Capacitación 2008, brucelosis bovina

1. BBrruucceelloossiiss BBoovviinnaa
CCeecciilliiaa CCiisstteerrnnaa
Instituto de Patobiología, Laboratorio
de Brucelosis, INTA Castelar
ccisterna@cnia.inta.gov.ar
Maestría Salud Animal UBA Diciembre 2008

2. BBrruucceelloossiiss BBoovviinnaa
EEnnffeerrmmeeddaadd bbaacctteerriiaannaa,, ddee ccuurrssoo aagguuddoo ccoonn
eevvoolluucciióónn aa llaa ccrroonniicciiddaadd,, ccoonn aaffeecccciióónn ddee
mmúúllttiipplleess óórrggaannooss
AAggeennttee eettiioollóóggiiccoo:: BBrruucceellllaa aabboorrttuuss,, bbiioottiippooss ((11
aall 99)) ddee llooss ccuuaalleess ssee ddeessccrriibbiieerroonn eenn llaa
AArrggeennttiinnaa eell 11 yy 22..
EEss uunnaa ddee llaass zzoooonnoossiiss ddee mmaayyoorr ddiiffuussiióónn eenn eell
mmuunnddoo eenn sseerreess hhuummaannooss yy aanniimmaalleess
ddoommeessttiiccaaddooss
GGrraann rreeppeerrccuussiióónn mmuunnddiiaall,, ppoorr aaffeeccttaarr llaa ssaalluudd
ppúúbblliiccaa yy llaa eeccoonnoommííaa ggaannaaddeerraa ggeenneerraannddoo
ppéérrddiiddaass eeccoonnóómmiiccaass ddee iimmppoorrttaanncciiaa

3. VVííaa ddee eennttrraaddaa
LLaa vvííaa nnaattuurraall ddee iinnffeecccciióónn eess llaa
iinnggeessttiióónn ddee BBrruucceellllaa aabboorrttuuss qquuee
hhaa ssiiddoo eelliimmiinnaaddaa ppoorr vvaaccaass
iinnffeeccttaaddaass
LLaa ffuueennttee ddee ttrraannssmmiissiióónn ssoonn llooss
aanniimmaalleess qquuee eexxccrreettaann eell
mmiiccrroooorrggaanniissmmoo ((ppaarrttoo//aabboorrttoo))..

4. SSuucceessooss qquuee ooccuurrrreenn lluueeggoo ddee ssuu
eennttrraaddaa aall oorrggaanniissmmoo
FFaaggoocciittoossiiss ppoorr llooss PPMMNN yy mmaaccrróóffaaggooss
((iinnmmuunniiddaadd iinnnnaattaa))..
SSii nnoo ssoonn eelliimmiinnaaddaass lllleeggaann ppoorr vvííaa lliinnffááttiiccaa aa llooss
ggaanngglliiooss rreeggiioonnaalleess ppuuddiieennddoo ddeessddee aallllíí iinnvvaaddiirr
eell ttoorrrreennttee ssaanngguuíínneeoo,, ddoonnddee ssoonn ffaaggoocciittaaddaass
ppoorr llooss PPMMNN yy mmaaccrróóffaaggooss cciirrccuullaanntteess..
yy ttrraannssppoorrttaaddaass,, aa llooss ddiivveerrssooss óórrggaannooss ddoonnddee
ppuueeddeenn ssoobbrreevviivviirr yy mmuullttiipplliiccaarrssee ddeennttrroo ddee llaass
vvaaccuuoollaass ddee llooss ffaaggoocciittooss cciirrccuullaanntteess yy ttiissuullaarreess..

