discription of diverse chemical analysis methods of carbohydrates. Titration Methods (Lane-Eynon method), Gravimetric Methods (Munson and Walker method) ,Molisch’s Test,Benedict Test,Barfoed’s Test,Seliwanoff’s Test,Bial’s Test,Iodine Test,Osazone Test,Fehling’s Test,Tollen’s Test,Moore’s Test (Action of Alkali on Sugars),HYDROLYSIS TEST FOR SUCROSE توضیخ روش های مختلف آنالیز شیمیایی کربوهیدرات ها

1. ‫شیمیایی‬ ‫آنالیز‬ ‫های‬ ‫روش‬
‫ها‬ ‫کربوهیدرات‬
1

2. ‫ها‬ ‫کربوهیدرات‬ ‫آنالیز‬ ‫های‬ ‫روش‬ ‫انواع‬
•Chromatographic and Electrophoretic methods
•Chemical methods
Titration Methods (Lane-Eynon method)
Gravimetric Methods (Munson and Walker method)
Colorimetric Methods (Anthrone method, Phenol -Sulfuric Acid method )
Electroanalytical Methods (Amperometric)
•Physical Methods
•Enzymatic Methods
•Immunoassays
2

3. Titration Methods (Lane-Eynon method)
‫تعیین‬‫غلظت‬‫قند‬‫کننده‬ ‫احیاء‬‫نمونه‬ ‫در‬
‫کردن‬ ‫اضافه‬ ‫برای‬ ‫بورت‬ ‫یک‬ ‫از‬ ‫استفاده‬
‫حاوی‬ ‫فالسک‬ ‫به‬ ‫کربوهیدرات‬ ‫محلول‬
‫محلول‬‫مس‬ ‫سولفات‬‫و‬ ‫جوش‬ ‫حال‬ ‫در‬
‫معرف‬‫متیلن‬‫بلو‬.
‫قند‬‫احیا‬ ‫های‬‫کننده‬‫مس‬ ‫سولفات‬ ‫با‬
‫واکنش‬‫میدهند‬.
،‫داد‬ ‫واکنش‬ ‫مس‬ ‫سولفات‬ ‫تمام‬ ‫که‬ ‫زمانی‬
‫با‬ ‫بیشتر‬ ‫احیاکننده‬ ‫قند‬ ‫کردن‬ ‫اضافه‬‫عث‬
‫سفید‬ ‫به‬ ‫آبی‬ ‫از‬ ‫محلول‬ ‫رنگ‬ ‫تبدیل‬
‫میشود‬.
3

4. Gravimetric Methods (Munson and Walker method)
•‫کننده‬ ‫احیاء‬ ‫های‬ ‫قند‬ ‫غلظت‬ ‫گیری‬ ‫اندازه‬.
•‫مقدار‬ ‫گیری‬ ‫اندازه‬ ‫با‬‫رسوب‬‫ب‬ ‫آن‬ ‫مقایسه‬ ‫و‬ ‫شده‬ ‫تشکیل‬‫ا‬
‫تعیین‬ ‫را‬ ‫نمونه‬ ‫در‬ ‫موجود‬ ‫قند‬ ‫مقدار‬ ‫واکر‬ ‫مانسون‬ ‫جدول‬
‫میکنند‬.
4

5. Colorimetric Methods (Anthrone method, Phenol -
Sulfuric Acid method )
•‫مقدار‬ ‫روش‬ ‫دو‬ ‫هر‬‫کلی‬ ‫قند‬‫میدهند‬ ‫ما‬ ‫به‬ ‫را‬ ‫نمونه‬.
Anthrone method‫اسیدی‬ ‫شرایط‬ ‫تحت‬ ‫آنترون‬ ‫معرف‬ ‫با‬ ‫قند‬
‫رنگ‬ ‫و‬ ‫داده‬ ‫واکنش‬‫سبز‬-‫آبی‬‫میکند‬ ‫ایجاد‬.‫در‬ ‫آن‬ ‫جذب‬
620nm‫میشود‬ ‫خوانده‬.
Phenol -Sulfuric Acid method‫داخل‬ ‫را‬ ‫کربوهیدرات‬ ‫از‬ ‫مقداری‬
‫میک‬ ‫اضافه‬ ‫اسید‬ ‫سولفوریک‬ ‫و‬ ‫فنول‬ ‫بعدا‬ ‫ریخته‬ ‫تیوب‬،‫نیم‬
‫رنگ‬ ‫به‬ ‫محلول‬‫زرد‬-‫نارنجی‬‫میاید‬ ‫در‬.‫در‬ ‫آن‬ ‫جذب‬420nm
‫میشود‬ ‫خوانده‬.
5

