SlideShare a Scribd company logo
1 of 112
Сучасні рішення для моніторингу системи
гемостазу в клініко-діагностичній
лабораторії
Остапенко Андрій Олексійович
Основні задачі лабораторного
дослідження
 Скринінг гемостазу
 Діагностика ДВЗ-синдрому
 Діагностика тромбофілії
 Контроль протитромботичної терапії
Вибір підходу
 Зрозумійте, навіщо це потрібно робити
 Знайте, що робити
 Зрозумійте, що робити з результатами
Що робити ?
1.Експрес-діагностика
2.Планова діагностика
Позалабораторна/лабораторна
експрес-діагностика гемостазу “point
of care”
 Інтегральна інструментальна
 Спеціалізоване
 інструментальне використання
«швидких» тестів
Інтегральна приборна оцінка
гемостазу
 Класична тромбоеластографія
 Ротаційна тромбоеластографія
 Пьєзоеластографія
Схема класичної тромбоеластографії за принципом Хартерта (1949)
Зразок поміщають в обертову канаву, через внутрішній штифт, підвішений
на торсіонному елементі, процес коагуляції зразка відбивається на екрані
приладу.
Прилади класичної
тромбоеластографії
ТЭГ 5000 (США) ТЕМА (ІТАЛіЯ)
Одноканальний
тромбоеластограф
Моно ТЕМ-А
 Автоматичний MonoTEM-A
має просте управління,
автоматичне переміщення
зразка в вимірювальну зону,
автоматичне калібрування і
вирівнювання
 Можливе об'єднання до 4
пристроїв з одним блоком
управління (комп'ютером) в
комплекті.
Схема принципу ротаційної
тромбоеластометрії
Зразок поміщають в нерухому канаву, коли змінюється рух внутрішнього
штифта, підвішеного на торсіонному елементі, процес коагуляції зразка
відбивається на екрані приладу.
Прилад ротаційної
тромбоеластометрії
РОТЕМ
R -Время свертывания
K-Время тромбинообразования
MA-Максимальная
амплитуда
Максимальный
лизис
Скорость лизиса
Скорость свертывания
Основні показники ТЕГ
Показники ТЕГ та гемостаз
 R – критерій активності плазмових факторів
гемокоагуляції
 К , угол альфа – критерій швидкості сзідання
визначається фібриногеном і тромбоцитами
 MA - показник механічної міцності згустку, що
визначається кількістю і якістю тромбоцитів,
кількістю і якістю фібриногену
Зразки тромбоеластограми для різних клінічних
станів
Аналізатор АРП-01
Графік дослідження та
показники АРП-01
Основні блоки дослідження
стану системи гемостазу
 Судинно-тромбоцитарний
 Гемокоагуляція
 Фізіологічні антикоагулянти
 Фібрінолітична система
 Вплив фармпрепаратів
Основні механизми реакції
первинного гемостазу
 Первинний гемостаз
 спазм судин
 активація тромбоцитів
Мікроциркуляторний гемостаз
(первинний гемостаз)
 Пошкодження ендотелію
 Вивільнення АДФ, вплив колагену
 Адгезія тромбоцитів
 Оборотна агрегація тромбоцитів
 Незворотна агрегація тромбоцитів
 Утворення мікротромбів
Основні методи оцінки
мікроциркуляторного
(судинно-тромбоцитарного)
блоку гемостазу
 час кровотечі
 Кількість тромбоцитів
 Середній розмір
 Агрегація тромбоцитів
Дослідження часу кровотечі за Ivy
Вимірення кількості тромбоцитів
(тромбоцитопенія)
– 1.Хвороби кісткового мозку
– 2.Посилене руйнування
– медикаменти,алкоголь
– аутоімунні захворювання,
– Двійкові числа
– 3.Гіперспленізм
Тромбоцитоз
 1. Реакційний
 Інфекція
 Післяопераційний
 Постспленоектомічний
 Онкології
 Гостра крововтрата,
 2.Мієлопроліферативні захворювання
Методы вимірення кількості та
розмірів тромбоцитів
 Фазово-контрастна мікроскопія
(референтний метод)
 Метод Фоніо
 Гемоаналізатори
Чи потрібно досліджувати
агрегацію тробоцитів?
Потрібно
 Для діагностики
тромбоцитопатій
(обов’язково)
Не доведено
 Для виявлення активації
внутрішньосудинного
ссідання ( наприклад при
вагітності)
 Для моніторингу
антиагрегантної терапії
Принцип вимірення агрегації
тромбоцитів за Born
 Кювета зі зразком.
 Мішалка (на дні канави)
 Датчик джерела світла
(лампи) →
 Під вимірювальним
каналом знаходиться
магнітна мішалка, мотор
якої автоматично
запускається в момент
початку вимірювання.
 Результат аналізу
автоматично
передається на дисплей.
Тромбоцитарний агрегометр
AТ-02
 Вимірювання 1 каналу
 Можливість роботи з пробою до 30 000
тр / см. куб.
 Автоматичний розрахунок агрегації та
кофактора ристоміцину-віллібранда
 Виключно простий і зручний інтерфейс
програми
 Збереження результатів
 Можливість роботи в мережі
 Найнижча ціна пристрою і витратних
матеріалів.
 ООО ТПО МедиоЛаб
Методичні особливості дослідження
агрегації тромбоцитів за Born
 Показники агрегації
 агрегації швидкість
 %агрегації , % дезагрегації
 Стандартна концентрація
тромбоцитів
 Стандартний індуктор
 Нормальні значення
Вторинний гемостаз
 Реакції гемокоагуляції
 Реакції антикоагулянтної системи
Внешний Внутренний
путь активации путь активации
ТФ Контактная активация
фактор VII ПК ВМКГ ХП XI IX
ФЛ Са++
Фактор X Фактор V
Протромбин
ТРОМБИН
Фибриноген --- РКФМ ------Фибрин
Схема гемокоагуляції
Скринінг гемокоагуляції
 ПЧ
 АЧТЧ
 РКФМ (орто-фенолтралиновий метод)
 Фібриноген ( метод Клаусса)
 Тромбіновий час ?????
Протромбиновий час (ПЧ)
 Тест активності гемокоагуляції по «зовнішньому»
шляху. Контроль пероральної антикоагулянтної терапії
за допомогою AВC
 Він найбільш чутливий до VII фактору.
 Подовження: від 55 % ↓ нормальна активність F VII
 Критерій антитромботичної активності: зниження f II і f
X (через кілька днів)
Методичні особливості виконання
тесту Протромбіновий час
 Якість тромбопластинів
Стабільність
Показник МІЧ
 показники розрахунку
протромбіновий індекс
% Швидко
МНО
ПЧ – ПОДАННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ
1) 1989,1, Лабораторная медицина, А.Б.Косырев, А.Б. Добровольский
два варианта: % по Квику и МНО
2) 2005, «Лабораторная диагностика нарушений гемостаза»
В.В.Долгов, П.В.Свирин
рекомендация: % по Квику и МНО
3) 2007, Рекомендации В-ой Ассоциации по изучению тромбозов, геморрагий и
патологии сосудов им. А.В. Шмидта - Б.А. Кудряшова и -ской Ассоциации
медицинской лабораторной диагностики по лабораторным методам
исследования системы гемостаза
«Представление результатов в виде протромбинового времени больного с
указанием значений для нормальной плазмы, или протромбинового
индекса, не позволяет количественно оценить величину отклонения
показателя от нормы. Эти показатели использовать не
рекомендуется.»
ПТІ чи % Квік ?
 ПТІ =(ПЧ нор. плазми/ПЧ пацієнта) х 100
 % Квік –більш якісна оцінка вмісту факторів
ПК
Чи можливо визначати
ПЧ/МНС в капілярній крові ?
 Метод Owren
Активований частково тромбопластиновий час
(АЧТЧ)
 Тест активності «внутрішнього» шляху гемокоагуляції
 Залежить від активності всіх факторів, крім VII і XIII
 Нормальний рівень: 25-35 сек
 Моніторинг гепаринової терапії та скринінг гемофілії
Активований частково тромбопластиновий час (АЧТЧ)
 Пролонгація: наявність гепарину, інгібіторів
тромбіну, PDF, наявність вовчакового
антикоагулянту
 Подовження при зниженні факторів
«внутрішнього» шляху < 30% від норми
Тест Активований частково
тромбопластиновий час (АЧТЧ)
 Чутливість до факторів
 Чутливість до гепаріну
 Оптична прозорість
АЧТЧ -результати
 АЧТЧ сек
 АЧТЧ « відношення» = АЧТЧ пацієнта/АЧТЧ норма
Методи оцінки розчинного
фібрину (РКФМ)
 Неспецифічні тести:
 Протамін-сульфатний (якісний)
 Етаноловий (якісний)
 Орто-фенантроліновий (якісний)
 Імунологічний ( FM-test) (напівякісний)
 ІФА (кількісний)
 Імунотурбідіметричний LiaTest FM (Stago)
(кількісний)
Методи дослідження фібриногену
в плазмі
 Ваговий метод ( метод Рутберг)
 Коагулометричний ( метод Клаусса)
Коагулометричний метод
дослідження фібриногену (метод
Клаусса)
 Мінімальна кількість плазми
 Швидкість дослідження
 Точність
 Автоматизація
Тромбіновий час
 Критерій активності гемокоагуляції ??
 Як оценювати результат
 «короткий тромбіновий час» 11-13 сек ( 6
NIH/мл)
 «довгий тромбіновий час». 18-21 сек (3
NIH/мл)
Основні шляхи регуляції
фібринолітичної активності
ТАП ПЛАЗМІНОГЕН Урокіназа
ІТАП 1 ІТАП 2
ПЛАЗМІН АНТИПЛАЗМІН
Фібриногенфібрин
Продукти деградації
ПДФ/ф Д-дімер
Методи дослідження
фібринолітичної активності
 Лізис еуглобулінового згустку
 Виявлення активності
 тканинний активатор плазміногену (TAP)
 Інгібітор ТАП
