Materi pembelajaran praktikum biokimia blok 12

1. Determination Of Methemoglobin
By Spectrophotometry
Eka Prasasti Clearinsyah
N 101 12 155
BLOCK 12

2. Methemoglobin a/ Hb abnormal yg
kehilangan kemampuan mengikat
oksigen krn ferronya teroksidasi
menjadi ferri sehingga tdk dpt
membawa oksigen ke jaringan.
Nilai normal Methemoglobin <1%

3. Jalur utama reduksi enzimatik dari produk
NAD NADH
Donor elektron dlm reduksi ferri
metHb  ferro
Enzim ini diperlukan u/ reduksi
NAD & metHb

4. Dlm eritrosit proses reduksi enzimatik
metHb dicapai melalui reduksi NADP
yg dihasilkan o/ jalur heksosa
monofosfat.
NADPH agen pereduksi dlm konversi
tergantung dari enzim metHb dgn
Hb. Perannya sangat kecil u/ reduksi
harian metHb

5. Obat yg dapat mengkonversi Hb  MetHb
Nitrat
Klorat
Quinin
Phenacetin
Sulfonamide
Pewarna anilin
Anastesi lokal

6. Konsentrasi Gejala
15-20% Sianosis, chocolate
brown arterial blood
20-50% Kelelahan, kelemahan,
pusing, gelisah,
kebingungan, sakit
kepala, dispnea,
takikardi
50-70% Lesu, stupor, asidosis,
koma, kejang,
arrhytmia

7. Prinsip percobaan
Nilai absorbansi spectrum methemoglobin
itu kecil (630 - 635 nm) :
penambahan cyanamide : menghilangkan
puncak spectrum absorbansi dengan
mengkonversi methemoglobin menjadi
cyanmethemoglobin. Penurunan absorbansi
sebanding dengan konsentrasi Hb

8. ...
Nilai absorbansi spectrum oxyhemoglobin
itu sangat kecil (> 600 nm) :
- Jika sulfhemoglobin terdapat pada
hemolysate : terjadi peningkatan kurva
absorbsi sekitar 600 – 620 nm.
- Nilai stabil sulfhemoglobin tidak
terpengaruh cyanida

9. Alat
Kotak Alat

10. Bahan
• Hemoglobin standar 13%
• Potassium Ferricyanida
• Potassium Fosfat Buffer
• Potassium cyanida

11. Spesimen
Dara segar yg diberikan antikoagulan dgn
heparin, EDTA atau ACD (Acid Citrate
Dextrose).

12. Prosedur
1. Cuvet C1 = 1,5 mL buffer fosfat + 1,5 mL
H2O
2. Tabung reaksi = 0,1 mL darah + 3 mL
H2O  Kocok + 0,4 mL buffer potassium
fosfat  aduk rata
3. Pindahkan 3 mL hemolisat ke dlm 2
cuvet C2 & C3

13. ...
4. Cuvet C3 = 0,1 mL K3Fe(CN)6  Tutup dgn
parafin, campur dgn membolak-balik sbnyk 3x
& menghitung abs. Pada menit ke 2
5. Menghitung abs. Pada panjang gelombang
630 nm untuk C2 & C3. C1 sebagai blanko
6. SEMUA CUVET = tambahkan KCN 
campurkan & diamkan selama 5 menit
7. Hit. Abs. Pada 630 nm