SlideShare a Scribd company logo
33
2.3.2.2. Sắc ký cột cổ điển
Mục đích: phân lập các hợp chất tinh khiết từ các phân đoạn sau khi VLC.
Tiến hành: nạp chất hấp phụ, ổn định cột bằng n–hexan, nạp mẫu theo phương pháp
nhồi cột khô, thể tích mỗi ống hứng khoảng 10 – 15 (ml). Tùy vào độ phân cực của
mẫu, dung môi bắt đầu có thể là n–hexan, hoặc diethyl ether, hoặc cloroform hoặc
hỗn hợp các dung môi. Chất hấp phụ là silica gel cỡ hạt 15 – 40 (µm) hoặc 40 – 63
(µm) được áo bên ngoài bằng hệ đệm có pH 9 – 10 để phân lập alcaloid; pH 3 – 4 để
phân lập flavonoid. Hoặc chất hấp phụ pha đảo silica gel RP-18 cũng được sử dụng
tùy tính chất của mẫu.
Yêu cầu: chất phân lập phải tinh khiết (≥ 95%), kiểm tra bằng SKLM hoặc HPLC.
2.3.2.3. Xác định cấu trúc hóa học
Cấu trúc các hợp chất sau khi phân lập được định xác định bằng phổ hồng ngoại (IR),
tử ngoại – khả kiến (UV-Vis), khối lượng (MS) và cộng hưởng từ hạt nhân (NMR).
2.3.3. Thiết lập chất đối chiếu
- Lựa chọn các alcaloid và flavonoid đã xác định cấu trúc, có khối lượng trên 500 mg
với độ tinh khiết trên 95% (HPLC), quy trình phân lập ổn định để thiết CĐC.
Các bước thực hiện theo hướng dẫn của tài liệu do ASEAN [44], [45] ấn bản về quy
trình thiết lập CĐC. Các bước tiến hành như sau:
2.3.3.1. Xây dựng phương pháp đánh giá nguyên liệu thiết lập CĐC
- Phương pháp sắc ký lớp mỏng (SKLM): khảo sát trên 3 hệ dung môi khác nhau để
đánh giá độ tinh khiết dựa vào vết chính duy nhất hoặc một vết chính và vết tạp.
- Phương pháp phân tích nhiệt trọng lượng (TGA): xác định độ tinh khiết và hàm ẩm.
Gia nhiệt tốc độ 1 o
C/phút đến qua khỏi nhiệt độ nóng chảy của mẫu khoảng 50 o
C,
lưu lượng dòng khí nitơ 50,0 ml/phút. Mỗi mẫu xác định 3 lần.
Độ tinh khiết của mẫu thử được xác định trên kết quả trung bình.
- Phương pháp HPLC: mỗi CĐC được xây dựng quy trình xác định độ tinh khiết sắc
ký với các điều kiện phân tích tương ứng với từng mẫu. Quy trình được khảo sát tính

More Related Content

What's hot

Coeus.vn a10.chất-xử-lý-bột
Coeus.vn  a10.chất-xử-lý-bộtCoeus.vn  a10.chất-xử-lý-bột
Coeus.vn a10.chất-xử-lý-bột
Nguyen Thu
 
Coeus.vn a9.chất-độn
Coeus.vn  a9.chất-độnCoeus.vn  a9.chất-độn
Coeus.vn a9.chất-độn
Nguyen Thu
 
Coeus.vn a13.chất-điều-chỉnh-độ-acid
Coeus.vn  a13.chất-điều-chỉnh-độ-acidCoeus.vn  a13.chất-điều-chỉnh-độ-acid
Coeus.vn a13.chất-điều-chỉnh-độ-acid
Nguyen Thu
 
Coeus.vn a8.chất-khí-đầy
Coeus.vn  a8.chất-khí-đầyCoeus.vn  a8.chất-khí-đầy
Coeus.vn a8.chất-khí-đầy
Nguyen Thu
 