 швидкодіючий антиплазмін
 продукти розпаду фібриногену/фібрину
 (PDF, D-дімер)
Основні фази розвитку
ДВЗ-синдрому
 1 фаза - гіперкоагуляція
 2 фаза - гіпокоагуляція в поєднанні з
кровотечею на тлі дефіциту факторів згортання і
активацією коагуляції
 Фібриноліз
 Фаза 3 - закінчення розвитку синдрому
Діагностика ДВЗ-синдрому
 Кількість, розмір, агрегація тромбоцитів
 АЧТЧ
 ПЧ
 РКФМ
 Фібриноген
 Антитромбін
 Протеін С
 Оцінка фібринолітичної активності
 Проби переносу
Контроль протитромботичної
терапії
 Контроль антитромбоцитарної терапії
 Контроль антикоагулянтної терапії
 гепарини
 пероральні антикоагулянти
 АВК (варфарин)
 інгібітори тромбіну
 інгібітори фактора Ха
 Контроль фібринолітичної терапії
Контроль антиагрегантної терапії
 Види препаратів
 Інгібітор тромбоцитів ЦОГ-1:
ацетилсаліцилова кислота (аспірин, кардіоаза,
тромбоаза, кардіомагніл)
 інгібітори тромбоцитарних АДФ-рецепторів:
похідні тіенопіридину (тіклід, плавікс
(Клопідогрель), Прасугрель, Тікагрелор
(Брілінта)
 Інгібітори рецепторів тромбоцитів IIb-IIIa:
(Абсиксимаб Реопро, Фрамона)
Механізм дії
АСК та НПВ
Арахідонова кислота АСК
Циклооксігеназа -1 тромбоцитів
простагландін G2
НПВ
Пероксідаза
Циклооксігеназа-2
Простагландін H2
Простациклін сінтетаза Тромбоксан сінтетаза
Простациклін Тромбоксан A2
PG F1a thromboxane B2 в сечі
Метаболізм клопідогрела(Плавікс)
Tabassome Simon, M.D. с соавт., 2009 ,
JACC Cardiovasc Interv. 2009 Nov;2(11):1095-101
Клопідогрел
Внутрикишечное всасывание
(АВСВ1)
Эстеразы
Неактивні метаболіти
(около 85%)
Внутрипеченочный
метаболизм
CYP2C19, 2C9, 3A4,
2B6, 1A2
Активні метаболіти
(15%)
P2RY12
рецептор
АДФ
ГП IIb/IIIa
рецептор
ITGB3
Тромбоцит
КЛОПІДОГРЕЛЬ - це проліки.
Біотрансформація відбувається в
печінці.
Активний метаболіт – похідне тіолу –
утворюється при окисленні
КЛОПІДОГРЕЛЮ
до оксоклопідогрелю з подальшим
гідролізом.
Таке окислення відбувається за участю
цитохрому Р450.
Активний метаболіт, який може бути
виділений in vitro, швидко і необоротно
зв'язується з тромбоцитарними
рецепторами і пригнічує їх агрегацію.
Крім того, велика частина клопідогрелю
розщеплюється естеразами на
неактивному шляху.
Неактивний метаболіт є похідним
карбонової кислоти,
становить близько 85% циркулюючого
з'єднання плазми.
Ролі в активності клопідогрельних
білків з відомим генетичним
Поліморфізмом.
 Кишкова абсорбція клопідогрелю проліку обмежена
кишковим насосом для випоту P-глікопротеїну,
закодований геном ABCB1.
 Більшість з них пролікування метаболізується в неактивні
метаболіти повсюдними ефіразами.
 Меншість біоактивується різними ізоформами цитохрому
P450 (CYP) в активні метаболіти.
 Ці метаболіти необоротно антагонізують аденозин
дифосфатний (АДФ) рецептор (закодований геном P2RY12),
який в свою чергу інактивує рецептор фібриногену
(рецептор глікопротеїну [GP] IIb/IIIa закодований геном
ITGB3), що бере участь в агрегації тромбоцитів.
Методи дослідження дії препаратів
1.Класична оптична агрегометрія
(метод Born)
2. Вимірювання метаболітів тромбоцитів
(тромбоксанУ В2 в сечі)
3. PFA 100 /Innovance
4. Агрегометрія цільної крові (метод імпедансу)
Multiplate
5.Veryfy Now
Прилад для дослідження
функції тромбоцитів “point of care” PFA-100
Прилад та картридж Схема вимірення
Принцип дослідження PFA-100
Аналізатор функції тромбоцитів “point
of care” Multiplate
VeryfyNow-№1 в США
VerifyNow: принцип дії
Тест – набор: Aspirin Assay P2Y12 Assay IIb/IIIa Assay
Дезагрегант: Ацетилсалицил
овая кислота
(Аспирин)
Тиенопиридины
(Тиклопидин,
Клопидогрель,
Прасугрель)
Блокаторы ГП IIb/IIIa
рецепторов тромбоцитов
(Рео-Про, Монафрам и
т.п.)
Агонист агрегации: Арахидоновая
кислота
Комплекс АДФ/ПАТР
(TRAP) (пептид-
активатор тромбиновых
рецепторов тромбоцитов)
ПАТР (TRAP) (пептид-
активатор тромбиновых
рецепторов тромбоцитов)
Вакуумные пробирки для
забора крови:
2 мл, с р-ром цитрата натрия 3.2% (синяя
крышка)
2 мл, с гепарином
(зеленая крышка) или 2
мл, с р-ром цитрата
натрия 3.2% (синяя
крышка)
Продолжительность
исследования:
5 минут 3 минуты 2 минуты
Условия хранения и
транспортировки
2°С - 25°С 2°С - 25°С 2°С - 8°С
18°С - 25°С – не более 8
нед.
Размеры аппарата
(Ш×Г×В): 24.1 см × 23.6 см × 16.5 см
VerifyNow: технична інформація
Генетичні ризик фактори
неефективності АГ терапії
 Поліморфізм цитохрома P 450
 Гений поліморфізм варіанту CYP2C19
Контроль терапії
оральними антагоністами вітамину К
 Механізм дії ОАК
 Методи контролю
МНС
Протеін С
Механизм действия ОАВК
64
Hirsh, J. et al. (2001); Deitcher, S.R.
(2005)
Точки застосування дій ОАВК
Фибриноген Фибрин
* Измененные факторы
Антагоністи вітаміну К активні проти декількох факторів,
що беруть участь в каскаді коагуляції. Deitcher, S.R. (2005)
Основні методичні особливості
дослідження МНС
 Апаратна залежність
 Середній час нормальної плазми
 Точність дослідження МІЧ
 Локальна калібровка
Середній час нормальної плазми
 Середній час нормальної плазми
визначається як середній геометричний
протромбіновий час свіжої цитратної
плазми 20 донорів
Локальна калібровка
 Дозволяє підвищити точність
індрординації (дослідження) без
використання МІЧ
 Дозволяє уникнути апаратної помилки
Набір прямої калібровки МНС
Графік прямого дослідження МНС
70
Wittkowsky, A.K. (2005)
Половина тривалості життя вітаміну К
залежних факторів згортання крові
Вітамін К –необ-
хідий для
сінтезу факторів
сзідання крові
Результати дослідження МНС
в контрольних образчиках,
цикл 1-10 разділ «Коагулологія»
Реагенти n
Середня
норма
CV%
Середнє
патол
CV%
Техпластін-тест (К) 102 0,94 14,5 1,51 22,8
Ренампластін 296 1,00 9,9 1,49 14,7
Техпластін-тест (R) 403 0,94 14,4 1,62 18,5
Thromborel S 139 0,94 7,5 1,54 11,2
RecombiPlasTin/2G 40 0,98 5,1 1,49 10,9
Neoplastin Plus 85 1,02 6,2 1,73 10,1
Допустимий діапазон: сред ± 22%
США, Великобританія: сред ± 15%
ДОЛЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ОЦЕНКИ ОТНОСИТЕЛЬНОГО СМЕЩЕНИЯ,
УДОВЛЕТВОРЯЮЩИХ КРИТЕРИЯМ КАЧЕСТВА, ДЛЯ РАЗЛИЧНЫХ
НАБОРОВ РЕАГЕНТОВ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ МНО
89,2
96,3
92,9
91,9
88,9
94,3
95,7
98,9
97,2
100,0
97,8
68,8
90,0
81,3
82,8
86,2
89,7
78,3
92,4
95,4
94,4
100,0
63,5
72,4
74,4
77,4
77,8
82,3
85,0
86,2
93,8
100,0
100,0
50 60 70 80 90 100
Технология-Стандарт, Техпластин-тест (К)
Human, HemoStat Thromboplastin-SI
Технология-Стандарт, Техпластин-тест (R)
Ренам, Тромбопластин
Ренам, Тромбопластин с кальцием
Ренам, Ренампластин
Tcoag, TriniCLOT PT Excel S
Stago/Roche, Neoplastin Plus
Siemens, Thromborel S
ILab., HemosIL PT-Fibrinogen HS Plus
ILab., HemosIL RecombiPlasTin 2G
Доля удовлетворительных результатов, %
1,06 (цикл 2-11) 1,86 (цикл 1-11) 2,68 (цикл 3-11)
Якість вконання
тестів ПЧМНС
в лабораторній практиці
 Якість реагенту (вибір реагенту)
 Рівень досліджень що проводяться
(професійна підготовка персоналу, своєчасне технічне
обслуговування, організація лабораторних робіт…)
 Преаналітичний етап (стандартизація, одноразові
системи … Концентрація цитрату – 0,105 - 0.109 моль/л
для контролу терапиії ОА)
Корисність лабораторних досліджень при
терапії НОАК
 Підбір дози леків – НІ
(НОАК ефективні та безпечні при стандартних
дозах у пацієнтів без ниркової недостатності
Вимірення концентрації в крові – ТАК
(для вимірення рівня в крові в залежності від
клінічної ситуації)
 Необхідність лабораторного тестування терапії
НОАК :
 -до початку лікування
 -при можливості проведениня
інвазивногохірургічного втручання
 Перед початком тромболітичної терапії ( при
ішемічному інсульті)
 Можливе тестування
 через 1-2 тижні від початку терапії, коли
досягається стабільна гіпокоагуляція
Dabigatran Rivaroxaban
Загальні тести Екаріновий час (Ecarin
time)
Модифікований
тромбіновий час
(Hemoclot)
• ПЧ (відношення
пацієнтнорма)
Специфічні
тести
• анти-IIa активність
( хромогений метод)
• Анти Xa активність
• (хромогений метод)
Лабораторний контроль
застосування гепарину
 при екстракорпоральному кровообігу
(ЕК) (2-4ед.мл крові)
