Presentation for my research

1. Ashar Kurnia Dian Prambodo
22/501704/PMU/11236
Dosen Pembimbing 1 : Prof.dr. Sofia Mubarika Haryana, M.MedSc, Ph.D
Dosen Pembimbing 2 : dr. Dwi Aris Agung Nugrahaningsih, M.Sc,Ph.D
EFEK PEMBERIAN SEKRETOM MESENCHYMAL STEM CELL
HUVEC TERHADAP EKSPRESI MIR-1915-3P DAN MRNA SOCS3
PADA PANKREAS MENCIT MODEL DIABETES TIPE 1
Oleh :
Magister Bioteknologi
Sekolah Pascasarjana
Universitas Gadjah Mada
Seminar Proposal
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

2. BAB I
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

3. LATAR BELAKANG
Diabetes Mellitus
Diabetes mellitus merupakan suatu
gangguan metabolik yang ditandai
dengan kondisi hyperglycemia
(Egan & Dinneen, 2019).
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected
Type 1
Type
2
Gestasional

4. ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected
th
n =
17
%
• 20
-
59
th
n =
64
%
• 60
th
n =
19,
9
%
(Ogle
Preval
ensi
DM
Tipe 1
IDF Diabetes Atlas 10th Edition,
2021
LATAR BELAKANG

5. Solu
ble
fact
ors :
Kan
dun
gan
Sekr
eto
m
Exos
ome
:
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected
VEGF, PDX-1, IL-6
miRNA, Lipid, lncRNA (Ahangar et al., 2020)
(González-González et al.,
2020)
Memiliki peranan dalam metabolisme
glukosa
LATAR BELAKANG

6. 1.
Permasalahan pada penelitian ini yaitu :
2.
Bagaimana efektifitas pemberian sekretom MSC HUVEC sebagai alternatif
pengobatan diabetes tipe 1?
Bagaimana ekspresi miR-1915-3p dan mRNA SOCS3 pada model mencit
diabetes mellitus tipe 1?
PERMASALAHAN PENELITIAN
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

7. 1.
Tujuan pada penelitian ini yaitu :
2.
Mengetahui efektifitas pemberian sekretom MSC HUVEC sebagai alternatif
pengobatan diabetes tipe 1
Mengetahui ekspresi miR-1915-3p dan mRNA SOCS3 pada model mencit
diabetes mellitus tipe
TUJUAN PENELITIAN
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

8. 1.
2.
Menambah kontribusi teori mengenai pengaruh sekretom dalam mekanisme
antidiabetes.
Sebagai landasan untuk penelitian lanjutan penggunaan sekretom MSC HUVEC
sebagai salah satu alternatif pengobatan diabetes mellitus tipe 1.
MANFAAT PENELITIAN
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

9. No
Penelitian
Terdahulu
Penelitian
yang dilakukan
1. Penelitian masih banyak membahas efek eksosom
MSC HUVEC secara in vitro
Penelitian yang akan dilakukan menggunakan
sekretom miRNA MSC HUVEC sebagai alternatif
terapi Diabetes mellitus tipe 1
2.
Penelitian menggunakan sekretom HUVEC
dari Adipose Stem Cell menunjukkan adanya
induksi proses angiogenesis,
tissue repair, dan mempengaruhi P13K-AKT
pathway pada sel
endothelial
(Silveira et al., 2022)
Penelitian
yang akan dilakukan menargetkan target gen
mRNA SOCS3 pada JAK/STAT signaling
yang berpegaruh terhadap mekanisme Diabetes
Mellitus Tipe 1
KEASLIAN PENELITIAN
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

10. BAB II
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

11. DIABETES MELLITUS TIPE 1
• Diabetes mellitus tipe 1 merupakan penyakit yang dicirikan oleh kerusakan pada sel
β pankreas yang diakibatkan oleh autoimun pada tubuh (Akil et al., 2021).
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