5. FFaaccttoorreess ddee ppaattooggeenniicciiddaadd ddeell aaggeennttee
EEnnzziimmaass aannttiiooxxiiddaanntteess.. SSuuppeerróóxxiiddoo ddiissmmuuttaassaa ((SSOODD)) ccaattaalliizzaa llaa
ddiissmmuuttaacciióónn ddee ssuuppeerróóxxiiddoo eenn ooxxííggeennoo yy ppeerróóxxiiddoo ddee hhiiddrróóggeennoo.. PPrrootteeggee aa
llaa ccéélluullaa ddee llaass rreeaacccciioonneess ddaaññiinnaass ddeell ssuuppeerróóxxiiddoo..
PPrroodduucccciióónn ddee GGMMPP ((gguuaannoossiinnaa 55´mmoonnooffoossffaattoo)) yy aaddeenniinnaa,, qquuee iinnhhiibbeenn llaa
ffuussiióónn ffaaggoossoommaa--lliissoossoommaa,, llaa ddeessggrraannuullaacciióónn,, llaa aaccttiivvaacciióónn ddeell ssiisstteemmaa
mmiieellooppeerrooxxiiddaassaa--hhaalluurroo yy llaa pprroodduucccciióónn ddeell TTNNFF--αα..
EEnn ccéélluullaass ffaaggooccííttiiccaass nnoo pprrooffeessiioonnaalleess,, BBrruucceellllaa iinntteerraacccciioonnaa ccoonn
eennddoossoommaass tteemmpprraannooss,, ssee ddeessvvííaa ddee llooss ccoommppaarrttiimmeennttooss eennddooccííttiiccooss
ttaarrddííooss yy eexxpplloottaa ttrraannssiittoorriiaammeennttee llaa vvííaa aauuttooffáággiiccaa ddee llaa ccéélluullaa hhuuééssppeedd
ppaarraa ppoosstteerriioorrmmeennttee aalloojjaarrssee eenn eell rreettííccuulloo eennddoopplláássmmiiccoo ddoonnddee ccoommiieennzzaa
llaa eettaappaa ddee rreepplliiccaacciióónn eexxppoonneenncciiaall..
EEnn eell ccaassoo ddee llaa iinntteerrnnaalliizzaacciióónn eenn ffaaggoocciittooss pprrooffeessiioonnaalleess,, qquuee ppoosseeeenn uunnaa
vvííaa eennddooccííttiiccaa mmuucchhoo mmááss aaccttiivvaa,, eell rreettrraassoo ddee llaa ffuussiióónn ccoonn lliissoossoommaass nnoo
sseerrííaa ssuuffiicciieennttee ppaarraa eevviittaarr llaa ffuussiióónn ccoonn ccoommppaarrttiimmeennttooss ttaarrddííooss ppoorr lloo qquuee
ssee ffoorrmmaa eell ffaaggoolliissoossoommaa yy BBrruucceellllaa eess ccaappaazz ddee ssoobbrreevviivviirr eenn ééll..

6. Electron micrograph of a portion
of a macrophage infected with
Brucella abortus.
Bacteria are dispersed throughout
the cytoplasm in membrane bound
vacuoles. In the lower right, a section
of the macrophage nucleus is seen.
Tráfico iinnttrraacceelluullaarr ddee BBrruucceellllaa eenn HHEELLAA

7. Massive pprroolliiffeerraattiioonn ooff BBrruucceellllaa iinn aa
bboovviinnee mmaaccrroopphhaaggee

8. MMeeccaanniissmmooss ddee ddeeffeennssaa yy MMeeccaanniissmmooss ddee
eevvaassiióónn ddeell aaggeennttee aa llaass ddeeffeennssaass ddeell oorrggaanniissmmoo
LLooss mmeeccaanniissmmooss aaccttiivvaaddooss ppaarraa iinnhhiibbiirr llaa mmuullttiipplliiccaacciióónn
ddee BBrruucceellllaa oo ddeessttrruuiirrllaa iinncclluuyyeenn llaa eessttiimmuullaacciióónn ddeell
eessttaalllliiddoo rreessppiirraattoorriioo yy llaa pprroodduucccciióónn ddee rraaddiiccaalleess lliibbrreess
ddeell ooxxííggeennoo eenn llooss PPMMNN..
BBrruucceellllaa aabboorrttuuss ppuueeddee sseerr ddeessttrruuiiddaa ppoorr eell
ccoommpplleemmeennttoo eenn aauusseenncciiaa ddee AAcc eessppeeccííffiiccooss,, oo ppoorr
ssuueerroo oobbtteenniiddoo eenn eettaappaass tteemmpprraannaass ddee llaa iinnffeecccciióónn.. SSee
ddeetteerrmmiinnóó qquuee llaass vvííaass ddee aaccttiivvaacciióónn ddeell ccoommpplleemmeennttoo
iinnvvoolluuccrraaddaass eenn llaa lliissiiss ddee BBrruucceellllaa ffuueerroonn llaa vvííaa cclláássiiccaa yy
llaa ddee llaass lleeccttiinnaass,, eessttaa úúllttiimmaa mmeeddiiaaddaa ppoorr llaa pprrootteeíínnaa
ffiijjaaddoorraa ddee mmaannoossaa ((MMBBPP))..

