12. supernatan dibuang dan sedikit DMSO ditambahkan ke sumur untuk
melarutkan kristal biru-violet, kemudian nilai kerapatan optik (OD) yang
terbaca sebesar 570 nm.
Setelah 48 jam budidaya, MTT ditambahkan ke
setiap sumur selama 4 jam.
Senyawa dilarutkan dengan sedikit DMSO dan diencerkan dengan lima
konsentrasi yang berbeda dengan DMEM (Dulbecco's modified eagle
medium) sebelum ditambahkan ke dalam sumur sel.
Suspensi sel di isikan ke 96 sumur sel dan di biakkan pada
suhu 37 ° C, dengan 5% CO2 dalam inkubator selama 24 jam.
Efek sitotoksisitas senyawa 1-5 diperkirakan in vitro terhadap
sel kanker MCF-7 dan NCI-H460 dengan menggunakan
assay MTT.