 гепарінотерапії НФГ
 гепарінотерапія ФГ
Контроль застосування
гепаріну при ЕК
 АЧСК (ACT)
 ручний ( метод Hattersley)
 автоматизований (Hemochron,
Response, JR)
метод Hattersley
 12 мг діатомної землі + 2 мл крові
 110-120 сек норма
 400 сек - початок ЕК
 600 сек-під час ЕК
Ваше рішеннч при виміренні гепаріну
в крові -Actalyke
 Портативен
 Простота в зверненні
 Наявність принтера
 Підвищена точність
 Широкий діапазон
вимірюваного рівня
гепарину в крові
HEMOCHRON Jr Signature / Signature+
( ITC)
 Можливі дослідження
– Цільна кров (капілярна, венозна)
– Цитратна кров
HEMOCHRON
 У системах HEMOCHRON Jr Signature і Signature+
використовуються однакові одноразові засоби.
 Доступні два тести PT, один для використання зі свіжою
цільною кров'ю, інший для використання з цитрованою
цільною кров'ю.
 Свіжий кювет крові можна використовувати як з
капілярними, так і з венозними зразками.
 Існує два рівні EQC, що забезпечуються обома системами
та уніфікованим КК цільної крові для кожного типу тесту.
 Системи відрізняються своїми можливостями блокування
та відповідності, оскільки Signature+ включає набагато
більше функцій для забезпечення відповідності.
Контроль гепарінотерапії НФГ
 АЧСК (АСТ)
 АЧТЧ (збільшення в 2-2,5 рази)
 АТ-III
 Кількість тромбоцитів
 Виявлення концентрації в крові (фактор
Х-а активність)
Контроль гепарінотерапії ФГ
 Виявлення концентрації в крові (фактор
X-a активність)
 АТ-III
 Кількість тромбоцитів
Гепарін-индукована
тромбоцитопенія
Методи діагностики ГІТ
 Експрес імунохроматографічний метод
наявності Ig G антитіл (Stago)
 Експрес метод гель-дифузії
 Метод агрегації відмитих тромбоцитів
використанням плазми пацієнта (HIPA)
 ІФ метод виявлення різних класів антитіл
(IgG,IgM,IgA) ( Instrumentation Lab)
Виявлення антитіл до тромбоцитів
Контроль фібринолітичної ії
 Фібриноген
Д-дімер – продукт розщіплення фібрину
 Під впливом плазміну відбувається
розщеплення як фібрину, так і
фібриногену. При гідролізі фібрину
утворюються складні фрагменти,
основними з яких є D-димери
 D-димери - це ділянки молекули
фібрину, пов'язані міцної глутаміл-
лізинової зв'язком, що утворюється в
момент утворення нерозчинного
фібринового полімеру.
 D-DIMER є діагностичним маркером
багатьох патологічних станів системи
гемостазу, що супроводжуються
внутрішньосудинним відкладенням
фібрину: ДВЗ-синдромом
(дисеміноване внутрішньосудинне
згортання крові), тромбозом глибоких
вен нижніх кінцівок, тромбоемболією
легеневої артерії, коронарним
тромбозом та ін.
Тест Д-дімер для виключення ВТЕ
 До 70% пацієнтів з підозрою на ВТЕ не
мають значення D-димеру вище, ніж
зрізане
 Переваги оцінки D-Димера
 зменшення кількості небезпечних і
дорогих досліджень ВТЕ-діагностики
(ангіографія та ін.)
 Скорочення часу на початок лікування
Вікова залежність порогового рівня
D-димеру
 Порогове значення (мкгмл ) =вік х 10
(наприклад для 60 років – 600 мкгмл)
 Облік порогового значення дозволяє:
 1. Підвищити специфічність тесту зі старшою
віковою групою (>50 років) з 15% до 35%
 без зміни чутливості,
 2.Зменшити мету додаткових розслідувань до
35-54 %%
Schounten et al. BMJ 2013
Методи виявлення Д-дімера
 Якісні методи (АФК) для визначення D-
димеру в плазмі і цільній крові
 Напівкількісні методи визначення D-
димеру в плазмі
 Кількісне визначення D-димеру в плазмі
Набіор реагентів для полукількісного
виявлення Д-димеру XL-FDP (Індія) (
метод латекс-аглютинації)
Універсальний маркер
внутрішньосудинного
згортання крові, ДВЗ-
синдрому, венозного та
артеріального тромбозу
Висока специфічність
Висока чутливість
ручний метод
Час реакції – 5хв
Можливості автоматизації
досліджень гемостазу
Прилади для оцінки дії ОАК
 Protime
 Coagucheck
 Hemochron Jr
 Тепер до індивідуальних систем, з яких повинен
вибирати клініцист.
 Система мікрокоагуляції ProTime була першою
системою для виконання PT-тестів, очищених для
домашнього використання FDA США.
 Це також єдина система PT, яка завершила перевірку
статусу відмови через керівні принципи CDC щодо
відмови від 1994 року.
 ProTime 3, кювети з синім маркуванням, є новішою
версією тестового одноразового, очищеного як
еквівалент стандарту
 Виходячи з програмного забезпечення в інструменті,
будь-який кювет можна використовувати в одному
пристрої.
ProTime
•Перша затверджена FDA «домашня» система
 І CoaguChek, і CoaguChek S вмикаються однією
кнопкою. За підказкою екрана смужка вставляється і
попередньо зосереджується.
 При показанні на інструменті на цільову область тест-
смужки наноситься одна крапля цільної капілярної
крові (~ 10 мкл, перша крапля крові).
 Капілярна дія втягує зразок і змішує його з реагентом і
частинками заліза.
 Змінні магнітні поля всередині приладу змушують
частинки заліза рухатися. При утворенні згустків
частинки заліза перестають рухатися і результат
виводиться у вигляді МНО.
 Вимоги до контролю якості залежать від використання,
як описано на наступному слайді.
 Взятя крові в капіляр
 Змішування крові з реагентом та частками
 Зупинка руху частинок
CoaguChek CoaguChek S
Портативний аналізатор МНС
INRatio
 Дослідження з
цільної капілярної
крові
 Електрохімічний
Датчик (сенсор)
 FDA схвалено
Типи коагулометрів
 Механічний
 Оптичний
 Опто-механічний
Особливості дії механічного
коагулометра
 Шариковий принцип
 Проблема «слабкого згустку»
Механічні коагулометри
 ЕМКО (орки)
 Тромбостат (Германія)
 AMELUNG (Германія)
 START-4 (Франція)
 TS-4000 ( Китай)
Опто-механічні коагулометри
 Сoadata 4004,4002,501 (Германія)
 Аско -01 (орки)
 КоаТест 4,2,1 (орки)
 ECL 104, 412 (Чехія)
2-о та 4-о канальні коагулометри CoaData
“Labitec” (Германія)
 Прилади дозволяють визначити:
протромбіновий час (МНО), АЧТЧ,
фактори згортання крові,
антитромбін III, білок С, вовчак-
антикоагулянт, тромбіновий час,
фібриноген.
 Д-димер –додатково !!
 Пристрій має вбудований принтер,
автоматичний запуск.
 Міні-об'єми плазми і реагентів.
 Можна підключитися до комп'ютера.
 Зберігання бази даних на чіпових
картках.
 Продуктивність до 80 PV-визначень
на годину.
Одноканальний портативний коагулометр опто-
механічний
CoaDATA-501 (“Labitec” Германія)
 Одноканальний
 Оптико-механічний
 Мікро-зразки
 Мікровитрата реагентів
 Блок живлення 12 В
 Невелика вага і габарити
 Програмований
 Визначення
 Протромбіновий час
(МНО)
 АЧТЧ (гепарин)
 Фібриноген
Автоматичний аналізатор
гемостазу (MG 1410 Maroche)
 Коагулометричний канал
(ПВ,АЧТВ,Ф,ТВ)
 Контроль якості
 Не потребує промивки та
очистки
 До 120 ПЧ/год
 Адаптовано до усіх типам
реактивів («відкрита
система»)
Ризик фактори
тромбофілічних тромбозів
 Дефіцит антиромбіну
 Дефіцит протеіну С
 Дефіцит протеіну S
 Резистентність до протеіну Са
 Мутація гену протромбіну 20210
 Гіпергомоцистеінемія
 Підвищення рівня FVIII or FXI
Міждународні попередні
лабораторні критерії АФС
1) Антитіла до кардіоліпінових класів IgG або IgM в сироватці крові в
середовищі або високі титри (вище 15 МОд), що визначаються не менше
двох разів протягом 6 тижнів;
2) Вовчаковий антикоагулянт виявляють у плазмі не менше двох разів
протягом 6 тижнів:
 1) подовження фосфоліпідзазалежної згортання крові при використанні
скринінгового тесту (АЧТЧ, тест на отруту гадюки Рассела, )
 2) Відсутність нормалізації часу згортання крові за даними скринінгових
тестів при змішуванні з нормальною плазмою без тромбоцитів
 3) Нормалізація подовженого часу згортання крові при додаванні
надлишків фосфоліпідів
 4) Виключення інших коагулопатій (наявність фактора VIII або інгібіторів
гепарину в крові)
Кофактори антифосфоліпідних
антитіл
 2-глікопротеїн I (аполіпопротеїн Н) - 2-глобулін з
молекулярною масою 50 кДа, присутній в плазмі в
кількості 200 мкг / мл.
 2-глікопротеїн I є інгібітором внутрішнього шляху
коагуляції.
 Виявлення антитіл до кардіоліпіну в сироватці крові
одночасно з антитілами до β2-ГП I підвищує
специфічність діагностики АПС.
Cовременные решения контроля системы гемостаза  в клинико –диагностической лаборатории .ppt

