7. Схема класичної тромбоеластографії за принципом Хартерта (1949)
Зразок поміщають в обертову канаву, через внутрішній штифт, підвішений
на торсіонному елементі, процес коагуляції зразка відбивається на екрані
приладу.
9. Одноканальний
тромбоеластограф
Моно ТЕМ-А
Автоматичний MonoTEM-A
має просте управління,
автоматичне переміщення
зразка в вимірювальну зону,
автоматичне калібрування і
вирівнювання
Можливе об'єднання до 4
пристроїв з одним блоком
управління (комп'ютером) в
комплекті.
10. Схема принципу ротаційної
тромбоеластометрії
Зразок поміщають в нерухому канаву, коли змінюється рух внутрішнього
штифта, підвішеного на торсіонному елементі, процес коагуляції зразка
відбивається на екрані приладу.
12. R -Время свертывания
K-Время тромбинообразования
MA-Максимальная
амплитуда
Максимальный
лизис
Скорость лизиса
Скорость свертывания
Основні показники ТЕГ
13. Показники ТЕГ та гемостаз
R – критерій активності плазмових факторів
гемокоагуляції
К , угол альфа – критерій швидкості сзідання
визначається фібриногеном і тромбоцитами
MA - показник механічної міцності згустку, що
визначається кількістю і якістю тромбоцитів,
кількістю і якістю фібриногену
17. Основні блоки дослідження
стану системи гемостазу
Судинно-тромбоцитарний
Гемокоагуляція
Фізіологічні антикоагулянти
Фібрінолітична система
Вплив фармпрепаратів
24. Методы вимірення кількості та
розмірів тромбоцитів
Фазово-контрастна мікроскопія
(референтний метод)
Метод Фоніо
Гемоаналізатори
25. Чи потрібно досліджувати
агрегацію тробоцитів?
Потрібно
Для діагностики
тромбоцитопатій
(обов’язково)
Не доведено
Для виявлення активації
внутрішньосудинного
ссідання ( наприклад при
вагітності)
Для моніторингу
антиагрегантної терапії
26. Принцип вимірення агрегації
тромбоцитів за Born
Кювета зі зразком.
Мішалка (на дні канави)
Датчик джерела світла
(лампи) →
Під вимірювальним
каналом знаходиться
магнітна мішалка, мотор
якої автоматично
запускається в момент
початку вимірювання.
Результат аналізу
автоматично
передається на дисплей.
27. Тромбоцитарний агрегометр
AТ-02
Вимірювання 1 каналу
Можливість роботи з пробою до 30 000
тр / см. куб.
Автоматичний розрахунок агрегації та
кофактора ристоміцину-віллібранда
Виключно простий і зручний інтерфейс
програми
Збереження результатів
Можливість роботи в мережі
Найнижча ціна пристрою і витратних
матеріалів.
ООО ТПО МедиоЛаб
28. Методичні особливості дослідження
агрегації тромбоцитів за Born
Показники агрегації
агрегації швидкість
%агрегації , % дезагрегації
Стандартна концентрація
тромбоцитів
Стандартний індуктор
Нормальні значення
30. Внешний Внутренний
путь активации путь активации
ТФ Контактная активация
фактор VII ПК ВМКГ ХП XI IX
ФЛ Са++
Фактор X Фактор V
Протромбин
ТРОМБИН
Фибриноген --- РКФМ ------Фибрин
Схема гемокоагуляції
31. Скринінг гемокоагуляції
ПЧ
АЧТЧ
РКФМ (орто-фенолтралиновий метод)
Фібриноген ( метод Клаусса)
Тромбіновий час ?????
32. Протромбиновий час (ПЧ)
Тест активності гемокоагуляції по «зовнішньому»
шляху. Контроль пероральної антикоагулянтної терапії
за допомогою AВC
Він найбільш чутливий до VII фактору.
Подовження: від 55 % ↓ нормальна активність F VII
Критерій антитромботичної активності: зниження f II і f
X (через кілька днів)
33. Методичні особливості виконання
тесту Протромбіновий час
Якість тромбопластинів
Стабільність
Показник МІЧ
показники розрахунку
протромбіновий індекс
% Швидко
МНО
34. ПЧ – ПОДАННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ
1) 1989,1, Лабораторная медицина, А.Б.Косырев, А.Б. Добровольский
два варианта: % по Квику и МНО
2) 2005, «Лабораторная диагностика нарушений гемостаза»
В.В.Долгов, П.В.Свирин
рекомендация: % по Квику и МНО
3) 2007, Рекомендации В-ой Ассоциации по изучению тромбозов, геморрагий и
патологии сосудов им. А.В. Шмидта - Б.А. Кудряшова и -ской Ассоциации
медицинской лабораторной диагностики по лабораторным методам
исследования системы гемостаза
«Представление результатов в виде протромбинового времени больного с
указанием значений для нормальной плазмы, или протромбинового
индекса, не позволяет количественно оценить величину отклонения
показателя от нормы. Эти показатели использовать не
рекомендуется.»