6. Molisch’s Test
•‫واکنش‬ ‫یک‬‫حساس‬‫ولی‬‫اختصاصی‬ ‫غیر‬‫شناسایی‬ ‫برای‬
‫ها‬ ‫ماکرومولکول‬ ‫سایر‬ ‫از‬ ‫کربوهیدرات‬.
•‫سریع‬ ‫پاسخ‬ ‫ها‬ ‫مونوساکارید‬
•‫کند‬ ‫پاسخ‬ ‫ها‬ ‫ساکارید‬ ‫پلی‬ ‫و‬ ‫الیگو‬
•‫فرایند‬:2ml‫نمونه‬+‫نفتول‬ ‫آلفا‬ ‫محلول‬ ‫قطره‬ ‫چند‬+2ml‫محلول‬
‫به‬ ‫مایل‬ ‫حلقه‬ ‫تشکیل‬ ‫غلیظ‬ ‫اسید‬ ‫سولفوریک‬‫بنف‬‫ش‬
6

7. Molisch’s Test
7
‫با‬ ‫وقتی‬ ‫ها‬ ‫کربوهیدرات‬‫غلیظ‬ ‫اسید‬ ‫سولفوریک‬‫میشون‬ ‫تیمار‬،‫د‬
‫میدهند‬ ‫فورفورال‬ ‫مشتقات‬ ‫و‬ ‫شده‬ ‫دهیدراته‬.
‫پنتوز‬‫حالیکه‬ ‫در‬ ‫میکنند‬ ‫تولید‬ ‫فورفورال‬ ‫ها‬‫هگزوز‬‫ها‬5-‫هیدروکسی‬
‫فورفورال‬ ‫متیل‬.
‫ترکی‬ ‫رنگی‬ ‫محصوالت‬ ‫شکل‬ ‫به‬ ‫نفتول‬ ‫آلفا‬ ‫با‬ ‫ترکیبات‬ ‫این‬‫میشوند‬ ‫ب‬.

8. Benedict Test
•‫های‬ ‫قند‬ ‫شناسایی‬ ‫برای‬ ‫آزمایش‬ ‫این‬‫کننده‬ ‫احیاء‬‫است‬.
•‫ی‬ ‫همه‬‫مونوساکارید‬،‫ها‬‫کننده‬ ‫احیاء‬‫آز‬ ‫کربونیل‬ ‫گروه‬ ‫چون‬ ‫هستند‬‫اد‬
‫دارند‬.
•‫مثل‬ ‫هستند‬ ‫کننده‬ ‫احیاء‬ ‫هم‬ ‫ها‬ ‫ساکارید‬ ‫دی‬ ‫از‬ ‫تعدادی‬‫مالتوز‬‫و‬
‫الکتوز‬.
•‫نمیدهند‬ ‫واکنش‬ ‫معرف‬ ‫این‬ ‫با‬ ‫نشاسته‬ ‫و‬ ‫ساکارز‬ ‫ولی‬.
•‫فرایند‬:2ml‫نمونه‬+5ml‫بندیکت‬ ‫معرف‬
8
‫ماری‬ ‫بن‬
2min
‫آبی‬‫گلوکز‬ ‫فاقد‬
)+( ‫سبز‬
(++) ‫سبز‬
(+++) ‫زرد‬
(++++) ‫نارنجی‬
(+++++) ‫آجری‬ ‫قرمز‬

9. Benedict Test
9
reddish precipitate of copper
a negative test (left) and a positive test (right)

10. Barfoed’s Test
•‫تشخیص‬ ‫برای‬ ‫تست‬ ‫این‬‫مونوساکارید‬‫کننده‬ ‫احیاء‬ ‫های‬‫از‬
‫کنترل‬ ‫با‬ ‫کننده‬ ‫احیاء‬ ‫های‬ ‫ساکارید‬ ‫دی‬pH‫و‬‫حرارت‬ ‫زمان‬
‫است‬ ‫دادن‬.
•‫فرایند‬:2ml‫نمونه‬+2ml‫بارفود‬ ‫معرف‬‫لوله‬ ‫ته‬ ‫قرمز‬ ‫رسوب‬
10
‫جوش‬ ‫آب‬
3min
a negative test (left) and a positive test (right)