9. MMeeccaanniissmmooss ddee llaa iinnmmuunniiddaadd
aaddaappttaattiivvaa
LLaa rreessppuueessttaa aaddaappttaattiivvaa ccoonnttrraa BBrruucceellllaa
iinnvvoolluuccrraa ttrreess mmeeccaanniissmmooss pprriinncciippaalleess,, qquuee
aaccttúúaann eenn ddiiffeerreenntteess eettaappaass ddee llaa iinnffeecccciióónn::
LLaa ggeenneerraacciióónn ddee uunnaa rreessppuueessttaa hhuummoorraall ccoonn
pprroodduucccciióónn ddee AAcc..
LLaa aaccttiivvaacciióónn ddee llaa ffuunncciióónn bbaacctteerriicciiddaa ddee llooss
mmaaccrróóffaaggooss ppoorr aacccciióónn ddeell IIFFNN--γγ pprroodduucciiddoo
ppoorr ccéélluullaass TT CCDD44++ yy CCDD88++ yy
LLaa lliissiiss ddee ccéélluullaass iinnffeeccttaaddaass ppoorr LLTT CCDD88++..

10. EElliimmiinnaacciióónn
El síntoma mas importante en brucelosis bovina
es el aborto tardío.
Ell aabboorrttoo oo eell ppaarrttoo ddee uunn tteerrnneerroo vviiaabbllee
ccoonnttaammiinnaa llaass ppaassttuurraass yy eell aagguuaa ddee bbeebbiiddaa yy
eessttaa eess llaa ffuueennttee ddee iinnffeecccciióónn ppaarraa eell ggaannaaddoo yy
eell hhoommbbrree.. LLaa ccaannttiiddaadd ddee bbrruucceellaass eelliimmiinnaaddaass
eess vvaarriiaabbllee yy ppuueeddee aallccaannzzaarr hhaassttaa 11xx11001144//ggrraammoo
ddee ppllaacceennttaa.. PPuede comenzar una semana
antes del parto/aborto hasta 45-60 días
posteriores al mismo.

11. MMooddeelloo ddee ttrrááffiiccoo ddeennttrroo ddee
MMaaccrróóffaaggooss

12. Patogénesis Brucelosis
Animal no preñado
Libres Ganglios
Brucella Mucosa oral regionales
En fagocitos
Brucella Destruidas por
PMN y MO
Órganos SRE
(Bazo, Hígado,
Médula ósea)
Adaptado Samartino Luis

13. Patogénesis Brucelosis
Animal preñado
Vía hematógena Útero
Trofoblastos eritrofagocíticos del placentoma (Hierro)
Infección contigua
Trofoblastos de la membrana corioalantoidea
Ulceración y ruptura de la membrana
Vía hematógena Feto y placentoma
El endometrio no es afectado por brucella Adaptado Samartino Luis

14. SSiiggnnooss ccllíínniiccooss
AAbboorrttoo ttaarrddííoo..
RReetteenncciióónn ddee ppllaacceennttaa..
OOccaassiioonnaallmmeennttee oorrqquuiittiiss yy
eeppiiddiiddiimmiittiiss uunniillaatteerraall ccoonn
ttuummeeffaacccciióónn aagguuddaa yy ddoolloorroossaa..

15. LLeessiioonneess MMaaccrroossccóóppiiccaass
EEnn llaa ppllaacceennttaa ssee oobbsseerrvvaa:: ppllaacceennttiittiiss
nneeccrróóttiiccaa qquuee iinnvvoolluuccrraa llooss ccoottiilleeddoonneess yy
eell tteejjiiddoo iinntteerrccoottiilleeddoonnaarriioo,, eessppeecciiaallmmeennttee
eenn pprrooxxiimmiiddaadd ddee llooss ccoottiilleeddoonneess.. EEll tteejjiiddoo
iinntteerrccoottiilleeddoonnaarriioo ((ccuuaannddoo llaa ppllaacceennttiittiiss eess
sseevveerraa)) ppuueeddee pprreesseennttaarr eeddeemmaa yy uunn
eexxuuddaaddoo eessppeessoo aammaarriilllleennttoo..

