sistem imun pada kepiting

1. Peningkatan respon imun dan perlindungan
terhadap infeksi sekunder pada kepiting bakau
(Scylla paramamosain) dipancing dengan
formalin-killed Vibrio parahemolyticus
REVIEW
SORBAKTI SINAGA
226080101111003
Sumber : Yang Wei, et. Al. 2020

2. Outline
• Pendahuluan
• Tujuan
• Metodelogi Penelitian
• Hasil
• Pembahasan

3. Pendahuluan
• Kepiting bakau (Scylla paramamosain)adalah spesies krustasea laut
yang umumnya didistribusikan di Cina dan negara-negara Pasifik
Indowest (Kong dkk. 2018).
• Dalam konteks pertanian intensif, bakteri motil Gram-negative Vibrio
parahemolyticus adalah salah satu patogen yang sering bertanggung
jawab atas penyakit invasif pada kepiting bakau yang dibudidayakan.
• Vibrio parahemolyticus pada kepiting bakau saat ini sulit dicegah
karena pemahaman yang buruk tentang mekanisme infeksi yang
terkait dengan inang, terutama tidak adanya mesin molekuler yang
mendasarinya.

4. Meningkatkan kelangsungan hidup dan
kemampuan resisten terhadap patogen
infeksius, antibiotik dan agen terapeutik
(misalnya,stimulan imun dan probiotik
yang diberikan secara oral) telah umum
diterapkan
Antibiotik yang digunakan dalam budidaya dan
residunya dapat masuk ke lingkungan dan rantai
makanan manusia, sehingga menimbulkan efek
negatif terhadap lingkungan dan kesehatan
manusia.
pemberian imunostimulan masih ditentang oleh
berbagai pertanyaan yang diajukan oleh para
ahli, karena stimulasi terus-menerus dari sistem
kekebalan dapat merugikan daripada
melindungi (Paus, 2012)

5. • Invertebrata telah terbukti tidak memiliki sistem kekebalan adaptif
dan mereka terutama bergantung pada kekebalan bawaan untuk
mencegah infeksi patogen yang menyerang.
• Meskipun sistem imun bawaan telah dianggap non-spesifik,
invertebrata, termasuk krustasea, telah dilaporkan menunjukkan
bentuk memori imun dengan ciri-ciri imunitas adaptif.
• Peningkatan kelangsungan hidup dan respon imun pada invertebrata
setelah paparan sekunder terhadap patogen yang ditemui
sebelumnya umumnya disebut "priming imun“
• Bukti yang tersedia telah membuktikan bahwa priming dengan
patogen yang tidak aktif meningkatkan respon imun pada beberapa
hewan air dan melindungi mereka terhadap patogen tertentu (Dubief
dkk., 2017; Wang dkk., 2019).

6. Tujuan
• Mengetahui efek dari formalin-inactivated V. parahemolyticus
pada tingkat kelangsungan hidup, aktivitas anti bakteri
hemolymph, efisiensi pembersihan patogen, jumlah total
hemosit, dan aktivitas fagositosis hemosit kepiting bakau yang
diberikan dengan patogen hidup.

7. Metode Penelitian yang Dilakukan
• Kepiting bakau remaja yang sehat (berat badan 40-60 g).
• Semua kepiting diaklimatisasi dalam tangki laboratorium yang berisi air laut.
• Setelah aklimatisasi, kepiting secara acak dibagi menjadi kelompok eksperimen dan kontrol untuk injeksi
priming dan tantangan.
• Selama percobaan, air diganti setiap hari dan kepiting diberi makan sekali sehari dengan pakan pelet
komersial.
• Bakteri V. parahemolyticusATCC 17806 awalnya diisolasi dari kepiting mati yang mati karena penyakit
vibriosis.
• Bakteri dipertahankan pada pelat agar dan kemudian diinokulasi dalam tabung medium cair pada shaker
pada suhu 37°C sebelum fase pertumbuhan logaritmik akhir. Sel-sel bakteri dipanen dengan sentrifugasi
pada 1100 selama 8 menit,
• Dicuci tiga kali dengan saline steril (0,85%), dan disuspensikan kembali dalam saline pada OD600 = 0,58
(dengan densitas 2 × 108 sel·mL1).
• Bakteri yang digunakan untuk priming kekebalan disiapkan dengan menonaktifkanV. Parahemolyticus
dengan formalin pada konsentrasi akhir 1,0% selama 24 jam.
• Sel bakteri yang dibunuh formalin diperoleh dengan sentrifugasi (1100 ×gselama 8 menit) kemudian dicuci
tiga kali dan juga disuspensikan kembali dalam larutan garam steril pada OD600 = 0,58 (dengan densitas 2 ×
108sel·mL1)
• Preparat stimulus disuntikkan ke pangkal kaki keempat masing-masing kepiting menggunakan jarum suntik
sekali pakai 1 mL. Untuk setiap kelompok, percobaan kelangsungan hidup diulang tiga kali dan dalam setiap
percobaan ulangan, sejumlah 24 kepiting digunakan untuk pengujian.