11. Barfoed’s Test
11
‫اسی‬ ‫استیک‬ ‫و‬ ‫مس‬ ‫استات‬ ‫از‬ ‫محلولی‬ ‫بارفود‬ ‫معرف‬‫د‬
‫است‬.
‫احی‬ ‫مونوساکارید‬ ‫حضور‬ ‫ی‬ ‫دهنده‬ ‫نشان‬ ‫مثبت‬ ‫جواب‬‫ا‬
‫ساکارید‬ ‫دی‬ ،‫زیاد‬ ‫دادن‬ ‫گرما‬ ‫صورت‬ ‫در‬ ‫است‬ ‫کننده‬
‫میدهد‬ ‫مثبت‬ ‫پاسخ‬ ‫هم‬.‫کنند‬ ‫احیا‬ ‫ها‬ ‫ساکارید‬ ‫دی‬‫ه‬
‫ها‬ ‫ساکارید‬ ‫مونو‬ ‫به‬ ‫نسبت‬ ‫تری‬ ‫ضعیف‬ ‫های‬
‫هستند‬.

12. Seliwanoff’s Test
•‫شناسایی‬ ‫برای‬ ‫تست‬ ‫این‬‫ها‬ ‫کتوهگزوز‬‫است‬.‫پس‬‫فروکت‬‫وز‬،
‫ساکارز‬‫مثبت‬ ‫جواب‬ ‫فروکتوز‬ ‫حاوی‬ ‫های‬ ‫کربوهیدرات‬ ‫دیگر‬ ‫و‬
‫میدهند‬.
•‫از‬ ‫تست‬ ‫این‬ ‫در‬HCL‫عامل‬ ‫عنوان‬ ‫به‬‫دهیدراته‬‫از‬ ‫و‬ ‫کننده‬
resorcinol‫عامل‬ ‫عنوان‬ ‫به‬‫متراکم‬‫شده‬ ‫استفاده‬ ‫کننده‬.
•‫فرایند‬:2ml‫نمونه‬+3ml‫سلیوانف‬ ‫معرف‬‫آلبالویی‬ ‫قرمز‬ ‫رنگ‬
12
‫جوش‬ ‫آب‬
30s
a negative test (left) and a positive test (right)

13. Seliwanoff’s Test
13
‫اسی‬ ‫هیدروکلریک‬ ‫با‬ ‫تیمار‬ ‫با‬ ‫ها‬ ‫کتوهگزوز‬،‫د‬5-
‫فورفورال‬ ‫متیل‬ ‫هیدروکسی‬‫میده‬ ‫تشکیل‬‫ند‬
‫با‬ ‫تغلیظ‬ ‫با‬ ‫که‬resorcinol‫آلبالویی‬ ‫قرمز‬ ‫رنگ‬
‫میدهد‬.

14. Bial’s Test
•‫شناسایی‬ ‫برای‬ ‫تست‬ ‫این‬‫پنتوز‬‫ها‬‫است‬.
•‫و‬ ‫دهیدراته‬ ‫را‬ ‫پنتوز‬ ‫تست‬ ‫معرف‬‫فورفورال‬‫میکند‬ ‫ایجاد‬.‫بعدا‬
‫با‬ ‫فورفورال‬orcinol‫میدهد‬ ‫واکنش‬ ‫معرف‬ ‫در‬ ‫موجود‬ ‫آهن‬ ‫یون‬ ‫و‬.
•‫فرایند‬:2ml‫نمونه‬+2ml‫بیال‬ ‫معرف‬
•‫پنتوز‬)+(‫آبی‬/‫آبی‬ ‫به‬ ‫مایل‬ ‫سبز‬
•‫هگزوز‬(-)‫خاکستری‬ ‫تا‬ ‫ای‬ ‫قهوه‬
14
‫میدهیم‬ ‫حرارت‬ ‫آرامی‬ ‫به‬
Negative Negative Positive