37. Активований частково тромбопластиновий час
(АЧТЧ)
Тест активності «внутрішнього» шляху гемокоагуляції
Залежить від активності всіх факторів, крім VII і XIII
Нормальний рівень: 25-35 сек
Моніторинг гепаринової терапії та скринінг гемофілії
38. Активований частково тромбопластиновий час (АЧТЧ)
Пролонгація: наявність гепарину, інгібіторів
тромбіну, PDF, наявність вовчакового
антикоагулянту
Подовження при зниженні факторів
«внутрішнього» шляху < 30% від норми
44. Тромбіновий час
Критерій активності гемокоагуляції ??
Як оценювати результат
«короткий тромбіновий час» 11-13 сек ( 6
NIH/мл)
«довгий тромбіновий час». 18-21 сек (3
NIH/мл)
45. Основні шляхи регуляції
фібринолітичної активності
ТАП ПЛАЗМІНОГЕН Урокіназа
ІТАП 1 ІТАП 2
ПЛАЗМІН АНТИПЛАЗМІН
Фібриногенфібрин
Продукти деградації
ПДФ/ф Д-дімер
46. Методи дослідження
фібринолітичної активності
Лізис еуглобулінового згустку
Виявлення активності
тканинний активатор плазміногену (TAP)
Інгібітор ТАП
швидкодіючий антиплазмін
продукти розпаду фібриногену/фібрину
(PDF, D-дімер)
47. Основні фази розвитку
ДВЗ-синдрому
1 фаза - гіперкоагуляція
2 фаза - гіпокоагуляція в поєднанні з
кровотечею на тлі дефіциту факторів згортання і
активацією коагуляції
Фібриноліз
Фаза 3 - закінчення розвитку синдрому
51. Механізм дії
АСК та НПВ
Арахідонова кислота АСК
Циклооксігеназа -1 тромбоцитів
простагландін G2
НПВ
Пероксідаза
Циклооксігеназа-2
Простагландін H2
Простациклін сінтетаза Тромбоксан сінтетаза
Простациклін Тромбоксан A2
PG F1a thromboxane B2 в сечі
52. Метаболізм клопідогрела(Плавікс)
Tabassome Simon, M.D. с соавт., 2009 ,
JACC Cardiovasc Interv. 2009 Nov;2(11):1095-101
Клопідогрел
Внутрикишечное всасывание
(АВСВ1)
Эстеразы
Неактивні метаболіти
(около 85%)
Внутрипеченочный
метаболизм
CYP2C19, 2C9, 3A4,
2B6, 1A2
Активні метаболіти
(15%)
P2RY12
рецептор
АДФ
ГП IIb/IIIa
рецептор
ITGB3
Тромбоцит
КЛОПІДОГРЕЛЬ - це проліки.
Біотрансформація відбувається в
печінці.
Активний метаболіт – похідне тіолу –
утворюється при окисленні
КЛОПІДОГРЕЛЮ
до оксоклопідогрелю з подальшим
гідролізом.
Таке окислення відбувається за участю
цитохрому Р450.
Активний метаболіт, який може бути
виділений in vitro, швидко і необоротно
зв'язується з тромбоцитарними
рецепторами і пригнічує їх агрегацію.
Крім того, велика частина клопідогрелю
розщеплюється естеразами на
неактивному шляху.
Неактивний метаболіт є похідним
карбонової кислоти,
становить близько 85% циркулюючого
з'єднання плазми.
53. Ролі в активності клопідогрельних
білків з відомим генетичним
Поліморфізмом.
Кишкова абсорбція клопідогрелю проліку обмежена
кишковим насосом для випоту P-глікопротеїну,
закодований геном ABCB1.
Більшість з них пролікування метаболізується в неактивні
метаболіти повсюдними ефіразами.
Меншість біоактивується різними ізоформами цитохрому
P450 (CYP) в активні метаболіти.