More Related Content

Similar to Cовременные решения контроля системы гемостаза в клинико –диагностической лаборатории .ppt

Клініка без гіперстимуляції. Практичні кроки.
Клініка без гіперстимуляції. Практичні кроки.Клініка без гіперстимуляції. Практичні кроки.
Клініка без гіперстимуляції. Практичні кроки.Yuzko Olexandr
 
Сучасні підходи до лабораторної діагностики туберкульозу
Сучасні підходи до лабораторної діагностики туберкульозуСучасні підходи до лабораторної діагностики туберкульозу
Сучасні підходи до лабораторної діагностики туберкульозуAkhmetovFDU
 
лекція 1
лекція 1лекція 1
лекція 1agusya
 
Перші результати застосування коріфоллітропіну в протоколах КОС (Досвід ІРМ)
Перші результати застосування коріфоллітропіну в протоколах КОС (Досвід ІРМ)Перші результати застосування коріфоллітропіну в протоколах КОС (Досвід ІРМ)
Перші результати застосування коріфоллітропіну в протоколах КОС (Досвід ІРМ)Yuzko Olexandr
 
Лекція 5. Трансплантація. імунологія пухлин і репродукції
Лекція 5. Трансплантація. імунологія пухлин і репродукціїЛекція 5. Трансплантація. імунологія пухлин і репродукції
Лекція 5. Трансплантація. імунологія пухлин і репродукціїYuriy Korsak
 
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегменту
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегментуНаш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегменту
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегментуИгорь Шадеркин
 
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегменту
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегментуНаш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегменту
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегментуИгорь Шадеркин
 
наказ 554 моз україни про затвердження протоколів надання медичної допомоги з...
наказ 554 моз україни про затвердження протоколів надання медичної допомоги з...наказ 554 моз україни про затвердження протоколів надання медичної допомоги з...
наказ 554 моз україни про затвердження протоколів надання медичної допомоги з...oncoportal.net
 
Лекція Захворювання сечової системи.pptx
Лекція  Захворювання сечової системи.pptxЛекція  Захворювання сечової системи.pptx
Лекція Захворювання сечової системи.pptxTetianaitova
 
Nakaz №554 moz_ukraine_dodatok
Nakaz №554 moz_ukraine_dodatokNakaz №554 moz_ukraine_dodatok
Nakaz №554 moz_ukraine_dodatokVista MediClub
 
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиці
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиціПорівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиці
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиціDmytro Mykytenko
 
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиці
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиціПорівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиці
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиціDmytro Mykytenko
 
Донцова_Синево
Донцова_СиневоДонцова_Синево
Донцова_СиневоMedprosvita
 
Лекція 7. Захворювання ендокринної системи у дітей
Лекція 7. Захворювання ендокринної системи у дітейЛекція 7. Захворювання ендокринної системи у дітей
Лекція 7. Захворювання ендокринної системи у дітейfktirf27
 
непліддя
непліддянепліддя
непліддяagusya
 

Similar to Cовременные решения контроля системы гемостаза в клинико –диагностической лаборатории .ppt (20)

Blood
BloodBlood
Blood
 
Клініка без гіперстимуляції. Практичні кроки.
Клініка без гіперстимуляції. Практичні кроки.Клініка без гіперстимуляції. Практичні кроки.
Клініка без гіперстимуляції. Практичні кроки.
 
