1. РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(19)
RU
(11)
2320334
(13)
C1
(51) МПК
A61K31/194 (2006.01)
A61K31/375 (2006.01)
A61K31/702 (2006.01)
A61P35/00 (2006.01)
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
Статус: по данным на 17.11.2011 - прекратил действие
Пошлина:
(21), (22) Заявка: 2006128441/15, 07.08.2006
(24) Дата начала отсчета срока действия патента:
07.08.2006
(45) Опубликовано: 27.03.2008
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: Островская Л.А. и др. Сверхмалые дозы
доксорубицина: ингибирование опухолевого роста в
эксперименте. Бюллетень экспериментальной
биологии и медицины, 2002; 4:52-54. RU 2165253 С2,
20.04.2001. RU 2275913 C2, 10.05.2006. US 5762903 A,
09.06.1998. US 6890913 A1, 10.05.2005.
Адрес для переписки:
603005, г.Нижний Новгород, ул. Алексеевская, 1,
Нижегородская медицинская академия, патентный
отдел, пат. пов. И.Н. Балишиной
(72) Автор(ы):
Московцева Ольга Михайловна (RU),
Щербатюк Татьяна Григорьевна (RU)
(73) Патентообладатель(и):
Государственное образовательное учреждение высшего профе
Федерального агентства по здравоохранениюи социальному р
(54) СРЕДСТВО ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ РОСТА ОПУХОЛИ И СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ
РОСТА ОПУХОЛИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в ветеринарной практике для профилактики
злокачественных новообразований домашних животных и в медико-биологических исследованиях для разработки способов
профилактики и лечения онкологических заболеваний. Изобретение заключается в том, что животным до перевивки
лимфосаркомы Плисса per os ежедневно в дозе 90-100 мг/кг веса вводят препарат «олигохит актив» общим курсом не менее 7
дней. Изобретение позволяет расширить арсенал средств для ингибирования роста опухоли и увеличить продолжительность
жизни животных посредством введения данного препарата. 2 н.п. ф-лы, 2 табл.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии, а именно к экспериментальной
онкологии, и может использоваться в ветеринарной практике для профилактики злокачественных
новообразований домашних животных и в медико-биологических исследованиях для разработки
способов профилактики и лечения онкологических заболеваний.
Поиск новых подходов к профилактике злокачественных новообразований остается актуальной
медико-биологическим задачей.
Большинство способов ингибирования роста опухолей включают введение химиопрепаратов [2, 4,
14, 17, 20, 22, 29].
Известен способ профилактики опухолевой болезни в эксперименте, для осуществления которого

2. через 1 час после перевивки культуры опухолевых клеток экспериментальным животным у них из
подключичной вены забирают 1 мл крови в герметично закрытый флакон с антикоагулянтом,
добавляют туда циклофосфан, инкубируют смесь в течение 30 минут, реинфузируют крысам
внутривенно, струйно, однократно [22].
Известен способ ингибирования роста опухоли в эксперименте с помощью цитостатика
доксорубицина [17], который применяли в сверхмалых дозах на модели карциномы легких Льюиса у
мышей BDG. Препарат вводили однократно внутрибрюшинно на следующие сутки после перевивки
опухоли в дозах 10-5
, 10-10
, 10-15
и 10-20
М. Для сравнения использована стандартная терапевтическая
доза доксорубицина 8 мг/кг массы тела животного, что соответствует 1,4×10-3
М. Найдена способность
доксорубицина в сверхмалых дозах вызывать противоопухолевый эффект при указанной постановке
опыта, сопоставимый с эффектом, полученным при применении стандартной терапевтической дозы.
На 12 сутки размер опухоли у экспериментальных животных, получавших стандартную и сверхмалую
дозы химиопрепарата, был уменьшен в среднем на 80% по сравнению со значениями у контрольных,
т.е. не получавших химиопрепаратов, животных.
Однако предложенные способы, наряду с высокой эффективностью ингибирования роста опухоли,
вызывают опосредованные патологические изменения в других органах и системах организма, что
является основным ограничением к их применению.
Недостатком ряда исследований, в которых экспериментальная оценка эффективности применения
разработанных способов ингибирования опухоли проводится в условиях in vitro [2, 5, 7, 16, 29],
является неполное представление о побочных эффектах действия используемых веществ на организм.