Coeus.vn a19.chất-chống-đông-vón
Coeus.vn  a19.chất-chống-đông-vónCoeus.vn  a19.chất-chống-đông-vón
Coeus.vn a19.chất-chống-đông-vón
Nguyen Thu
 
Coeus.vn a12.chất-ổn-đinh
Coeus.vn  a12.chất-ổn-đinhCoeus.vn  a12.chất-ổn-đinh
Coeus.vn a12.chất-ổn-đinh
Nguyen Thu
 
Cách sử dụng máy sắc ký khí khối phổ
Cách sử dụng máy sắc ký khí khối phổCách sử dụng máy sắc ký khí khối phổ
Cách sử dụng máy sắc ký khí khối phổ
hienlemlinh
 
Coeus.vn a18.chất-giữ-màu
Coeus.vn  a18.chất-giữ-màuCoeus.vn  a18.chất-giữ-màu
Coeus.vn a18.chất-giữ-màu
Nguyen Thu
 
Coeus.vn c2.đồ-uống-có-cồn
Coeus.vn  c2.đồ-uống-có-cồnCoeus.vn  c2.đồ-uống-có-cồn
Coeus.vn c2.đồ-uống-có-cồn
Nguyen Thu
 
Coeus.vn a15.chất-làm-rắn-chắc
Coeus.vn  a15.chất-làm-rắn-chắcCoeus.vn  a15.chất-làm-rắn-chắc
Coeus.vn a15.chất-làm-rắn-chắc
Nguyen Thu
 
Coeus.vn a22.phụ-gia-tp-chất-điều-vị
Coeus.vn  a22.phụ-gia-tp-chất-điều-vịCoeus.vn  a22.phụ-gia-tp-chất-điều-vị
Coeus.vn a22.phụ-gia-tp-chất-điều-vị
Nguyen Thu
 
Coeus.vn g3.dụng-cụ-bao-bì-kim-loại-txtt-với-tp
Coeus.vn  g3.dụng-cụ-bao-bì-kim-loại-txtt-với-tpCoeus.vn  g3.dụng-cụ-bao-bì-kim-loại-txtt-với-tp
Coeus.vn g3.dụng-cụ-bao-bì-kim-loại-txtt-với-tp
Nguyen Thu
 
Nguyen huulacthuy la45
Nguyen huulacthuy la45Nguyen huulacthuy la45
Nguyen huulacthuy la45Phi Phi
 
Coeus.vn d1.sữa-lên-men
Coeus.vn  d1.sữa-lên-menCoeus.vn  d1.sữa-lên-men
Coeus.vn d1.sữa-lên-men
Nguyen Thu
 
Coeus.vn a16.chất-ngọt-tổng-hợp
Coeus.vn  a16.chất-ngọt-tổng-hợpCoeus.vn  a16.chất-ngọt-tổng-hợp
Coeus.vn a16.chất-ngọt-tổng-hợp
Nguyen Thu
 
Coeus.vn a7.chế-phẩm-tinh-bột
Coeus.vn  a7.chế-phẩm-tinh-bộtCoeus.vn  a7.chế-phẩm-tinh-bột
Coeus.vn a7.chế-phẩm-tinh-bột
Nguyen Thu
 
Phân tích đánh giá chất lượng một số loại thực phẩm
Phân tích đánh giá chất lượng một số loại thực phẩmPhân tích đánh giá chất lượng một số loại thực phẩm
Phân tích đánh giá chất lượng một số loại thực phẩm
Food chemistry-09.1800.1595
 
Coeus.vn a17.chất-chống-oxy-hóa
Coeus.vn  a17.chất-chống-oxy-hóaCoeus.vn  a17.chất-chống-oxy-hóa
Coeus.vn a17.chất-chống-oxy-hóa
Nguyen Thu
 
Coeus.vn b2.nước-ăn-uống
Coeus.vn  b2.nước-ăn-uốngCoeus.vn  b2.nước-ăn-uống
Coeus.vn b2.nước-ăn-uống
Nguyen Thu
 
Coeus.vn a14.phẩm-màu
Coeus.vn  a14.phẩm-màuCoeus.vn  a14.phẩm-màu
Coeus.vn a14.phẩm-màu
Nguyen Thu
 