Ці метаболіти необоротно антагонізують аденозин
дифосфатний (АДФ) рецептор (закодований геном P2RY12),
який в свою чергу інактивує рецептор фібриногену
(рецептор глікопротеїну [GP] IIb/IIIa закодований геном
ITGB3), що бере участь в агрегації тромбоцитів.
54. Методи дослідження дії препаратів
1.Класична оптична агрегометрія
(метод Born)
2. Вимірювання метаболітів тромбоцитів
(тромбоксанУ В2 в сечі)
3. PFA 100 /Innovance
4. Агрегометрія цільної крові (метод імпедансу)
Multiplate
5.Veryfy Now
64. 64
Hirsh, J. et al. (2001); Deitcher, S.R.
(2005)
Точки застосування дій ОАВК
Фибриноген Фибрин
* Измененные факторы
Антагоністи вітаміну К активні проти декількох факторів,
що беруть участь в каскаді коагуляції. Deitcher, S.R. (2005)
66. Середній час нормальної плазми
Середній час нормальної плазми
визначається як середній геометричний
протромбіновий час свіжої цитратної
плазми 20 донорів
67. Локальна калібровка
Дозволяє підвищити точність
індрординації (дослідження) без
використання МІЧ
Дозволяє уникнути апаратної помилки
70. 70
Wittkowsky, A.K. (2005)
Половина тривалості життя вітаміну К
залежних факторів згортання крові
Вітамін К –необ-
хідий для
сінтезу факторів
сзідання крові
71. Результати дослідження МНС
в контрольних образчиках,
цикл 1-10 разділ «Коагулологія»
Реагенти n
Середня
норма
CV%
Середнє
патол
CV%
Техпластін-тест (К) 102 0,94 14,5 1,51 22,8
Ренампластін 296 1,00 9,9 1,49 14,7
Техпластін-тест (R) 403 0,94 14,4 1,62 18,5
Thromborel S 139 0,94 7,5 1,54 11,2
RecombiPlasTin/2G 40 0,98 5,1 1,49 10,9
Neoplastin Plus 85 1,02 6,2 1,73 10,1
Допустимий діапазон: сред ± 22%
США, Великобританія: сред ± 15%
72. ДОЛЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ОЦЕНКИ ОТНОСИТЕЛЬНОГО СМЕЩЕНИЯ,
УДОВЛЕТВОРЯЮЩИХ КРИТЕРИЯМ КАЧЕСТВА, ДЛЯ РАЗЛИЧНЫХ
НАБОРОВ РЕАГЕНТОВ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ МНО
89,2
96,3
92,9
91,9
88,9
94,3
95,7
98,9
97,2
100,0
97,8
68,8
90,0
81,3
82,8
86,2
89,7
78,3
92,4
95,4
94,4
100,0
63,5
72,4
74,4
77,4
77,8
82,3
85,0
86,2
93,8
100,0
100,0
50 60 70 80 90 100
Технология-Стандарт, Техпластин-тест (К)
Human, HemoStat Thromboplastin-SI
Технология-Стандарт, Техпластин-тест (R)
Ренам, Тромбопластин
Ренам, Тромбопластин с кальцием
Ренам, Ренампластин
Tcoag, TriniCLOT PT Excel S
Stago/Roche, Neoplastin Plus
Siemens, Thromborel S
ILab., HemosIL PT-Fibrinogen HS Plus
ILab., HemosIL RecombiPlasTin 2G
Доля удовлетворительных результатов, %
1,06 (цикл 2-11) 1,86 (цикл 1-11) 2,68 (цикл 3-11)
73. Якість вконання
тестів ПЧМНС
в лабораторній практиці
Якість реагенту (вибір реагенту)
Рівень досліджень що проводяться
(професійна підготовка персоналу, своєчасне технічне
обслуговування, організація лабораторних робіт…)
Преаналітичний етап (стандартизація, одноразові
системи … Концентрація цитрату – 0,105 - 0.109 моль/л
для контролу терапиії ОА)
74.
