血＋骨髄：１例、
臍帯血：１９例
移植の結果（初回移植）
• 生着
あり： ８１例 （ 65.8% ）
なし（拒絶）： ３３例 （ 26.8% ）
不明： ９例 （ 7.3% ）
• 転帰
生存： ９９例 （ 80.5% ）
死亡： ２４例 （ 19.5% ）

76. 平成 15 年 平成 16 年 平成 17 年
の の と細胞 調整（骨髄由来細胞）・培養法 開発 改良
バリデーション（移植、 Chip 、核型、表面マーカー、分化形
質）
倫理委員会審査中
疾病モデルマウスの SCID 化
間葉系細胞による「皮膚創傷治癒」に対する臨床研究
大動物（ブタ）による移植実験
ヒト に する細胞 関 CPC の設立 プロトコールの臨床 作製・倫理委員会審査
センターにおけ国立成育医療
る Cell Processing
Center

77. 細胞を用いたムコ多糖症 VII 型マウスに対する
中枢神経病変に対する細胞治療・遺伝子治療
（大橋十也、島田隆）
出生前診断・胎児治療
（末岡浩、林聡）
先天性代謝異常症に対する
造血幹細胞移植
日本国における現状（加藤俊一）
細胞治療におけるヒト細胞の
安全性の検討ならびにバリデーション
（梅澤明弘）
リソソーム病とは
遺伝的要因によるリソソーム酵素活性の低下
これがリソソーム外に排泄されず進行的に蓄積する。
細胞機能が低下し、臨床症状を呈する。
特異顔貌、
骨形成異常、
聴覚・視覚・心血管異常
関節可動域の異常、
精神発達遅滞
に する の先天性代謝異常症 対 幹細胞治療法 開発
臨床研究に関する倫理指針
厚生労働省、平成 16 年 12 月 28 日改訂
ヒト幹細胞等を用いる臨床研究に関する指針
厚生労働省、未定稿
国立成育医療センター倫理委員会
ヒト幹細胞推進プロジェクト会議
細胞供給源
骨髄由来細胞 （大橋、梅澤、加藤、宮本）
脂肪細胞 （島田）
唾液腺上皮 （中村）

78. 慶應義塾大学
微生物学教室
瀬川 薫
埼玉医科大学
五條 理志
許 俊英
血液内科
木崎 昌弘
福田 恵一
牧野 伸司
産婦人科
吉村 泰典
丸山 哲也
循環器内科
小川 聡
三好 俊一郎
西山 信大
がんセンター国立
清野 透

79. 慶應義塾大学
病理学教室
森 泰昌
竹田征治
循環器内科
小川 聡
福田恵一
牧野伸司
生理学教室
岡野栄之
島崎琢也
埼玉医科大学
五條理志
許 俊英
慶應義塾大学
血液内科
池田 康夫
木崎 昌弘
産婦人科
吉村 泰典
丸山 哲也
整形外科学教室
戸山芳昭
今林英明
越智健介
微生物学教室
瀬川 薫
NIH, USA
洪 実
熊本大学
田賀哲也
中嶋欽一
近畿大学
角田幸雄
加藤容子
National Cancer Center, Jpn
清野 透
Helix 研究所
磯貝 隆夫
杉山 友康
入江 亮太郎
中外製薬
東佐由美
大川広行

80. Takeda
Mori Tsuchiya
Matsumoto

81. National Center for Child Health and Development