What's hot (20)

Coeus.vn a10.chất-xử-lý-bột
Coeus.vn  a10.chất-xử-lý-bộtCoeus.vn  a10.chất-xử-lý-bột
Coeus.vn a10.chất-xử-lý-bột
 
Coeus.vn a9.chất-độn
Coeus.vn  a9.chất-độnCoeus.vn  a9.chất-độn
Coeus.vn a9.chất-độn
 
Coeus.vn a13.chất-điều-chỉnh-độ-acid
Coeus.vn  a13.chất-điều-chỉnh-độ-acidCoeus.vn  a13.chất-điều-chỉnh-độ-acid
Coeus.vn a13.chất-điều-chỉnh-độ-acid
 
Coeus.vn a8.chất-khí-đầy
Coeus.vn  a8.chất-khí-đầyCoeus.vn  a8.chất-khí-đầy
Coeus.vn a8.chất-khí-đầy
 
Coeus.vn a19.chất-chống-đông-vón
Coeus.vn  a19.chất-chống-đông-vónCoeus.vn  a19.chất-chống-đông-vón
Coeus.vn a19.chất-chống-đông-vón
 
Coeus.vn a12.chất-ổn-đinh
Coeus.vn  a12.chất-ổn-đinhCoeus.vn  a12.chất-ổn-đinh
Coeus.vn a12.chất-ổn-đinh
 
Cách sử dụng máy sắc ký khí khối phổ
Cách sử dụng máy sắc ký khí khối phổCách sử dụng máy sắc ký khí khối phổ
Cách sử dụng máy sắc ký khí khối phổ
 
Coeus.vn a18.chất-giữ-màu
Coeus.vn  a18.chất-giữ-màuCoeus.vn  a18.chất-giữ-màu
Coeus.vn a18.chất-giữ-màu
 
Coeus.vn c2.đồ-uống-có-cồn
Coeus.vn  c2.đồ-uống-có-cồnCoeus.vn  c2.đồ-uống-có-cồn
Coeus.vn c2.đồ-uống-có-cồn
 
Coeus.vn a15.chất-làm-rắn-chắc
Coeus.vn  a15.chất-làm-rắn-chắcCoeus.vn  a15.chất-làm-rắn-chắc
Coeus.vn a15.chất-làm-rắn-chắc
 
Coeus.vn a22.phụ-gia-tp-chất-điều-vị
Coeus.vn  a22.phụ-gia-tp-chất-điều-vịCoeus.vn  a22.phụ-gia-tp-chất-điều-vị
Coeus.vn a22.phụ-gia-tp-chất-điều-vị
 
Coeus.vn g3.dụng-cụ-bao-bì-kim-loại-txtt-với-tp
Coeus.vn  g3.dụng-cụ-bao-bì-kim-loại-txtt-với-tpCoeus.vn  g3.dụng-cụ-bao-bì-kim-loại-txtt-với-tp
Coeus.vn g3.dụng-cụ-bao-bì-kim-loại-txtt-với-tp
 
Nguyen huulacthuy la45
Nguyen huulacthuy la45Nguyen huulacthuy la45
Nguyen huulacthuy la45
 
Coeus.vn d1.sữa-lên-men
Coeus.vn  d1.sữa-lên-menCoeus.vn  d1.sữa-lên-men
Coeus.vn d1.sữa-lên-men
 
Coeus.vn a16.chất-ngọt-tổng-hợp
Coeus.vn  a16.chất-ngọt-tổng-hợpCoeus.vn  a16.chất-ngọt-tổng-hợp
Coeus.vn a16.chất-ngọt-tổng-hợp
 
Coeus.vn a7.chế-phẩm-tinh-bột
Coeus.vn  a7.chế-phẩm-tinh-bộtCoeus.vn  a7.chế-phẩm-tinh-bột
Coeus.vn a7.chế-phẩm-tinh-bột
 