В большинстве способов ингибирования роста опухолей, эффективность применения которых
показана в условиях in vivo, в эксперименте исследуемые вещества вводят после индукции или
трансплантации опухоли [12, 14, 16, 20, 26].
Способов ингибирования роста опухоли при введении веществ до индукции или трансплантации
опухоли не обнаружено.
Поэтому авторы полагают, что техническое решение является новым и соответствует критерию
«изобретательный уровень».
В задачу предлагаемого изобретения положено расширение арсенала средств для ингибирования
роста опухоли, а также разработка способа применения нового средства.
Поставленная задача достигается тем, что предлагается:
1. Применение комплекса «олигохит актив» в качестве средства для ингибирования роста опухоли.
2. Способ ингибирования роста опухоли в эксперименте, включающий введение лекарственного
средства, отличающийся тем, что животным до перевивки опухоли per os ежедневно в дозе 90-100
мг/кг веса вводят препарат «олигохит актив» общим курсом не менее 7 дней.
«Олигохит актив» (иногда употребляют синоним - олигосахарид хитозана сукцинат-аскорбат) (ТУ
9289-004-57184729-03) представляет собой водорастворимый продукт, в котором олигосахарид
хитозана (олигохит) (70%), сукцинат (15%) и аскорбат (15%) находятся в ионной связи друг с другом.
В физиологических условиях янтарная кислота диссоциирована, поэтому название ее аниона -
сукцинат, часто применяют как синоним термина «янтарная кислота», а аскорбат - как синоним
термина «аскорбиновая кислота». Исследования последних лет показали наличие у сукцината
биологической активности с уникальным сочетанием проявлений: по отношению к здоровому
организму он выступает в роли адаптогена, а при наличии патологических проявлений демонстрирует
нетипично высокий для адаптогенов терапевтический эффект [31]. Сукцинат является нормальным
клеточным метаболитом, играет большую роль в обеспечении энергетического баланса в клетке [3, 10,
15], обладает антигипоксическим [13, 31, 32], антиоксидантным [8, 31], радиопротекторным [11] и
детоксицирующим действиями [31]. Известны несколько работ, в которых сообщается о результатах
применения янтарной кислоты (ЯК) при опухолевом росте: T.Kamata с сотр. (1970) наблюдали
торможение роста саркомы М-1 у крыс после введения ЯК [15], А.Л.Коваленко и М.Г.Романцов (1999)
показали, что в результате введения ЯК наблюдается существенное уменьшение частоты спонтанных
опухолей мышей и увеличение максимальной продолжительности их жизни [8]; Е.В.Козырева (1997)
выявила снижение показателя смертности онкологических больных на фоне комплексного применения

3. янтарной, лимонной и о-кетоглутаровой кислот с витаминами и травами [9]. И.А.Помыткин и
С.П.Соловьев предложили в комплексе с изотопологами использовать соль ЯК как дополнительное
средство в лечении новообразований [19]. Однако в работе В.Н.Анисимова и М.Н.Кондрашовой
показано, что подкожные введения животным сукцината натрия в дозе 50 и 250 мг/кг в течение 10
дней, начиная с 3-го дня после трансплантации опухолей, мало влияли на рост перевиваемых опухолей
у мышей и крыс [1].
В настоящее время аскорбиновая кислота (АК) применяется в комплексной терапии
злокачественных новообразований. Однако данные литературы о влиянии АК на рост опухолей
противоречивы. Л.С.Трухановой (1987) на модели канцерогенеза, индуцированного 1,2-
диметилгидразином и эстрадиолдипропионатом, показано, что при введении мышам линии СВА
растворов АК в концентрациях 0,3; 0,75; и 1,5% наблюдается отчетливая тенденция к уменьшению
массы опухоли с увеличением концентрации АК [24]. В работе М.Polydock et al. показано увеличение
продолжительности жизни (в 2 раза) мышей с асцидной карциномой Эрлиха на фоне введения АК в
дозе 10 мг/кг [33], а по наблюдениям Т.Shingu et al. - ускорение роста опухоли (доза 25 мг/сутки) [34].
В эксперименте И.А.Харьковской с сотр. введение морским свинкам АК в дозе 0,3 мг/кг массы
приводило к полному рассасыванию саркомы, а в дозе 1 г/кг - ускорение роста опухоли [27].
Следовательно, вопрос о возможностях применения этого витамина в онкологии остается открытым.