15. Bial’s Test
15

16. Iodine Test
•‫شناسایی‬ ‫برای‬ ‫تست‬ ‫این‬‫ساکارید‬ ‫پلی‬‫ها‬‫خصوص‬ ‫به‬‫نشاسته‬‫است‬.
•‫بیندازند‬ ‫دام‬ ‫به‬ ‫را‬ ‫ید‬ ‫های‬ ‫مولکول‬ ‫توانند‬ ‫نمی‬ ‫مونوساکارید‬.
•‫فرایند‬:2ml‫نمونه‬+‫لوگل‬ ‫معرف‬ ‫قطره‬ ‫چند‬
•‫ید‬+‫پررنگ‬ ‫آبی‬ ‫آمیلوز‬ ‫نشاسته‬
‫بنفش‬ ‫آمیلوپکتین‬
•‫ید‬+‫قرمز‬ ‫به‬ ‫مایل‬ ‫ای‬ ‫قهوه‬ ‫گلیکوژن‬
•‫ید‬+‫رنگ‬ ‫بی‬ ‫اینولین‬
16

17. Iodine Test
17
‫ید‬ ‫و‬ ‫نشاسته‬ ‫محلول‬‫نشاسته‬‫لوگل‬
‫وجود‬ ‫رنگی‬ ‫کمپلکس‬ ‫ایجاد‬ ‫برای‬8‫مولکول‬
‫است‬ ‫الزم‬ ‫گلوکز‬.‫طول‬ ‫به‬ ‫شده‬ ‫ایجاد‬ ‫رنگ‬
‫دارد‬ ‫بستگی‬ ‫زنجیره‬.

18. Osazone Test
•‫های‬ ‫ساکارید‬ ‫دی‬ ‫و‬ ‫مونو‬ ‫ی‬ ‫همه‬ ‫برای‬ ‫واکنش‬ ‫این‬‫کننده‬ ‫احیاء‬‫است‬.
•‫با‬ ‫که‬ ‫هنگامی‬ ‫کننده‬ ‫احیاء‬ ‫های‬ ‫قند‬ ‫از‬ ‫محلولی‬‫هیدرازین‬ ‫فنیل‬‫حرار‬‫ت‬
‫نام‬ ‫به‬ ‫رنگی‬ ‫زرد‬ ‫های‬ ‫کریستال‬ ،‫میشوند‬ ‫داده‬‫اوزازون‬‫میکنند‬ ‫ایجاد‬.
•‫هستند‬ ‫اختصاصی‬ ‫قند‬ ‫هر‬ ‫برای‬ ‫ها‬ ‫کریستال‬ ‫این‬.
•‫فرایند‬:2ml‫نمونه‬+2ml‫اوزازون‬‫رسوب‬ ‫تشکیل‬
18
‫ماری‬ ‫بن‬
20-2 min
‫زیر‬ ‫مشاهده‬
‫میکروسکوپ‬

19. Osazone Test
19

20. Fehling’s Test
‫های‬ ‫قند‬ ‫شناسایی‬‫کننده‬ ‫احیاء‬
‫بندیکت‬ ‫آزمایش‬ ‫مشابه‬
‫نیاز‬ ‫مورد‬ ‫های‬ ‫محلول‬:
.1‫فهلینگ‬ ‫محلول‬A(‫متبلور‬ ‫مس‬ ‫سولفات‬)
.2‫فهلینگ‬ ‫محلول‬B((NaOH
.3‫پتاسیم‬ ‫سدیم‬ ‫مضاعف‬ ‫تارتارات‬
‫فرایند‬:2ml‫نمونه‬+2ml‫فهلینگ‬ ‫معرف‬
20
‫فهلینگ‬ ‫معرف‬
‫ماری‬ ‫بن‬
3min
a negative test (left) and a positive test (right)