75. Корисність лабораторних досліджень при
терапії НОАК
Підбір дози леків – НІ
(НОАК ефективні та безпечні при стандартних
дозах у пацієнтів без ниркової недостатності
Вимірення концентрації в крові – ТАК
(для вимірення рівня в крові в залежності від
клінічної ситуації)
76. Необхідність лабораторного тестування терапії
НОАК :
-до початку лікування
-при можливості проведениня
інвазивногохірургічного втручання
Перед початком тромболітичної терапії ( при
ішемічному інсульті)
Можливе тестування
через 1-2 тижні від початку терапії, коли
досягається стабільна гіпокоагуляція
77. Dabigatran Rivaroxaban
Загальні тести Екаріновий час (Ecarin
time)
Модифікований
тромбіновий час
(Hemoclot)
• ПЧ (відношення
пацієнтнорма)
Специфічні
тести
• анти-IIa активність
( хромогений метод)
• Анти Xa активність
• (хромогений метод)
80. метод Hattersley
12 мг діатомної землі + 2 мл крові
110-120 сек норма
400 сек - початок ЕК
600 сек-під час ЕК
81. Ваше рішеннч при виміренні гепаріну
в крові -Actalyke
Портативен
Простота в зверненні
Наявність принтера
Підвищена точність
Широкий діапазон
вимірюваного рівня
гепарину в крові
82. HEMOCHRON Jr Signature / Signature+
( ITC)
Можливі дослідження
– Цільна кров (капілярна, венозна)
– Цитратна кров
83. HEMOCHRON
У системах HEMOCHRON Jr Signature і Signature+
використовуються однакові одноразові засоби.
Доступні два тести PT, один для використання зі свіжою
цільною кров'ю, інший для використання з цитрованою
цільною кров'ю.
Свіжий кювет крові можна використовувати як з
капілярними, так і з венозними зразками.
Існує два рівні EQC, що забезпечуються обома системами
та уніфікованим КК цільної крові для кожного типу тесту.
Системи відрізняються своїми можливостями блокування
та відповідності, оскільки Signature+ включає набагато
більше функцій для забезпечення відповідності.
84. Контроль гепарінотерапії НФГ
АЧСК (АСТ)
АЧТЧ (збільшення в 2-2,5 рази)
АТ-III
Кількість тромбоцитів
Виявлення концентрації в крові (фактор
Х-а активність)
85. Контроль гепарінотерапії ФГ
Виявлення концентрації в крові (фактор
X-a активність)
АТ-III
Кількість тромбоцитів
87. Методи діагностики ГІТ
Експрес імунохроматографічний метод
наявності Ig G антитіл (Stago)
Експрес метод гель-дифузії
Метод агрегації відмитих тромбоцитів
використанням плазми пацієнта (HIPA)
ІФ метод виявлення різних класів антитіл
(IgG,IgM,IgA) ( Instrumentation Lab)
90. Д-дімер – продукт розщіплення фібрину
Під впливом плазміну відбувається
розщеплення як фібрину, так і
фібриногену. При гідролізі фібрину
утворюються складні фрагменти,
основними з яких є D-димери
D-димери - це ділянки молекули
фібрину, пов'язані міцної глутаміл-
лізинової зв'язком, що утворюється в
момент утворення нерозчинного
фібринового полімеру.
D-DIMER є діагностичним маркером
багатьох патологічних станів системи
гемостазу, що супроводжуються
внутрішньосудинним відкладенням
фібрину: ДВЗ-синдромом
(дисеміноване внутрішньосудинне
згортання крові), тромбозом глибоких
вен нижніх кінцівок, тромбоемболією
легеневої артерії, коронарним
тромбозом та ін.
91. Тест Д-дімер для виключення ВТЕ
До 70% пацієнтів з підозрою на ВТЕ не
мають значення D-димеру вище, ніж
зрізане
Переваги оцінки D-Димера
зменшення кількості небезпечних і
дорогих досліджень ВТЕ-діагностики
(ангіографія та ін.)
Скорочення часу на початок лікування
92. Вікова залежність порогового рівня
D-димеру
Порогове значення (мкгмл ) =вік х 10
(наприклад для 60 років – 600 мкгмл)
Облік порогового значення дозволяє:
1. Підвищити специфічність тесту зі старшою
віковою групою (>50 років) з 15% до 35%
без зміни чутливості,
2.Зменшити мету додаткових розслідувань до
35-54 %%
Schounten et al. BMJ 2013
93. Методи виявлення Д-дімера
Якісні методи (АФК) для визначення D-
димеру в плазмі і цільній крові
Напівкількісні методи визначення D-
димеру в плазмі
Кількісне визначення D-димеру в плазмі
94. Набіор реагентів для полукількісного
виявлення Д-димеру XL-FDP (Індія) (
метод латекс-аглютинації)
Універсальний маркер
внутрішньосудинного
згортання крові, ДВЗ-
синдрому, венозного та
артеріального тромбозу
Висока специфічність
Висока чутливість
ручний метод
Час реакції – 5хв
97. Тепер до індивідуальних систем, з яких повинен
вибирати клініцист.