Phân tích đánh giá chất lượng một số loại thực phẩm
Phân tích đánh giá chất lượng một số loại thực phẩmPhân tích đánh giá chất lượng một số loại thực phẩm
Phân tích đánh giá chất lượng một số loại thực phẩm
 
Coeus.vn a17.chất-chống-oxy-hóa
Coeus.vn  a17.chất-chống-oxy-hóaCoeus.vn  a17.chất-chống-oxy-hóa
Coeus.vn a17.chất-chống-oxy-hóa
 
Coeus.vn b2.nước-ăn-uống
Coeus.vn  b2.nước-ăn-uốngCoeus.vn  b2.nước-ăn-uống
Coeus.vn b2.nước-ăn-uống
 
Coeus.vn a14.phẩm-màu
Coeus.vn  a14.phẩm-màuCoeus.vn  a14.phẩm-màu
Coeus.vn a14.phẩm-màu
 

Viewers also liked

Nguyen huulacthuy la36
Nguyen huulacthuy la36Nguyen huulacthuy la36
Nguyen huulacthuy la36Phi Phi
 
Nguyen huulacthuy la42
Nguyen huulacthuy la42Nguyen huulacthuy la42
Nguyen huulacthuy la42Phi Phi
 
Nguyen huulacthuy la25
Nguyen huulacthuy la25Nguyen huulacthuy la25
Nguyen huulacthuy la25Phi Phi
 
Nguyen huulacthuy la37
Nguyen huulacthuy la37Nguyen huulacthuy la37
Nguyen huulacthuy la37Phi Phi
 
Nguyen huulacthuy la35
Nguyen huulacthuy la35Nguyen huulacthuy la35
Nguyen huulacthuy la35Phi Phi
 
Nguyen huulacthuy la33
Nguyen huulacthuy la33Nguyen huulacthuy la33
Nguyen huulacthuy la33Phi Phi
 
Nguyen huulacthuy la41
Nguyen huulacthuy la41Nguyen huulacthuy la41
Nguyen huulacthuy la41Phi Phi
 
What you need to know about re-engineering your life
What you need to know about re-engineering your lifeWhat you need to know about re-engineering your life
What you need to know about re-engineering your life
Qlifevision
 
Nguyen huulacthuy la31
Nguyen huulacthuy la31Nguyen huulacthuy la31
Nguyen huulacthuy la31Phi Phi
 
Printed Supercapacitors
Printed SupercapacitorsPrinted Supercapacitors
Printed Supercapacitors
Bing Hsieh
 
Practica 6
Practica 6Practica 6
Practica 6
alvarogs7
 
lenguaje escrito
lenguaje escrito lenguaje escrito
lenguaje escrito
Alexandra Reyes
 
Carta astral imagen
Carta astral imagenCarta astral imagen
Carta astral imagen
jaadeee
 
Pp patrulla verde
Pp patrulla verdePp patrulla verde
Pp patrulla verde
carmentg54
 
Del manga al anime [autoguardado]
Del manga al anime [autoguardado]Del manga al anime [autoguardado]
Del manga al anime [autoguardado]
pussies5
 
Bloc de marysol contruyendo ciudadania
Bloc de marysol contruyendo ciudadaniaBloc de marysol contruyendo ciudadania
Bloc de marysol contruyendo ciudadania
Marysol Chacón González
 
Sbs v4-130305232717-phpapp01 (1)
Sbs v4-130305232717-phpapp01 (1)Sbs v4-130305232717-phpapp01 (1)
Sbs v4-130305232717-phpapp01 (1)
plutoone TestTwo
 
Consortium overview deck 6 13-2103
Consortium overview deck 6 13-2103Consortium overview deck 6 13-2103
Consortium overview deck 6 13-2103
Rob Alexander
 

Viewers also liked (20)

Nguyen huulacthuy la36
Nguyen huulacthuy la36Nguyen huulacthuy la36
Nguyen huulacthuy la36
 
Nguyen huulacthuy la42
Nguyen huulacthuy la42Nguyen huulacthuy la42
Nguyen huulacthuy la42
 