В последние годы в различных областях медицины широко применяется хитозан и его
производные. Хитозан получают путем переработки морских ракообразных, а после ферментативного
расщепления высокомолекулярного хитозана образуется новый, водорастворимый продукт -
олигосахарид хитозана (синоним - олигохит). В таком виде он легко абсорбируется в кишечнике и
быстро попадает в системный кровоток, а затем с током крови доносится к «органам-мишеням». Одно
из новых направлений использования его в качестве носителя для лекарственных форм [28].
К.А.Трескуновым и Б.А.Комаровым предложено применять хитозан в виде солевой формы с L-
глутаминовой кислотой в сочетании со специальными фитосборами параллельно с лучевой терапией и
комплексной химиотерапией до и после операции при лечении онкозаболеваний [23].
Возможность применения препарата «олигохит актив» в качестве средства для ингибирования роста
опухоли в эксперименте была показана на модели лимфосаркомы Плисса.
Выбранная нами модель экспериментальной опухоли лимфосаркома Плисса (ЛФС), полученная в
1958 году после подкожной перевивки опухоли, возникшей у крысы, получавшей 3,3 дихлорбензидин,
характеризуется следующими особенностями: состоит из мягких, округлой формы клеток, большая
часть которых занята крупным ядром; хроматин располагается главным образом в периферической
зоне ядра; ядрышки крупные, гиперхромные; цитоплазма отличается умеренной базофилией. Опухоль
обладает ярко выраженным инфильтративным ростом в пограничные соединительную и жировую
ткань, а также мышцы; метастазирует [18].
Способ ингибирования роста опухоли в эксперименте был разработан на модели лимфосаркома
Плисса; он заключается в том, что животному до перевивки опухоли ежедневно per os дают раствор
препарата «олигохит актив» концентрацией 90-100 мг/кг веса, общим курсом не менее 7 дней. Выбор
дозы и курса введения обоснован как теоретическими данными, так и собственными
экспериментальными исследованиями. В статье М.В.Васина с сотр. показано, что максимальный
антитоксический и антиоксидантный эффект достигается при дозе ЯК 100 мг/кг веса [6]; а
Н.И.Федотчева с сотр. выявили, что в гипометаболических состояниях эффективными дозами при
введении сукцината перорально являются 50-100 мг/кг веса [25]. Срок введения веществ выбран как
минимальный и соответствующий однократному введению для человека [21]. В наших исследованиях
показано, что использование препарата «олигохит актив» в концентрации 90-100 мг/кг веса, общим
курсом 7 дней, эффективно для коррекции морфологического состояния печени [30] и
свободнорадикального баланса организма опухоленосителя.
Проведены исследования и выявлена эффективность применения препарата «олигохит актив» для
ингибирования роста опухоли на модели лимфосаркома Плисса.
Эксперимент выполнен на 20 белых беспородных крысах, которые были разделены на две группы:
контрольная и опытная.

4. 1 группа - контрольная (n=10);
2 группа - опытная (n=10).
В опытной группе здоровым животным ежедневно per os вводили препарат олигохит актив из
расчета 90-100 мг/кг веса, общим курсом 7 дней. Животные контрольной группы получали чистую
воду по той же схеме.
Через день после отмены препарата животным контрольной и опытной групп в область правого
бедра подкожно трансплантировали клетки опухолевого штамма лимфосаркомы (ЛФС) Плисса в 0.5
мл физиологического раствора. Штамм ЛФС Плисса (приобретен в ОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМП,
Москва) - экспериментальная опухоль, полученная в 1958 году после подкожной перевивки опухоли,
возникшей у крысы, получавшей 3,3-дихлорбензидин [10].
На 10, 12 и 19 сутки после трансплантации опухоли производили линейные замеры опухоли
штангенциркулем. И вычисляли средний объем опухоли V (мм3
) по формуле [21]:
V=(а·b2
)/2, где а - длина, b - ширина.
Степень ингибирования роста опухоли определяли по показателю торможение роста опухоли,
вычисляемого по формуле [21]:
ТРО=(Vконтроля-Vопыта)/Vконтроля·100%,
где V - средний объем опухоли (мм3
) в подопытной и контрольной группах, соответственно, на
конкретный срок.
Значимый противоопухолевый эффект должен сохраняться не менее 7 суток.
Количественные критерии оценки ингибирующего эффекта
При статистической обработке результатов для оценки значимости цифровых данных использовали
t-критерий Стьюдента, используя поправку Бонферонни.