12. MSC HUVEC
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected
Mesenchymal Stem Cell merupakan sel
dewasa seperti fibroblas, multipoten,
dan dapat ditemukan di sumsum tulang,
jaringan adiposa, dan tali pusar
(Volarevic et al., 2018).
Mesenchymal Stem
Cell
(MSC)
Human Umbilical Vein Endothelial Cell
(HUVEC)
HUVEC merupakan salah satu jenis sel
punca yang memiliki plastisitas yang
tinggi, contohnya menjadi sel jantung,
neuron-like cell, dan sel otot halus
vaskuler (Liu et al,2022)

13. SEKRETOM
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected
Sekretom merupakan sekret MSC berupa
vesikel ekstraseluer, imunomodulator,faktor
pertumbuhan,dan exosome.
(Ahangar & Mils, 2020)
Sekretom miR-1915-
3p
miR-1915-3p terekspresi downregulated pada
pasien diabetes mellitus tipe 1 dan memiliki
gen target SOCS3 (Li et al., 2016).

14. HIPOTESIS
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected
1.
Sekretom MSC HUVEC dapat digunakan sebagai alternatif terapi diabetes
mellitus tipe 1.
2
miR-1915-3p dan gen target mRNA SOCS3 dapat terekspresi.

15. BAB III
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

16. METODE
Waktu dan Tempat Penelitian
Waktu :
Juni - Desember 2023
Tempat :
• Laboratorium Farmakologi FK-KMK UGM
• Laboratorium Riset Terpadu FK-KMK UGM
Alat :
Nanodrop, alat pengukur glukosa, neraca
analitik, dissecting kit, centrifuge, dan Real -
Time PCR
Bahan :
Sekretom MSC HUVEC, mencit strain C57BL/6,
infus D10, alkohol 70 %, streptozotocin (STZ),
kit ekstraksi miRNA, kit reagen synthesis cDNA,
dan kit reagen RT-PCR.
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

17. ALUR KERJA
Pembuatan Model Mencit Diabetes Mellitus Tipe 1
Induksi Sekretom
Ekstraksi RNA Organ
Pengukuran Konsentrasi dan Kemurnian RNA
Pembuatan cDNA
Uji Ekspresi Gen
Analisis Data
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

18. CARA KERJA
Pembuatan Model Mencit Diabetes
Mellitus Tipe 1
• Mencit berusia 8 -12 pekan
diinduksi dengan streptozocin
(STZ) dengan dosis 40 mg/kg BB
selama 5 hari.
• STZ sebanyak 50 mM dilarutkan
kedalam buffer sodium citrate
hingga didapat konsentrasi akhir
sebesar 4 mg/ml.
Induksi Sekretom
• Evaluasi kadar glukosa darah
puasa pada mencit dilakukan
di hari ke-14 pasca induksi STZ
pertama.
• Kondisi diabetes mencit
ditandai dengan kadar glukosa
> 150 mg/dL.
• Induksi sekretom dilakukan
secara intramuscular pada
otot kedua kaki (masing-
masing ½ dosis) sebanyak 3
kali selama 3 hari
Ekstraksi RNA Organ
• Ekstraksi RNA dilakukan sesuai
dengan prosedur miRCURY RNA
Kit /miRNeasy Tissue/Cells
Advanced Micro Kit Qiagen
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

19. CARA KERJA
Pengukuran Konsentrasi dan
Kemurnian RNA
• Larutan RNA diukur konsentrasi dan
kemurnian menggunakan NanoVue
Plus Spectrophotometry.
Pembuatan cDNA Uji Ekspresi Gen
• Analisis mRNA
• Larutan RNA yang sudah
diekstraksi kemudian ditanskripsi
menjadi cDNA menggunakan
protokol kit universal cDNA
miRCURY LNA RT kit.
• Analisis miRNA
Analisis sampel menggunakan
QuantiFast SYBR Green RT-PCR
untuk ekspresi mRNA SOCS3
Analisis sampel menggunakan
miRCURY LNA miRNA SYBR Green
PCR untuk ekspresi hsa-mir-1915-
3p.
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected

20. TERIM
A
KASIH
ugm.ac.id Locally Rooted,Globally Respected