Nguyen huulacthuy la25
Nguyen huulacthuy la25Nguyen huulacthuy la25
Nguyen huulacthuy la25
 
Nguyen huulacthuy la37
Nguyen huulacthuy la37Nguyen huulacthuy la37
Nguyen huulacthuy la37
 
Nguyen huulacthuy la35
Nguyen huulacthuy la35Nguyen huulacthuy la35
Nguyen huulacthuy la35
 
Nguyen huulacthuy la33
Nguyen huulacthuy la33Nguyen huulacthuy la33
Nguyen huulacthuy la33
 
Nguyen huulacthuy la41
Nguyen huulacthuy la41Nguyen huulacthuy la41
Nguyen huulacthuy la41
 
What you need to know about re-engineering your life
What you need to know about re-engineering your lifeWhat you need to know about re-engineering your life
What you need to know about re-engineering your life
 
Nguyen huulacthuy la31
Nguyen huulacthuy la31Nguyen huulacthuy la31
Nguyen huulacthuy la31
 
Printed Supercapacitors
Printed SupercapacitorsPrinted Supercapacitors
Printed Supercapacitors
 
Mirando hacia atras
Mirando hacia  atrasMirando hacia  atras
Mirando hacia atras
 
Practica 6
Practica 6Practica 6
Practica 6
 
lenguaje escrito
lenguaje escrito lenguaje escrito
lenguaje escrito
 
Carta astral imagen
Carta astral imagenCarta astral imagen
Carta astral imagen
 
Pp patrulla verde
Pp patrulla verdePp patrulla verde
Pp patrulla verde
 
Del manga al anime [autoguardado]
Del manga al anime [autoguardado]Del manga al anime [autoguardado]
Del manga al anime [autoguardado]
 
Bloc de marysol contruyendo ciudadania
Bloc de marysol contruyendo ciudadaniaBloc de marysol contruyendo ciudadania
Bloc de marysol contruyendo ciudadania
 
Roi Xordo - Laredo -
Roi Xordo   - Laredo -Roi Xordo   - Laredo -
Roi Xordo - Laredo -
 
Sbs v4-130305232717-phpapp01 (1)
Sbs v4-130305232717-phpapp01 (1)Sbs v4-130305232717-phpapp01 (1)
Sbs v4-130305232717-phpapp01 (1)
 
Consortium overview deck 6 13-2103
Consortium overview deck 6 13-2103Consortium overview deck 6 13-2103
Consortium overview deck 6 13-2103
 

More from Phi Phi

Vsf 473 lect_13_bonsai37
Vsf 473 lect_13_bonsai37Vsf 473 lect_13_bonsai37
Vsf 473 lect_13_bonsai37
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai36
Vsf 473 lect_13_bonsai36Vsf 473 lect_13_bonsai36
Vsf 473 lect_13_bonsai36
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai35
Vsf 473 lect_13_bonsai35Vsf 473 lect_13_bonsai35
Vsf 473 lect_13_bonsai35
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai34
Vsf 473 lect_13_bonsai34Vsf 473 lect_13_bonsai34
Vsf 473 lect_13_bonsai34
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai33
Vsf 473 lect_13_bonsai33Vsf 473 lect_13_bonsai33
Vsf 473 lect_13_bonsai33
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai32
Vsf 473 lect_13_bonsai32Vsf 473 lect_13_bonsai32
Vsf 473 lect_13_bonsai32
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai31
Vsf 473 lect_13_bonsai31Vsf 473 lect_13_bonsai31
Vsf 473 lect_13_bonsai31
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai30
Vsf 473 lect_13_bonsai30Vsf 473 lect_13_bonsai30
Vsf 473 lect_13_bonsai30
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai29
Vsf 473 lect_13_bonsai29Vsf 473 lect_13_bonsai29
Vsf 473 lect_13_bonsai29
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai28
Vsf 473 lect_13_bonsai28Vsf 473 lect_13_bonsai28
Vsf 473 lect_13_bonsai28
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai26
Vsf 473 lect_13_bonsai26Vsf 473 lect_13_bonsai26
Vsf 473 lect_13_bonsai26
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai25
Vsf 473 lect_13_bonsai25Vsf 473 lect_13_bonsai25
Vsf 473 lect_13_bonsai25
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai24
Vsf 473 lect_13_bonsai24Vsf 473 lect_13_bonsai24
Vsf 473 lect_13_bonsai24
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai23
Vsf 473 lect_13_bonsai23Vsf 473 lect_13_bonsai23
Vsf 473 lect_13_bonsai23
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai22
Vsf 473 lect_13_bonsai22Vsf 473 lect_13_bonsai22
Vsf 473 lect_13_bonsai22
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai21
Vsf 473 lect_13_bonsai21Vsf 473 lect_13_bonsai21
Vsf 473 lect_13_bonsai21
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai20
Vsf 473 lect_13_bonsai20Vsf 473 lect_13_bonsai20
Vsf 473 lect_13_bonsai20
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai19
Vsf 473 lect_13_bonsai19Vsf 473 lect_13_bonsai19
Vsf 473 lect_13_bonsai19
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai18
Vsf 473 lect_13_bonsai18Vsf 473 lect_13_bonsai18
Vsf 473 lect_13_bonsai18
Phi Phi
 