Полученные результаты показали, что применение олигосахарид хитозана сукцинат-аскорбата
(«олигохит актив») до перевивки опухолевого штамма ЛФС Плисса из расчета 90-100 мг/кг веса,
общим курсом не менее 7 дней тормозит рост лимфосаркомы Плисса в среднем на 63.7% (табл.1), что
способствует увеличению продолжительности жизни животных этой группы на 77.6% (табл.2).
Таблица 1.
Торможение роста лимфосаркомы Плисса на фоне введения «олигохит актив» до перевивки опухоли
Срок роста опухоли, дни Объем опухоли в контрольной группе, см3 Объем опухоли в опытной группе, см3 ТРО, %
10 35,5±3,6 12,1±1,5* 65,9
12 75,6±6,4 30,9±2,6* 59,1
19 179,9±14,6 61,0±5,46* 66,1
* - различия достоверны при р 0,05 по сравнению с контрольной группой.
Таблица 2.
Продолжительность жизни животных - опухоленосителей на фоне введения «олигохит актив» до перевивки лимфосаркомы Плисса. дни
Номера крыс Контрольная группа Опытная группа
1/31 17 31
2/32 19 32
3/33 20 37
4/34 18 39
5/35 22 38
6/36 23 30
7/37 20 31
8/38 20 37
9/39 18 38
10/40 20 37
Дни, М±m 19,7±1,83 35,0±3,52*
* - различия достоверны при р 0,05 по сравнению с контрольной группой.

5. Таким образом, изучение биологического действия препарата олигохит актив на экспериментальной
модели перевивной опухоли выявило, что применение препарата «олигохит актив» до перевивки
клеток опухоли приводит к ингибированию роста опухоли, что позволяет предложить применение
данного способа для профилактики злокачественных новообразований домашних животных в
ветеринарной практике и использования в медико-биологических исследованиях для разработки
способов профилактики и лечения онкологических заболеваний.
Пример №1.
1) Крысе №10, весом 225 г в течение 7 дней внутрижелудочно с помощью зонда вводили чистую
воду по 1 мл. На 9 день после начала манипуляций в область правого бедра подкожно
трансплантировали клетки опухолевого штамма лимфосаркомы (ЛФС) Плисса в 0.5 мл
физиологического раствора. Штамм ЛФС Плисса приобретен в НИИ Экспериментальной диагностики
и терапии опухолей РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН (г.Москва).
На 10, 12 и 19 дни после трансплантации клеток ЛФС Плисса производили линейные замеры
опухоли штангенциркулем и вычисляли средний объем опухоли V (мм3
) по формуле [21]:
V=(а·b2
)/2, где а - длина, b - ширина.
Объем опухоли увеличивался следующим образом: 10 день роста опухоли - 40 мм3
; 12 день - 75
мм3
; 19 день - 183 мм3
.
Продолжительность жизни этого животного составила 20 дней.
2) Крысе №38, весом 220 г в течение 7 дней внутрижелудочно с помощью зонда вводили по 1 мл
раствора «олигосахарид хитозана сукцинат-аскорбат» в дозе 90-100 мг/кг веса животного. На 9 день
после начала манипуляций в область правого бедра подкожно трансплантировали клетки опухолевого
штамма лимфосаркомы (ЛФС) Плисса в 0.5 мл физиологического раствора.
На 10, 12 и 19 дни после перевивки опухоли ее объем составил 11 мм3
; 28 мм3
и 62 мм3
,
соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли определяли по показателю торможение роста опухоли (ТРО)
[21]:
ТРО=(Vконтроля-Vопыта)/Vконтроля·100%.
Введение «олигосахарид хитозана сукцинат-аскорбата» до перевивки ЛФС Плисса способствовало
торможению роста опухоли на 72.5, 62.7 и 63.9%, соответственно выбранным срокам.
Продолжительность жизни животного №38 составила 37 дней.

6. Формула изобретения
1. Применение препарата "олигохит актив", обладающего свойством ингибировать лимфосаркому
Плисса.
2. Способ ингибирования роста лимфосаркомы Плисса в эксперименте, включающий введение
препарата "олигохит актив" животным до перевивки лимфосаркомы Плисса per os ежедневно в дозе
90-100 мг/кг веса общим курсом не менее 7 дней.
MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за
неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

7. Дата прекращения действия патента: 08.08.2008
Извещение опубликовано: 20.07.2010 БИ: 20/2010