8. Diagram desain eksperimental menunjukkan perawatan stimulasi primer dan tantangan sekunder untuk studi priming imun
pada kepiting bakau. Jumlah kepiting yang digunakan untukanalisis kelangsungan hidup pada kelompok Blank, Nave, SA, dan
FVP dan untuk pengambilan sampel hemolimfa pada kelompok SA dan FVP berturut-turut adalah 24 dan 3 ekor
Blank : tidak menerima
perlakuan
Naif : hanya menerima
tantangan sekunder dengan
liveV. Paraemolyticus
SA (menerima stimulasi
pertama dengan saline steril
dan tantangan mematikan
dengan liveV. paraemolyticus)
FVP (menerima stimulasi
priming dengan formalin-
killedV
Pengobatan pertama
untuk immune priming
(IP), dan pengobatan
kedua untuk tantangan
mematikan (LC)

10. Hasil
Efek perlindungan dari formalin-killed V.
parahemolyticus dalam kepiting bakau melawan V.
parahemolyticus infeksi.
• (A) Kematian kepiting yang diberi perlakuan
formalin dengan dosis berbedaV. Parahemolyticus
diikuti oleh tantangan dengan live V.
paraemolyticus.
• (B) Kematian kepiting yang diberikan formalin V.
paraemolyticus (2.0 × 105sel·g1) pada titik waktu
yang berbeda pasca-priming.
• (C) Kelangsungan hidup kumulatif kepiting bakau
yang sebelumnya menerima pembunuhan
formalinV. paraemolyticus (Kelompok FVP)

11. Perubahan aktivitas antibakteri
• (A) Efisiensi pembersihan patogen
• (B) pada hemolimfa kepiting yang
dipancing dengan formalin-killed V.
parahemolyticus setelah perlakuan
dengan V. paraemolyticus.
• Tanda bintang menunjukkan
perbedaan yang signifikan antara
kedua kelompok (*P < .05).
Jumlah sel bakteri hemolimfa kepiting dari
kelompok FVP secara signifikan lebih rendah 0,5-
2 hpi dibandingkan dengan kelompok SA (P
< .05)

12. Tanda bintang menunjukkan perbedaan yang signifikan antarakedua kelompok (*P < .05, **P < .01,
***P < .001).
Keterangan :
A : Jumlah total hemosit (THC),
B : Indeks fagositik (PI),
C : laju fagositik (PR) hemosit yang dibuat
dari kepiting menerima injeksi priming dan
perlakuan.
D : Gambar fagositosis hemosit dari
kelompok SA dan FVP pada 12 dan 24
hpp.
E : Sampel hemosit dari kepiting prima
yang diinkubasi dengan FITClabeledV.
paraemolyticus (kiri) atau tidak berlabelV.
paraemolyticus (kanan) dianalisis dengan
flow cytometry.
F : Perubahan aktivitas fenoloksidase (PO)
dari hemolimfa bebas sel setelah
tantangan pertama dan kedua. Bilah
kesalahan menunjukkan kesalahan standar
rata-rata (SEM).

13. Kesimpulan
• Fenomena priming imun yang ditimbulkan oleh inaktif V.
parahemolyticus terjadi pada kepiting bakau, yang meningkatkan
tingkat kelangsungan hidup, serta kemampuan pembersihan bakteri
setelah infeksi kedua.
• Tingkat fagositosis yang ditingkatkan, khususnya peningkatan rasio
hemosit yang bertanggung jawab untuk fagositosis dianggap sebagai
mekanisme yang mungkin untuk peningkatan aktivitas fagositosis.

14. THANKYOU….