Vsf 473 lect_13_bonsai17
Vsf 473 lect_13_bonsai17Vsf 473 lect_13_bonsai17
Vsf 473 lect_13_bonsai17
Phi Phi
 

More from Phi Phi (20)

Vsf 473 lect_13_bonsai37
Vsf 473 lect_13_bonsai37Vsf 473 lect_13_bonsai37
Vsf 473 lect_13_bonsai37
 
Vsf 473 lect_13_bonsai36
Vsf 473 lect_13_bonsai36Vsf 473 lect_13_bonsai36
Vsf 473 lect_13_bonsai36
 
Vsf 473 lect_13_bonsai35
Vsf 473 lect_13_bonsai35Vsf 473 lect_13_bonsai35
Vsf 473 lect_13_bonsai35
 
Vsf 473 lect_13_bonsai34
Vsf 473 lect_13_bonsai34Vsf 473 lect_13_bonsai34
Vsf 473 lect_13_bonsai34
 
Vsf 473 lect_13_bonsai33
Vsf 473 lect_13_bonsai33Vsf 473 lect_13_bonsai33
Vsf 473 lect_13_bonsai33
 
Vsf 473 lect_13_bonsai32
Vsf 473 lect_13_bonsai32Vsf 473 lect_13_bonsai32
Vsf 473 lect_13_bonsai32
 
Vsf 473 lect_13_bonsai31
Vsf 473 lect_13_bonsai31Vsf 473 lect_13_bonsai31
Vsf 473 lect_13_bonsai31
 
Vsf 473 lect_13_bonsai30
Vsf 473 lect_13_bonsai30Vsf 473 lect_13_bonsai30
Vsf 473 lect_13_bonsai30
 
Vsf 473 lect_13_bonsai29
Vsf 473 lect_13_bonsai29Vsf 473 lect_13_bonsai29
Vsf 473 lect_13_bonsai29
 
Vsf 473 lect_13_bonsai28
Vsf 473 lect_13_bonsai28Vsf 473 lect_13_bonsai28
Vsf 473 lect_13_bonsai28
 
Vsf 473 lect_13_bonsai26
Vsf 473 lect_13_bonsai26Vsf 473 lect_13_bonsai26
Vsf 473 lect_13_bonsai26
 
Vsf 473 lect_13_bonsai25
Vsf 473 lect_13_bonsai25Vsf 473 lect_13_bonsai25
Vsf 473 lect_13_bonsai25
 
Vsf 473 lect_13_bonsai24
Vsf 473 lect_13_bonsai24Vsf 473 lect_13_bonsai24
Vsf 473 lect_13_bonsai24
 
Vsf 473 lect_13_bonsai23
Vsf 473 lect_13_bonsai23Vsf 473 lect_13_bonsai23
Vsf 473 lect_13_bonsai23
 