Сучасні підходи до лабораторної діагностики туберкульозу
Сучасні підходи до лабораторної діагностики туберкульозуСучасні підходи до лабораторної діагностики туберкульозу
Сучасні підходи до лабораторної діагностики туберкульозу
 
лекція 1
лекція 1лекція 1
лекція 1
 
Перші результати застосування коріфоллітропіну в протоколах КОС (Досвід ІРМ)
Перші результати застосування коріфоллітропіну в протоколах КОС (Досвід ІРМ)Перші результати застосування коріфоллітропіну в протоколах КОС (Досвід ІРМ)
Перші результати застосування коріфоллітропіну в протоколах КОС (Досвід ІРМ)
 
Лекція 5. Трансплантація. імунологія пухлин і репродукції
Лекція 5. Трансплантація. імунологія пухлин і репродукціїЛекція 5. Трансплантація. імунологія пухлин і репродукції
Лекція 5. Трансплантація. імунологія пухлин і репродукції
 
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегменту
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегментуНаш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегменту
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегменту
 
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегменту
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегментуНаш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегменту
Наш досвід лікування стриктур пієлоуретерального сегменту
 
наказ 554 моз україни про затвердження протоколів надання медичної допомоги з...
наказ 554 моз україни про затвердження протоколів надання медичної допомоги з...наказ 554 моз україни про затвердження протоколів надання медичної допомоги з...
наказ 554 моз україни про затвердження протоколів надання медичної допомоги з...
 
Лекція Захворювання сечової системи.pptx
Лекція  Захворювання сечової системи.pptxЛекція  Захворювання сечової системи.pptx
Лекція Захворювання сечової системи.pptx
 
Nakaz №554 moz_ukraine_dodatok
Nakaz №554 moz_ukraine_dodatokNakaz №554 moz_ukraine_dodatok
Nakaz №554 moz_ukraine_dodatok
 
Primary care center
Primary care centerPrimary care center
Primary care center
 
Melanoma kdd 2019
Melanoma kdd 2019Melanoma kdd 2019
Melanoma kdd 2019
 
yaremche_0101
yaremche_0101yaremche_0101
yaremche_0101
 
Nakaz №782
Nakaz №782Nakaz №782
Nakaz №782
 
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиці
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиціПорівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиці
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиці
 
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиці
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиціПорівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиці
Порівняльна геномна гібридизація в пренатальній діагностиці
 
Донцова_Синево
Донцова_СиневоДонцова_Синево
Донцова_Синево
 
Лекція 7. Захворювання ендокринної системи у дітей
Лекція 7. Захворювання ендокринної системи у дітейЛекція 7. Захворювання ендокринної системи у дітей
Лекція 7. Захворювання ендокринної системи у дітей
 
непліддя
непліддянепліддя
непліддя
 

Cовременные решения контроля системы гемостаза в клинико –диагностической лаборатории .ppt