16. PPllaacceennttaa:: lleessiióónn mmaaccrroossccóóppiiccaa
Necrosis en placentomas - placenta de bovino

17. LLeessiioonneess MMiiccrroossccóóppiiccaass
NNeeccrroossiiss yy uullcceerraacciióónn ddeell eeppiitteelliioo ccoorriióónniiccoo eenn llaa
mmeemmbbrraannaa ccoorriiooaallaannttooiiddeeaa,, qquuee ssee eennccuueennttrraa
ccuubbiieerrttoo ppoorr uunn eexxuuddaaddoo ccoommppuueessttoo ppoorr
ttrrooffoobbllaassttooss ddeessccaammaaddooss ((qquuee ccoonnttiieenneenn
bbaacctteerriiaass)),, ddeettrriittuuss cceelluullaarreess,, bbaacctteerriiaass lliibbrreess,,
mmaaccrróóffaaggooss yy nneeuuttrróóffiillooss..
LLeessiioonneess eenn llooss ppllaacceennttoommaass,, ddoonnddee ssee ppuueeddeenn
oobbsseerrvvaarr bbaacctteerriiaass eenn eell tteejjiiddoo ccoonneeccttiivvoo ddee llaass
vveelllloossiiddaaddeess ccoorriióónniiccaass,, llaass ccuuaalleess ppuueeddeenn eessttaarr
rrooddeeaaddaass ppoorr eeppiitteelliioo ttrrooffoobblláássttiiccoo iinnttaaccttoo oo ppoorr
nneeuuttrróóffiillooss yy ddeettrriittuuss cceelluullaarreess..

18. Lesión mmiiccrroossccóóppiiccaa eenn ppllaacceennttaa
Chorioallantoic membrane. Focal necrotizing
panarteritis in the wall of an arterial vessel and
the severe inflammation in surrounding
connective tissue. Hyalinous thrombus is
present within the lumen. HE x 200.
Chorioallantoic membran. Stained brucella
antigen in trophoblasts (arrow), phagocytes and
interstitium.
PATHOLOGICAL AND IMMUNOPEROXIDASE STUDIES OF THE PLACENTAL LESIONS OF BOVINE
BRUCELLOSIS O. Yazicioglu, R. Haziroglu

19. LLeessiioonneess eenn FFeettoo
NNoo ssoonn ppaattooggnnoommóónniiccaass
EEddeemmaa ssuubbccuuttáánneeoo ddiiffuussoo rroojjiizzoo yy ppeerriittoonniittiiss
ffiibbrriinnoossaa ddiiffuussaa,, bbrroonnccoonneeuummoonnííaa ssuuppuurraattiivvaa,,
ppeerrii hheeppaattiittiiss ffiibbrriinnoossaa,, hheeppaattiittiiss ppeerrii vvaassccuullaarr
mmoonnoonnuucclleeaarr yy mmúúllttiipplleess ffooccooss ddee nneeccrroossiiss eenn
hhííggaaddoo,, rriiññóónn yy ggaanngglliiooss lliinnffááttiiccooss.. EEnn vvaarriiooss
óórrggaannooss ffeettaalleess ssee oobbsseerrvvaann lleessiioonneess
ggrraannuulloommaattoossaass yy nneeccrroossiiss ffooccaall,, aassíí ccoommoo
lleeppttoommeenniinnggiittiiss ggrraannuulloommaattoossaa..

20. FFeettooss aabboorrttaaddooss

21. LLeessiioonneess eenn MMaacchhooss
LLaa lleessiióónn mmaaccrroossccóóppiiccaa eess uunnaa oorrqquuiittiiss yy
eeppiiddiiddiimmiittiiss ffiibbrriinnooppuurruulleennttaa..
MMiiccrroossccóóppiiccaammeennttee,, ssee oobbsseerrvvaa uunnaa
lleessiióónn iinnffllaammaattoorriiaa ccoonn pprreesseenncciiaa ddee ffooccooss
ddee nneeccrroossiiss,, ppeeqquueeññooss ggrraannuulloommaass,,
aattrrooffiiaa ddee eeppiitteelliioo sseemmiinnaall yy eesscclleerroossiiss,, yy
ggrraann ccaannttiiddaadd ddee ppoolliimmoorrffoonnuucclleeaarreess,,
mmaaccrróóffaaggooss ee hhiippeerrppllaassiiaa ddeell tteejjiiddoo
rreettiiccuullaarr..

22. Diagnóstico Serológico de la
Brucelosis
Tamiz o Screening: BPA
Clásicas: Wright
Complementarias: 2-ME, FC
Vigilancia Epidemiológica: Ring Test
(Anillo en leche), ELISA indirecta.
Nuevas técnicas: ELISA, Polarización
fluorescente.

