1. 39
Khi các kết quả khảo sát chứng tỏ quy trình đạt các yêu cầu về thẩm định, tiến hành
định lượng alcaloid và flavonoid và so sánh kết quả định lượng của hai quy trình bằng
thống kê ANOVA một yếu tố.
- Hàm lượng alcaloid hoặc flavonoid được tính bằng µg/g dược liệu theo công thức:
3
10
100
100
100
)/( 


hm
đpla
C
S
S
ggP c
c
t
 , trong đó:
- St: diện tích pic (hoặc tỷ số diện tích pic chuẩn hóa) của mẫu thử
- Sc: diện tích pic (hoặc tỷ số diện tích pic chuẩn hóa) của mẫu đối chiếu
- h: độ ẩm tương đối của mẫu thử (%) - m: khối lượng bột lá (g)
- Cc: nồng độ của mẫu đối chiếu (mg/ml) - a: độ tinh khiết CĐC (%)
- P (µg/g): hàm lượng của alcaloid tương ứng - đpl: độ pha loãng
2.3.4.6. Phương pháp dấu vân tay
Phương pháp xác định dấu vân tay (DVT) được khảo sát trên hai phương pháp SKLM
và HPLC. Mẫu thử để khảo sát trong thí nghiệm này cũng là mẫu được sử dụng trong
quy trình phân tích alcaloid và flavonoid bằng HPLC và CE.
- Phương pháp SKLM: khảo sát các điều kiện phân tích về dung môi và thuốc thử
phát hiện. Xác định các đặc trưng cơ bản của DVT – SKLM của hai nhóm hoạt chất
chính alcaloid và flavonoid của TNHC qua hệ số Rf và màu sắc của các vết đặc trưng.
- Phương pháp HPLC: ứng dụng các điều kiện của phương pháp HPLC đã được thẩm
định ở Mục 2.3.4.2 vào phân tích “vân tay” cho dược liệu TNHC. Ghi nhận thời gian
lưu, phổ UV-Vis, % diện tích của các pic đặc trưng. Xác định DVT – HPLC của hai
nhóm hoạt chất chính của TNHC.
2.3.5. Đề xuất một số chỉ tiêu cần thiết để xây dựng TCKN dược liệu TNHC
Trên cơ sở các kết quả nghiên cứu đạt được, một số chỉ tiêu cần thiết để xây dựng
TCKN dược liệu TNHC được đề xuất trong đó:
- Chỉ tiêu và phương pháp thử của các phương pháp xác định đặc điểm hóa
học đặc trưng (xác định dấu vân tay) của lá TNHC bằng SKLM và HPLC.
- Chỉ tiêu và phương pháp thử định tính và định lượng đồng thời hai alcaloid
và hai flavonoid trong lá TNHC bằng phương pháp HPLC.