  • 1. Сучасні рішення для моніторингу системи гемостазу в клініко-діагностичній лабораторії Остапенко Андрій Олексійович
  • 2. Основні задачі лабораторного дослідження  Скринінг гемостазу  Діагностика ДВЗ-синдрому  Діагностика тромбофілії  Контроль протитромботичної терапії
  • 3. Вибір підходу  Зрозумійте, навіщо це потрібно робити  Знайте, що робити  Зрозумійте, що робити з результатами
  • 5. Позалабораторна/лабораторна експрес-діагностика гемостазу “point of care”  Інтегральна інструментальна  Спеціалізоване  інструментальне використання «швидких» тестів
  • 6. Інтегральна приборна оцінка гемостазу  Класична тромбоеластографія  Ротаційна тромбоеластографія  Пьєзоеластографія
  • 7. Схема класичної тромбоеластографії за принципом Хартерта (1949) Зразок поміщають в обертову канаву, через внутрішній штифт, підвішений на торсіонному елементі, процес коагуляції зразка відбивається на екрані приладу.
  • 9. Одноканальний тромбоеластограф Моно ТЕМ-А  Автоматичний MonoTEM-A має просте управління, автоматичне переміщення зразка в вимірювальну зону, автоматичне калібрування і вирівнювання  Можливе об'єднання до 4 пристроїв з одним блоком управління (комп'ютером) в комплекті.
  • 10. Схема принципу ротаційної тромбоеластометрії Зразок поміщають в нерухому канаву, коли змінюється рух внутрішнього штифта, підвішеного на торсіонному елементі, процес коагуляції зразка відбивається на екрані приладу.
  • 12. R -Время свертывания K-Время тромбинообразования MA-Максимальная амплитуда Максимальный лизис Скорость лизиса Скорость свертывания Основні показники ТЕГ
  • 13. Показники ТЕГ та гемостаз  R – критерій активності плазмових факторів гемокоагуляції  К , угол альфа – критерій швидкості сзідання визначається фібриногеном і тромбоцитами  MA - показник механічної міцності згустку, що визначається кількістю і якістю тромбоцитів, кількістю і якістю фібриногену
  • 14. Зразки тромбоеластограми для різних клінічних станів
  • 17. Основні блоки дослідження стану системи гемостазу  Судинно-тромбоцитарний  Гемокоагуляція  Фізіологічні антикоагулянти  Фібрінолітична система  Вплив фармпрепаратів
  • 18. Основні механизми реакції первинного гемостазу  Первинний гемостаз  спазм судин  активація тромбоцитів
  • 19. Мікроциркуляторний гемостаз (первинний гемостаз)  Пошкодження ендотелію  Вивільнення АДФ, вплив колагену  Адгезія тромбоцитів  Оборотна агрегація тромбоцитів  Незворотна агрегація тромбоцитів  Утворення мікротромбів
  • 20. Основні методи оцінки мікроциркуляторного (судинно-тромбоцитарного) блоку гемостазу  час кровотечі  Кількість тромбоцитів  Середній розмір  Агрегація тромбоцитів
  • 22. Вимірення кількості тромбоцитів (тромбоцитопенія) – 1.Хвороби кісткового мозку – 2.Посилене руйнування – медикаменти,алкоголь – аутоімунні захворювання, – Двійкові числа – 3.Гіперспленізм
  • 23. Тромбоцитоз  1. Реакційний  Інфекція  Післяопераційний  Постспленоектомічний  Онкології  Гостра крововтрата,  2.Мієлопроліферативні захворювання
  • 24. Методы вимірення кількості та розмірів тромбоцитів  Фазово-контрастна мікроскопія (референтний метод)  Метод Фоніо  Гемоаналізатори
  • 25. Чи потрібно досліджувати агрегацію тробоцитів? Потрібно  Для діагностики тромбоцитопатій (обов’язково) Не доведено  Для виявлення активації внутрішньосудинного ссідання ( наприклад при вагітності)  Для моніторингу антиагрегантної терапії
  • 26. Принцип вимірення агрегації тромбоцитів за Born  Кювета зі зразком.  Мішалка (на дні канави)  Датчик джерела світла (лампи) →  Під вимірювальним каналом знаходиться магнітна мішалка, мотор якої автоматично запускається в момент початку вимірювання.  Результат аналізу автоматично передається на дисплей.
  • 27. Тромбоцитарний агрегометр AТ-02  Вимірювання 1 каналу  Можливість роботи з пробою до 30 000 тр / см. куб.  Автоматичний розрахунок агрегації та кофактора ристоміцину-віллібранда  Виключно простий і зручний інтерфейс програми  Збереження результатів  Можливість роботи в мережі  Найнижча ціна пристрою і витратних матеріалів.  ООО ТПО МедиоЛаб
  • 28. Методичні особливості дослідження агрегації тромбоцитів за Born  Показники агрегації  агрегації швидкість  %агрегації , % дезагрегації  Стандартна концентрація тромбоцитів  Стандартний індуктор  Нормальні значення
  • 29. Вторинний гемостаз  Реакції гемокоагуляції  Реакції антикоагулянтної системи
  • 30. Внешний Внутренний путь активации путь активации ТФ Контактная активация фактор VII ПК ВМКГ ХП XI IX ФЛ Са++ Фактор X Фактор V Протромбин ТРОМБИН Фибриноген --- РКФМ ------Фибрин Схема гемокоагуляції
  • 31. Скринінг гемокоагуляції  ПЧ  АЧТЧ  РКФМ (орто-фенолтралиновий метод)  Фібриноген ( метод Клаусса)  Тромбіновий час ?????
  • 32. Протромбиновий час (ПЧ)  Тест активності гемокоагуляції по «зовнішньому» шляху. Контроль пероральної антикоагулянтної терапії за допомогою AВC  Він найбільш чутливий до VII фактору.  Подовження: від 55 % ↓ нормальна активність F VII  Критерій антитромботичної активності: зниження f II і f X (через кілька днів)
  • 33. Методичні особливості виконання тесту Протромбіновий час  Якість тромбопластинів Стабільність Показник МІЧ  показники розрахунку протромбіновий індекс % Швидко МНО
  • 34. ПЧ – ПОДАННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ 1) 1989,1, Лабораторная медицина, А.Б.Косырев, А.Б. Добровольский два варианта: % по Квику и МНО 2) 2005, «Лабораторная диагностика нарушений гемостаза» В.В.Долгов, П.В.Свирин рекомендация: % по Квику и МНО 3) 2007, Рекомендации В-ой Ассоциации по изучению тромбозов, геморрагий и патологии сосудов им. А.В. Шмидта - Б.А. Кудряшова и -ской Ассоциации медицинской лабораторной диагностики по лабораторным методам исследования системы гемостаза «Представление результатов в виде протромбинового времени больного с указанием значений для нормальной плазмы, или протромбинового индекса, не позволяет количественно оценить величину отклонения показателя от нормы. Эти показатели использовать не рекомендуется.»
  • 35. ПТІ чи % Квік ?  ПТІ =(ПЧ нор. плазми/ПЧ пацієнта) х 100  % Квік –більш якісна оцінка вмісту факторів ПК
  • 36. Чи можливо визначати ПЧ/МНС в капілярній крові ?  Метод Owren
  • 37. Активований частково тромбопластиновий час (АЧТЧ)  Тест активності «внутрішнього» шляху гемокоагуляції  Залежить від активності всіх факторів, крім VII і XIII  Нормальний рівень: 25-35 сек  Моніторинг гепаринової терапії та скринінг гемофілії
  • 38. Активований частково тромбопластиновий час (АЧТЧ)  Пролонгація: наявність гепарину, інгібіторів тромбіну, PDF, наявність вовчакового антикоагулянту  Подовження при зниженні факторів «внутрішнього» шляху < 30% від норми
  • 39. Тест Активований частково тромбопластиновий час (АЧТЧ)  Чутливість до факторів  Чутливість до гепаріну  Оптична прозорість
  • 40. АЧТЧ -результати  АЧТЧ сек  АЧТЧ « відношення» = АЧТЧ пацієнта/АЧТЧ норма
  • 41. Методи оцінки розчинного фібрину (РКФМ)  Неспецифічні тести:  Протамін-сульфатний (якісний)  Етаноловий (якісний)  Орто-фенантроліновий (якісний)  Імунологічний ( FM-test) (напівякісний)  ІФА (кількісний)  Імунотурбідіметричний LiaTest FM (Stago) (кількісний)
  • 42. Методи дослідження фібриногену в плазмі  Ваговий метод ( метод Рутберг)  Коагулометричний ( метод Клаусса)
  • 43. Коагулометричний метод дослідження фібриногену (метод Клаусса)  Мінімальна кількість плазми  Швидкість дослідження  Точність  Автоматизація
  • 44. Тромбіновий час  Критерій активності гемокоагуляції ??  Як оценювати результат  «короткий тромбіновий час» 11-13 сек ( 6 NIH/мл)  «довгий тромбіновий час». 18-21 сек (3 NIH/мл)
  • 45. Основні шляхи регуляції фібринолітичної активності ТАП ПЛАЗМІНОГЕН Урокіназа ІТАП 1 ІТАП 2 ПЛАЗМІН АНТИПЛАЗМІН Фібриногенфібрин Продукти деградації ПДФ/ф Д-дімер
  • 46. Методи дослідження фібринолітичної активності  Лізис еуглобулінового згустку  Виявлення активності  тканинний активатор плазміногену (TAP)  Інгібітор ТАП  швидкодіючий антиплазмін  продукти розпаду фібриногену/фібрину  (PDF, D-дімер)