Vsf 473 lect_13_bonsai22
Vsf 473 lect_13_bonsai22Vsf 473 lect_13_bonsai22
Vsf 473 lect_13_bonsai22
 
Vsf 473 lect_13_bonsai21
Vsf 473 lect_13_bonsai21Vsf 473 lect_13_bonsai21
Vsf 473 lect_13_bonsai21
 
Vsf 473 lect_13_bonsai20
Vsf 473 lect_13_bonsai20Vsf 473 lect_13_bonsai20
Vsf 473 lect_13_bonsai20
 
Vsf 473 lect_13_bonsai19
Vsf 473 lect_13_bonsai19Vsf 473 lect_13_bonsai19
Vsf 473 lect_13_bonsai19
 
Vsf 473 lect_13_bonsai18
Vsf 473 lect_13_bonsai18Vsf 473 lect_13_bonsai18
Vsf 473 lect_13_bonsai18
 
Vsf 473 lect_13_bonsai17
Vsf 473 lect_13_bonsai17Vsf 473 lect_13_bonsai17
Vsf 473 lect_13_bonsai17
 

Nguyen huulacthuy la44

  • 1. 33 2.3.2.2. Sắc ký cột cổ điển Mục đích: phân lập các hợp chất tinh khiết từ các phân đoạn sau khi VLC. Tiến hành: nạp chất hấp phụ, ổn định cột bằng n–hexan, nạp mẫu theo phương pháp nhồi cột khô, thể tích mỗi ống hứng khoảng 10 – 15 (ml). Tùy vào độ phân cực của mẫu, dung môi bắt đầu có thể là n–hexan, hoặc diethyl ether, hoặc cloroform hoặc hỗn hợp các dung môi. Chất hấp phụ là silica gel cỡ hạt 15 – 40 (µm) hoặc 40 – 63 (µm) được áo bên ngoài bằng hệ đệm có pH 9 – 10 để phân lập alcaloid; pH 3 – 4 để phân lập flavonoid. Hoặc chất hấp phụ pha đảo silica gel RP-18 cũng được sử dụng tùy tính chất của mẫu. Yêu cầu: chất phân lập phải tinh khiết (≥ 95%), kiểm tra bằng SKLM hoặc HPLC. 2.3.2.3. Xác định cấu trúc hóa học Cấu trúc các hợp chất sau khi phân lập được định xác định bằng phổ hồng ngoại (IR), tử ngoại – khả kiến (UV-Vis), khối lượng (MS) và cộng hưởng từ hạt nhân (NMR). 2.3.3. Thiết lập chất đối chiếu - Lựa chọn các alcaloid và flavonoid đã xác định cấu trúc, có khối lượng trên 500 mg với độ tinh khiết trên 95% (HPLC), quy trình phân lập ổn định để thiết CĐC. Các bước thực hiện theo hướng dẫn của tài liệu do ASEAN [44], [45] ấn bản về quy trình thiết lập CĐC. Các bước tiến hành như sau: 2.3.3.1. Xây dựng phương pháp đánh giá nguyên liệu thiết lập CĐC - Phương pháp sắc ký lớp mỏng (SKLM): khảo sát trên 3 hệ dung môi khác nhau để đánh giá độ tinh khiết dựa vào vết chính duy nhất hoặc một vết chính và vết tạp. - Phương pháp phân tích nhiệt trọng lượng (TGA): xác định độ tinh khiết và hàm ẩm. Gia nhiệt tốc độ 1 o C/phút đến qua khỏi nhiệt độ nóng chảy của mẫu khoảng 50 o C, lưu lượng dòng khí nitơ 50,0 ml/phút. Mỗi mẫu xác định 3 lần. Độ tinh khiết của mẫu thử được xác định trên kết quả trung bình. - Phương pháp HPLC: mỗi CĐC được xây dựng quy trình xác định độ tinh khiết sắc ký với các điều kiện phân tích tương ứng với từng mẫu. Quy trình được khảo sát tính