23. Modelo de iinnvveessttiiggaacciióónn ppllaanntteeaaddoo
BBrruucceellllaa aabboorrttuuss ppuueeddee iinnffeeccttaarr ppllaacceennttaass eenn ccuuaallqquuiieerr
eessttaaddííoo ddee llaa ggeessttaacciióónn..
GGrraann ccaappaacciiddaadd ddee rreepplliiccaarrssee ssóólloo eenn llaass ppllaacceennttaass ddee
sseegguunnddoo yy tteerrcceerr ttrriimmeessttrree..
FFaaccttoorreess eennddoocceelluullaarreess eenn ttrrooffoobbllaassttooss ppooddrrííaann
ffaavvoorreecceerr llaa mmuullttiipplliiccaacciióónn ddee BBrruucceellllaa aabboorrttuuss eenn llaass
ppllaacceennttaass qquuee ssuuppeerreenn llaa mmiittaadd ddee llaa pprreeññeezz??????..
PPrrooppuueessttaa:: IIddeennttiiffiiccaarr ddiiffeerreenncciiaass eenn llaa eexxpprreessiióónn ddee
pprrootteeíínnaass eenn llooss tteejjiiddooss ppllaacceennttaarriiooss bboovviinnooss sseeggúúnn ssuu
eessttaaddííoo,, aassíí ccoommoo ttaammbbiiéénn llaa mmuuttaacciióónn ddiirriiggiiddaa aa llooss
ssiittiiooss aaccttiivvooss ddee ddiicchhaass pprrootteeíínnaass ppaarraa ccoommppaarraarr llaa
mmuullttiipplliiccaacciióónn ddee BBrruucceellllaa aabboorrttuuss eenn ttrrooffoobbllaassttooss
mmuuttaaddooss vveerrssuuss ttrrooffoobbllaassttooss nnoorrmmaalleess..

24. MMaatteerriiaalleess yy mmééttooddooss
EExxppllaanntteess ddee mmeemmbbrraannaa ccoorriiooaallaannttooiiddeeaa
((CCAAMMss)) bboovviinnaass pprroocceeddeenntteess ddeell pprriimmeerr yy
tteerrcceerr eessttaaddííoo ddee ggeessttaacciióónn..
RRNNAA ppuurriiffiiccaaddoo ddee CCAAMMss eenn ccuullttiivvoo..
ccDDNNAA aa ppaarrttiirr ddeell RRNNAA ppuurriiffiiccaaddoo
((mmaarrccaaddooss ccoonn fflluuoorreesscceenncciiaa ddee ddiissttiinnttoo
ccoolloorr))
KKiitt ddee mmiiccrrooaarrrraayyss ppaarraa eell ggeennoommaa bboovviinnoo..

25. EEttaappaass::
11.. CCuullttiivvoo ddee EExxppllaanntteess ddee mmeemmbbrraannaa ccoorriiooaallaannttooiiddeeaa ((CCAAMMss))
bboovviinnaass pprroocceeddeenntteess ddeell pprriimmeerr yy tteerrcceerr eessttaaddííoo ddee ggeessttaacciióónn..
22.. OObbtteenncciióónn ddee RRNNAA ddee eessaass ccéélluullaass..
33.. SSíínntteessiiss eell ccDDNNAA mmeeddiiaannttee llaa eennzziimmaa ttrraannssccrriippttaassaa iinnvveerrssaa eell
ccuuaall ssee mmaarrccaarráá ccoonn fflluuoorreesscceenncciiaa ddee ddiissttiinnttoo ccoolloorr ppaarraa ccaaddaa
eessttaaddííoo..
44.. EEnnssaayyoo mmiiccrrooaarrrraayyss:: SSee ccoommppaarraarráá llaa eexxpprreessiióónn ggéénniiccaa eenn llooss
ttrrooffoobbllaassttooss ddee ddiiffeerreennttee eessttaaddííoo ppaarraa ddeetteerrmmiinnaarr ccuuááll oo
ccuuaalleess ssoonn llaass pprrootteeíínnaass qquuee ccaammbbiiaann ssuu ppaattrróónn ddee eexxpprreessiióónn..
55.. DDee eessttaa ffoorrmmaa ssee ppuueeddeenn oobbsseerrvvaarr ggeenneess qquuee ssee aaccttiivvaann oo ssee
rreepprriimmeenn eenn eessaass ccoonnddiicciioonneess..
66.. MMuuttaacciioonneess ddiirriiggiiddaass hhaacciiaa llooss ssiittiiooss aaccttiivvooss ddee ccaaddaa uunnaa ddee
eessttaass pprrootteeíínnaass aa ffiinn ddee eevvaalluuaarr ssuu eeffeeccttoo iinn VViittrroo eenn llaa
iinnffeecccciióónn eexxppeerriimmeennttaall ddee BBrruucceellllaa aabboorrttuuss..

27. EEnnssaayyoo mmiiccrrooaarrrraayyss

28. RReeccrreeoo!!!!!!
GGRRAACCIIAASS PPOORR SSUU AATTEENNCCIIÓÓNN!!!!