  • 47. Основні фази розвитку ДВЗ-синдрому  1 фаза - гіперкоагуляція  2 фаза - гіпокоагуляція в поєднанні з кровотечею на тлі дефіциту факторів згортання і активацією коагуляції  Фібриноліз  Фаза 3 - закінчення розвитку синдрому
  • 48. Діагностика ДВЗ-синдрому  Кількість, розмір, агрегація тромбоцитів  АЧТЧ  ПЧ  РКФМ  Фібриноген  Антитромбін  Протеін С  Оцінка фібринолітичної активності  Проби переносу
  • 49. Контроль протитромботичної терапії  Контроль антитромбоцитарної терапії  Контроль антикоагулянтної терапії  гепарини  пероральні антикоагулянти  АВК (варфарин)  інгібітори тромбіну  інгібітори фактора Ха  Контроль фібринолітичної терапії
  • 50. Контроль антиагрегантної терапії  Види препаратів  Інгібітор тромбоцитів ЦОГ-1: ацетилсаліцилова кислота (аспірин, кардіоаза, тромбоаза, кардіомагніл)  інгібітори тромбоцитарних АДФ-рецепторів: похідні тіенопіридину (тіклід, плавікс (Клопідогрель), Прасугрель, Тікагрелор (Брілінта)  Інгібітори рецепторів тромбоцитів IIb-IIIa: (Абсиксимаб Реопро, Фрамона)
  • 51. Механізм дії АСК та НПВ Арахідонова кислота АСК Циклооксігеназа -1 тромбоцитів простагландін G2 НПВ Пероксідаза Циклооксігеназа-2 Простагландін H2 Простациклін сінтетаза Тромбоксан сінтетаза Простациклін Тромбоксан A2 PG F1a thromboxane B2 в сечі
  • 52. Метаболізм клопідогрела(Плавікс) Tabassome Simon, M.D. с соавт., 2009 , JACC Cardiovasc Interv. 2009 Nov;2(11):1095-101 Клопідогрел Внутрикишечное всасывание (АВСВ1) Эстеразы Неактивні метаболіти (около 85%) Внутрипеченочный метаболизм CYP2C19, 2C9, 3A4, 2B6, 1A2 Активні метаболіти (15%) P2RY12 рецептор АДФ ГП IIb/IIIa рецептор ITGB3 Тромбоцит КЛОПІДОГРЕЛЬ - це проліки. Біотрансформація відбувається в печінці. Активний метаболіт – похідне тіолу – утворюється при окисленні КЛОПІДОГРЕЛЮ до оксоклопідогрелю з подальшим гідролізом. Таке окислення відбувається за участю цитохрому Р450. Активний метаболіт, який може бути виділений in vitro, швидко і необоротно зв'язується з тромбоцитарними рецепторами і пригнічує їх агрегацію. Крім того, велика частина клопідогрелю розщеплюється естеразами на неактивному шляху. Неактивний метаболіт є похідним карбонової кислоти, становить близько 85% циркулюючого з'єднання плазми.
  • 53. Ролі в активності клопідогрельних білків з відомим генетичним Поліморфізмом.  Кишкова абсорбція клопідогрелю проліку обмежена кишковим насосом для випоту P-глікопротеїну, закодований геном ABCB1.  Більшість з них пролікування метаболізується в неактивні метаболіти повсюдними ефіразами.  Меншість біоактивується різними ізоформами цитохрому P450 (CYP) в активні метаболіти.  Ці метаболіти необоротно антагонізують аденозин дифосфатний (АДФ) рецептор (закодований геном P2RY12), який в свою чергу інактивує рецептор фібриногену (рецептор глікопротеїну [GP] IIb/IIIa закодований геном ITGB3), що бере участь в агрегації тромбоцитів.
  • 54. Методи дослідження дії препаратів 1.Класична оптична агрегометрія (метод Born) 2. Вимірювання метаболітів тромбоцитів (тромбоксанУ В2 в сечі) 3. PFA 100 /Innovance 4. Агрегометрія цільної крові (метод імпедансу) Multiplate 5.Veryfy Now
  • 55. Прилад для дослідження функції тромбоцитів “point of care” PFA-100 Прилад та картридж Схема вимірення
  • 60. Тест – набор: Aspirin Assay P2Y12 Assay IIb/IIIa Assay Дезагрегант: Ацетилсалицил овая кислота (Аспирин) Тиенопиридины (Тиклопидин, Клопидогрель, Прасугрель) Блокаторы ГП IIb/IIIa рецепторов тромбоцитов (Рео-Про, Монафрам и т.п.) Агонист агрегации: Арахидоновая кислота Комплекс АДФ/ПАТР (TRAP) (пептид- активатор тромбиновых рецепторов тромбоцитов) ПАТР (TRAP) (пептид- активатор тромбиновых рецепторов тромбоцитов) Вакуумные пробирки для забора крови: 2 мл, с р-ром цитрата натрия 3.2% (синяя крышка) 2 мл, с гепарином (зеленая крышка) или 2 мл, с р-ром цитрата натрия 3.2% (синяя крышка) Продолжительность исследования: 5 минут 3 минуты 2 минуты Условия хранения и транспортировки 2°С - 25°С 2°С - 25°С 2°С - 8°С 18°С - 25°С – не более 8 нед. Размеры аппарата (Ш×Г×В): 24.1 см × 23.6 см × 16.5 см VerifyNow: технична інформація
  • 61. Генетичні ризик фактори неефективності АГ терапії  Поліморфізм цитохрома P 450  Гений поліморфізм варіанту CYP2C19
  • 62. Контроль терапії оральними антагоністами вітамину К  Механізм дії ОАК  Методи контролю МНС Протеін С
  • 64. 64 Hirsh, J. et al. (2001); Deitcher, S.R. (2005) Точки застосування дій ОАВК Фибриноген Фибрин * Измененные факторы Антагоністи вітаміну К активні проти декількох факторів, що беруть участь в каскаді коагуляції. Deitcher, S.R. (2005)
  • 65. Основні методичні особливості дослідження МНС  Апаратна залежність  Середній час нормальної плазми  Точність дослідження МІЧ  Локальна калібровка
  • 66. Середній час нормальної плазми  Середній час нормальної плазми визначається як середній геометричний протромбіновий час свіжої цитратної плазми 20 донорів
  • 67. Локальна калібровка  Дозволяє підвищити точність індрординації (дослідження) без використання МІЧ  Дозволяє уникнути апаратної помилки
  • 70. 70 Wittkowsky, A.K. (2005) Половина тривалості життя вітаміну К залежних факторів згортання крові Вітамін К –необ- хідий для сінтезу факторів сзідання крові
  • 71. Результати дослідження МНС в контрольних образчиках, цикл 1-10 разділ «Коагулологія» Реагенти n Середня норма CV% Середнє патол CV% Техпластін-тест (К) 102 0,94 14,5 1,51 22,8 Ренампластін 296 1,00 9,9 1,49 14,7 Техпластін-тест (R) 403 0,94 14,4 1,62 18,5 Thromborel S 139 0,94 7,5 1,54 11,2 RecombiPlasTin/2G 40 0,98 5,1 1,49 10,9 Neoplastin Plus 85 1,02 6,2 1,73 10,1 Допустимий діапазон: сред ± 22% США, Великобританія: сред ± 15%
  • 72. ДОЛЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ОЦЕНКИ ОТНОСИТЕЛЬНОГО СМЕЩЕНИЯ, УДОВЛЕТВОРЯЮЩИХ КРИТЕРИЯМ КАЧЕСТВА, ДЛЯ РАЗЛИЧНЫХ НАБОРОВ РЕАГЕНТОВ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ МНО 89,2 96,3 92,9 91,9 88,9 94,3 95,7 98,9 97,2 100,0 97,8 68,8 90,0 81,3 82,8 86,2 89,7 78,3 92,4 95,4 94,4 100,0 63,5 72,4 74,4 77,4 77,8 82,3 85,0 86,2 93,8 100,0 100,0 50 60 70 80 90 100 Технология-Стандарт, Техпластин-тест (К) Human, HemoStat Thromboplastin-SI Технология-Стандарт, Техпластин-тест (R) Ренам, Тромбопластин Ренам, Тромбопластин с кальцием Ренам, Ренампластин Tcoag, TriniCLOT PT Excel S Stago/Roche, Neoplastin Plus Siemens, Thromborel S ILab., HemosIL PT-Fibrinogen HS Plus ILab., HemosIL RecombiPlasTin 2G Доля удовлетворительных результатов, % 1,06 (цикл 2-11) 1,86 (цикл 1-11) 2,68 (цикл 3-11)
  • 73. Якість вконання тестів ПЧМНС в лабораторній практиці  Якість реагенту (вибір реагенту)  Рівень досліджень що проводяться (професійна підготовка персоналу, своєчасне технічне обслуговування, організація лабораторних робіт…)  Преаналітичний етап (стандартизація, одноразові системи … Концентрація цитрату – 0,105 - 0.109 моль/л для контролу терапиії ОА)
  • 74.
  • 75. Корисність лабораторних досліджень при терапії НОАК  Підбір дози леків – НІ (НОАК ефективні та безпечні при стандартних дозах у пацієнтів без ниркової недостатності Вимірення концентрації в крові – ТАК (для вимірення рівня в крові в залежності від клінічної ситуації)
  • 76.  Необхідність лабораторного тестування терапії НОАК :  -до початку лікування  -при можливості проведениня інвазивногохірургічного втручання  Перед початком тромболітичної терапії ( при ішемічному інсульті)  Можливе тестування  через 1-2 тижні від початку терапії, коли досягається стабільна гіпокоагуляція
  • 77. Dabigatran Rivaroxaban Загальні тести Екаріновий час (Ecarin time) Модифікований тромбіновий час (Hemoclot) • ПЧ (відношення пацієнтнорма) Специфічні тести • анти-IIa активність ( хромогений метод) • Анти Xa активність • (хромогений метод)
  • 78. Лабораторний контроль застосування гепарину  при екстракорпоральному кровообігу (ЕК) (2-4ед.мл крові)  гепарінотерапії НФГ  гепарінотерапія ФГ