Система мікрокоагуляції ProTime була першою
системою для виконання PT-тестів, очищених для
домашнього використання FDA США.
Це також єдина система PT, яка завершила перевірку
статусу відмови через керівні принципи CDC щодо
відмови від 1994 року.
ProTime 3, кювети з синім маркуванням, є новішою
версією тестового одноразового, очищеного як
еквівалент стандарту
Виходячи з програмного забезпечення в інструменті,
будь-який кювет можна використовувати в одному
пристрої.
99. І CoaguChek, і CoaguChek S вмикаються однією
кнопкою. За підказкою екрана смужка вставляється і
попередньо зосереджується.
При показанні на інструменті на цільову область тест-
смужки наноситься одна крапля цільної капілярної
крові (~ 10 мкл, перша крапля крові).
Капілярна дія втягує зразок і змішує його з реагентом і
частинками заліза.
Змінні магнітні поля всередині приладу змушують
частинки заліза рухатися. При утворенні згустків
частинки заліза перестають рухатися і результат
виводиться у вигляді МНО.
Вимоги до контролю якості залежать від використання,
як описано на наступному слайді.
100. Взятя крові в капіляр
Змішування крові з реагентом та частками
Зупинка руху частинок
CoaguChek CoaguChek S
106. 2-о та 4-о канальні коагулометри CoaData
“Labitec” (Германія)
Прилади дозволяють визначити:
протромбіновий час (МНО), АЧТЧ,
фактори згортання крові,
антитромбін III, білок С, вовчак-
антикоагулянт, тромбіновий час,
фібриноген.
Д-димер –додатково !!
Пристрій має вбудований принтер,
автоматичний запуск.
Міні-об'єми плазми і реагентів.
Можна підключитися до комп'ютера.
Зберігання бази даних на чіпових
картках.
Продуктивність до 80 PV-визначень
на годину.
107. Одноканальний портативний коагулометр опто-
механічний
CoaDATA-501 (“Labitec” Германія)
Одноканальний
Оптико-механічний
Мікро-зразки
Мікровитрата реагентів
Блок живлення 12 В
Невелика вага і габарити
Програмований
Визначення
Протромбіновий час
(МНО)
АЧТЧ (гепарин)
Фібриноген
108. Автоматичний аналізатор
гемостазу (MG 1410 Maroche)
Коагулометричний канал
(ПВ,АЧТВ,Ф,ТВ)
Контроль якості
Не потребує промивки та
очистки
До 120 ПЧ/год
Адаптовано до усіх типам
реактивів («відкрита
система»)
109. Ризик фактори
тромбофілічних тромбозів
Дефіцит антиромбіну
Дефіцит протеіну С
Дефіцит протеіну S
Резистентність до протеіну Са
Мутація гену протромбіну 20210
Гіпергомоцистеінемія
Підвищення рівня FVIII or FXI
110. Міждународні попередні
лабораторні критерії АФС
1) Антитіла до кардіоліпінових класів IgG або IgM в сироватці крові в
середовищі або високі титри (вище 15 МОд), що визначаються не менше
двох разів протягом 6 тижнів;
2) Вовчаковий антикоагулянт виявляють у плазмі не менше двох разів
протягом 6 тижнів:
1) подовження фосфоліпідзазалежної згортання крові при використанні
скринінгового тесту (АЧТЧ, тест на отруту гадюки Рассела, )
2) Відсутність нормалізації часу згортання крові за даними скринінгових
тестів при змішуванні з нормальною плазмою без тромбоцитів
3) Нормалізація подовженого часу згортання крові при додаванні
надлишків фосфоліпідів
4) Виключення інших коагулопатій (наявність фактора VIII або інгібіторів
гепарину в крові)
111. Кофактори антифосфоліпідних
антитіл
2-глікопротеїн I (аполіпопротеїн Н) - 2-глобулін з
молекулярною масою 50 кДа, присутній в плазмі в
кількості 200 мкг / мл.
2-глікопротеїн I є інгібітором внутрішнього шляху
коагуляції.
Виявлення антитіл до кардіоліпіну в сироватці крові
одночасно з антитілами до β2-ГП I підвищує
специфічність діагностики АПС.