21. Fehling’s Test
21
•‫آزمایش‬ ‫دو‬ ‫اساس‬‫بندیکت‬‫و‬‫فهلین‬‫گ‬
‫قلیایی‬ ‫غلظت‬ ‫در‬ ‫فقط‬ ‫و‬ ‫است‬ ‫یکی‬‫به‬
‫یون‬ ‫با‬ ‫که‬ ‫ترکیبی‬ ‫نیز‬ ‫و‬ ‫رفته‬ ‫کار‬‫مس‬
‫دارن‬ ‫اختالف‬ ،‫میکند‬ ‫ایجاد‬ ‫کمپلکس‬‫د‬.
‫فهلینگ‬ ‫محلول‬‫تارتارات‬ ‫کمپلکس‬‫مس‬
‫ظرفیتی‬ ‫دو‬‫محلول‬ ‫حالیکه‬ ‫در‬ ‫است‬
‫به‬ ‫ظرفیتی‬ ‫دو‬ ‫مس‬ ‫یون‬ ،‫بندیکت‬
‫صورت‬‫سیترات‬ ‫کمپلکس‬‫است‬.
‫فهلینگ‬ ‫بر‬ ‫بندیکت‬ ‫آزمایش‬ ‫معموال‬
‫محلول‬ ‫زیرا‬ ‫میشود‬ ‫داده‬ ‫ترجیح‬
‫فهلینگ‬‫ناپایدار‬‫است‬.

22. Tollen’s Test
•‫شناسایی‬ ‫برای‬ ‫تالن‬ ‫آزمایش‬‫ها‬ ‫آلدئید‬‫و‬‫ها‬ ‫کتون‬‫میشود‬ ‫انجام‬.
•‫است‬ ‫آمونیاک‬ ‫و‬ ‫نقره‬ ‫کمپلکس‬ ‫شامل‬ ‫تالن‬ ‫محلول‬.
•‫و‬ ‫میگردد‬ ‫احیاء‬ ،‫کننده‬ ‫احیاء‬ ‫قند‬ ‫مجاورت‬ ‫در‬ ‫نقره‬ ‫یون‬ ‫آزمایش‬ ‫این‬ ‫در‬‫به‬
‫آزمایش‬ ‫میکند‬ ‫رسوب‬ ‫لوله‬ ‫جداره‬ ‫در‬ ‫نقره‬ ‫فلز‬ ‫صورت‬‫نقر‬ ‫آیینه‬‫ه‬
•‫فرایند‬:2ml‫نقره‬ ‫نیترات‬5+ %‫سود‬ ‫قطره‬ ‫یک‬10+ %‫آمونیم‬ ‫هیدروکسید‬
(‫کافی‬ ‫اندازه‬ ‫به‬+ )‫زدن‬ ‫هم‬ ‫نظر‬ ‫مورد‬ ‫محلول‬ ‫قطره‬ ‫چند‬
22

23. Tollen’s Test
23
‫مثبت‬ ‫جواب‬‫ها‬ ‫آلدئید‬
‫منفی‬ ‫جواب‬‫ها‬ ‫کتون‬

24. Moore’s Test (Action of Alkali on Sugars)
•‫های‬ ‫قند‬ ‫برای‬ ‫واکنش‬ ‫این‬‫کننده‬ ‫احیاء‬‫است‬.
•‫فرایند‬:1ml‫نمونه‬+1mlNaOH‫غلیظ‬
•‫بوی‬‫کارامل‬‫میدهد‬(.‫آلدئید‬ ‫آزادسازی‬ ‫خاطر‬ ‫به‬)
‫ها‬ ‫قند‬ ‫همه‬‫غیر‬ ‫به‬‫از‬‫ساکارز‬‫این‬ ‫به‬
‫میدهند‬ ‫مثبت‬ ‫جواب‬ ‫آزمایش‬.
24
‫حرارت‬
1min

25. HYDROLYSIS TEST FOR SUCROSE
•‫قند‬ ‫تنها‬ ‫ساکارز‬‫غیر‬‫است‬ ‫کننده‬ ‫احیاء‬.
•‫توسط‬ ‫هیدرولیز‬ ‫با‬ ‫ساکارز‬HCl‫به‬Glu‫و‬Fru‫میشود‬ ‫تبدیل‬.
•‫فرایند‬:4ml‫نمونه‬+‫قطره‬ ‫چند‬HCl
Sucrose+
HCl
Benedict's
test(+)
‫ماری‬ ‫بن‬
15 min
2ml‫میریزی‬ ‫لوله‬ ‫تا‬ ‫دو‬ ‫داخل‬ ‫برمیداریم‬‫م‬
‫را‬ ‫سلیوانف‬ ‫و‬ ‫بندیکت‬ ‫های‬ ‫تست‬ ‫و‬
‫میدهیم‬ ‫انجام‬.
Sucrose+ HCl
Seliwanoff's
test (+)
Sucrose only
Benedict's
test (-)

26. 26

27. 27

28. 28