  • 79. Контроль застосування гепаріну при ЕК  АЧСК (ACT)  ручний ( метод Hattersley)  автоматизований (Hemochron, Response, JR)
  • 80. метод Hattersley  12 мг діатомної землі + 2 мл крові  110-120 сек норма  400 сек - початок ЕК  600 сек-під час ЕК
  • 81. Ваше рішеннч при виміренні гепаріну в крові -Actalyke  Портативен  Простота в зверненні  Наявність принтера  Підвищена точність  Широкий діапазон вимірюваного рівня гепарину в крові
  • 82. HEMOCHRON Jr Signature / Signature+ ( ITC)  Можливі дослідження – Цільна кров (капілярна, венозна) – Цитратна кров
  • 83. HEMOCHRON  У системах HEMOCHRON Jr Signature і Signature+ використовуються однакові одноразові засоби.  Доступні два тести PT, один для використання зі свіжою цільною кров'ю, інший для використання з цитрованою цільною кров'ю.  Свіжий кювет крові можна використовувати як з капілярними, так і з венозними зразками.  Існує два рівні EQC, що забезпечуються обома системами та уніфікованим КК цільної крові для кожного типу тесту.  Системи відрізняються своїми можливостями блокування та відповідності, оскільки Signature+ включає набагато більше функцій для забезпечення відповідності.
  • 84. Контроль гепарінотерапії НФГ  АЧСК (АСТ)  АЧТЧ (збільшення в 2-2,5 рази)  АТ-III  Кількість тромбоцитів  Виявлення концентрації в крові (фактор Х-а активність)
  • 85. Контроль гепарінотерапії ФГ  Виявлення концентрації в крові (фактор X-a активність)  АТ-III  Кількість тромбоцитів
  • 87. Методи діагностики ГІТ  Експрес імунохроматографічний метод наявності Ig G антитіл (Stago)  Експрес метод гель-дифузії  Метод агрегації відмитих тромбоцитів використанням плазми пацієнта (HIPA)  ІФ метод виявлення різних класів антитіл (IgG,IgM,IgA) ( Instrumentation Lab)
  • 88. Виявлення антитіл до тромбоцитів
  • 90. Д-дімер – продукт розщіплення фібрину  Під впливом плазміну відбувається розщеплення як фібрину, так і фібриногену. При гідролізі фібрину утворюються складні фрагменти, основними з яких є D-димери  D-димери - це ділянки молекули фібрину, пов'язані міцної глутаміл- лізинової зв'язком, що утворюється в момент утворення нерозчинного фібринового полімеру.  D-DIMER є діагностичним маркером багатьох патологічних станів системи гемостазу, що супроводжуються внутрішньосудинним відкладенням фібрину: ДВЗ-синдромом (дисеміноване внутрішньосудинне згортання крові), тромбозом глибоких вен нижніх кінцівок, тромбоемболією легеневої артерії, коронарним тромбозом та ін.
  • 91. Тест Д-дімер для виключення ВТЕ  До 70% пацієнтів з підозрою на ВТЕ не мають значення D-димеру вище, ніж зрізане  Переваги оцінки D-Димера  зменшення кількості небезпечних і дорогих досліджень ВТЕ-діагностики (ангіографія та ін.)  Скорочення часу на початок лікування
  • 92. Вікова залежність порогового рівня D-димеру  Порогове значення (мкгмл ) =вік х 10 (наприклад для 60 років – 600 мкгмл)  Облік порогового значення дозволяє:  1. Підвищити специфічність тесту зі старшою віковою групою (>50 років) з 15% до 35%  без зміни чутливості,  2.Зменшити мету додаткових розслідувань до 35-54 %% Schounten et al. BMJ 2013
  • 93. Методи виявлення Д-дімера  Якісні методи (АФК) для визначення D- димеру в плазмі і цільній крові  Напівкількісні методи визначення D- димеру в плазмі  Кількісне визначення D-димеру в плазмі
  • 94. Набіор реагентів для полукількісного виявлення Д-димеру XL-FDP (Індія) ( метод латекс-аглютинації) Універсальний маркер внутрішньосудинного згортання крові, ДВЗ- синдрому, венозного та артеріального тромбозу Висока специфічність Висока чутливість ручний метод Час реакції – 5хв
  • 96. Прилади для оцінки дії ОАК  Protime  Coagucheck  Hemochron Jr
  • 97.  Тепер до індивідуальних систем, з яких повинен вибирати клініцист.  Система мікрокоагуляції ProTime була першою системою для виконання PT-тестів, очищених для домашнього використання FDA США.  Це також єдина система PT, яка завершила перевірку статусу відмови через керівні принципи CDC щодо відмови від 1994 року.  ProTime 3, кювети з синім маркуванням, є новішою версією тестового одноразового, очищеного як еквівалент стандарту  Виходячи з програмного забезпечення в інструменті, будь-який кювет можна використовувати в одному пристрої.
  • 98. ProTime •Перша затверджена FDA «домашня» система
  • 99.  І CoaguChek, і CoaguChek S вмикаються однією кнопкою. За підказкою екрана смужка вставляється і попередньо зосереджується.  При показанні на інструменті на цільову область тест- смужки наноситься одна крапля цільної капілярної крові (~ 10 мкл, перша крапля крові).  Капілярна дія втягує зразок і змішує його з реагентом і частинками заліза.  Змінні магнітні поля всередині приладу змушують частинки заліза рухатися. При утворенні згустків частинки заліза перестають рухатися і результат виводиться у вигляді МНО.  Вимоги до контролю якості залежать від використання, як описано на наступному слайді.
  • 100.  Взятя крові в капіляр  Змішування крові з реагентом та частками  Зупинка руху частинок CoaguChek CoaguChek S
  • 101. Портативний аналізатор МНС INRatio  Дослідження з цільної капілярної крові  Електрохімічний Датчик (сенсор)  FDA схвалено
  • 102. Типи коагулометрів  Механічний  Оптичний  Опто-механічний
  • 103. Особливості дії механічного коагулометра  Шариковий принцип  Проблема «слабкого згустку»
  • 104. Механічні коагулометри  ЕМКО (орки)  Тромбостат (Германія)  AMELUNG (Германія)  START-4 (Франція)  TS-4000 ( Китай)
  • 105. Опто-механічні коагулометри  Сoadata 4004,4002,501 (Германія)  Аско -01 (орки)  КоаТест 4,2,1 (орки)  ECL 104, 412 (Чехія)
  • 106. 2-о та 4-о канальні коагулометри CoaData “Labitec” (Германія)  Прилади дозволяють визначити: протромбіновий час (МНО), АЧТЧ, фактори згортання крові, антитромбін III, білок С, вовчак- антикоагулянт, тромбіновий час, фібриноген.  Д-димер –додатково !!  Пристрій має вбудований принтер, автоматичний запуск.  Міні-об'єми плазми і реагентів.  Можна підключитися до комп'ютера.  Зберігання бази даних на чіпових картках.  Продуктивність до 80 PV-визначень на годину.
  • 107. Одноканальний портативний коагулометр опто- механічний CoaDATA-501 (“Labitec” Германія)  Одноканальний  Оптико-механічний  Мікро-зразки  Мікровитрата реагентів  Блок живлення 12 В  Невелика вага і габарити  Програмований  Визначення  Протромбіновий час (МНО)  АЧТЧ (гепарин)  Фібриноген
  • 108. Автоматичний аналізатор гемостазу (MG 1410 Maroche)  Коагулометричний канал (ПВ,АЧТВ,Ф,ТВ)  Контроль якості  Не потребує промивки та очистки  До 120 ПЧ/год  Адаптовано до усіх типам реактивів («відкрита система»)
  • 109. Ризик фактори тромбофілічних тромбозів  Дефіцит антиромбіну  Дефіцит протеіну С  Дефіцит протеіну S  Резистентність до протеіну Са  Мутація гену протромбіну 20210  Гіпергомоцистеінемія  Підвищення рівня FVIII or FXI
  • 110. Міждународні попередні лабораторні критерії АФС 1) Антитіла до кардіоліпінових класів IgG або IgM в сироватці крові в середовищі або високі титри (вище 15 МОд), що визначаються не менше двох разів протягом 6 тижнів; 2) Вовчаковий антикоагулянт виявляють у плазмі не менше двох разів протягом 6 тижнів:  1) подовження фосфоліпідзазалежної згортання крові при використанні скринінгового тесту (АЧТЧ, тест на отруту гадюки Рассела, )  2) Відсутність нормалізації часу згортання крові за даними скринінгових тестів при змішуванні з нормальною плазмою без тромбоцитів  3) Нормалізація подовженого часу згортання крові при додаванні надлишків фосфоліпідів  4) Виключення інших коагулопатій (наявність фактора VIII або інгібіторів гепарину в крові)
  • 111. Кофактори антифосфоліпідних антитіл  2-глікопротеїн I (аполіпопротеїн Н) - 2-глобулін з молекулярною масою 50 кДа, присутній в плазмі в кількості 200 мкг / мл.  2-глікопротеїн I є інгібітором внутрішнього шляху коагуляції.  Виявлення антитіл до кардіоліпіну в сироватці крові одночасно з антитілами до β2-ГП I підвищує специфічність діагностики АПС.