Primjena MALDI-TOF u dijagnostici uzročnika zaraznih bolest

1. Upotreba MALDI-TOF u dijagnostici zaraznih bolesti
1. u ovoj prezentaciji su sljedeći radovi korišteni su i ove reference i preporučuju se za dodatne informacije
2. Klinička mikrobiologija kao dobro organiziranom dijagnostičko profesiji je doživjela2. Klinička mikrobiologija kao dobro organiziranom dijagnostičko profesiji je doživjela
potpuna i neočekivana promjena uvođenjem MALDI-TOF MS. Danas se svi slažu da je metoda MALDI-TOF
MS, tehnologija koja je manja od 30 godina, ima revolutionized kliničku mikrobiologiju.
gotovo bakterijske identifikacije cijelo stoljeće je potrebno više od 24 sata, a cijeli proces od uzimanja uzorka od
godine predstaviti na utvrđenje da liječnici trebati 2 ili 3 dana (u nekim slučajevima čak i više). matrica
potpomognuta laserska desorpcija ionizacija vrijeme od leta MS (MALDI-TOF MS) drastično je poboljšala
vremena za identifikaciju pozitivne kulture - potrebno je samo nekoliko minuta. Dakle, cijeli proces znatno
poboljšana. Zajedno s nekim drugim novim metodama, kao što su molekularna tehnologiji vrijeme od uzimanja
uzorka do rezultata dijagnostičkog postupka se skratiti na samo nekoliko sati ili u najgorem slučaju jedan dan.
Uloga masovnih metode spektrometrije nije samo u identifikaciji, ali tipkanje, kao što je prikazano na ovoj
slici.
3. Identifikacija mikroorganizama oslanja na različite načine: konvencionalno
određivanje karakteristika fenotipskih koji uključuje Gram mrlja i morfologiju
kolonija
morfologija, mikroskopski pregled, diferencijalna rast na selektivnim medijima i raznim biokemijskim testovima
primjenom ručnih ili automatiziranih metodama molekularne
dijagnostičke metode, uključujući 16S ribosomna RNA
sekvenciranje i u realnom vremenu PCR detekcija odabranih
gena
Zajednička karakteristika različitih molekularnih metoda je da su komplicirani i skupi
i kao što je navedeno revolucionarnu tehnologiju - MALDI-TOF MS
4. MALDI-TOF MS: Matrix-assisted laser desorpcija ionizacija vremenska masena spektroskopija4. MALDI-TOF MS: Matrix-assisted laser desorpcija ionizacija vremenska masena spektroskopija
- ima mnogo prednostiima mnogo prednosti
- Provedba u kliničku mikrobiologiju laboratoriju je lako
- To je veliki nastup u bakterijske identifikacije s rutinskim uzorcima:
>90% - učinkovit i to je
- Pouzdan postupak za identifikaciju bakterije iz kliničkih uzoraka
- To je Cijenom:
najmanje ¼ cijene konvencionalnih metoda
(€ 2.44 s MALDITOF MS vs € 4,60-13,85 s automatiziranog identificiranja
- To je brzo comaparing konvencionalnim metodama 6 min odnosu sati ili čak
dana na Sam identificaions razini
- A čak se može koristiti u svrhu antimikrobne upravu: zajedno s lokalnim
podaci rezistencija na antibiotike učinkovito optimizirati rano empirijski antibiotsku
terapiju
5. Cijeli tijek MALDI-TOF MS vrlo je jednostavna: s jedne uzorak ploče različitih uzoraka5. Cijeli tijek MALDI-TOF MS vrlo je jednostavna: s jedne uzorak ploče različitih uzoraka
ili više paralelnih izravni taloženja za isti uzorak može se provesti u isto vrijeme. U slučaju ne-valjanih ili
sumnjivih rezultata odvojiti protein ekstrakcija može biti učinjeno.

2. 6. Ukratko, nakon inkubacije, kulturan kolonije se primjenjuju izravno na test ploču , Sljedeći korak je primjenaUkratko, nakon inkubacije, kulturan kolonije se primjenjuju izravno na test ploču , Sljedeći korak je primjenaUkratko, nakon inkubacije, kulturan kolonije se primjenjuju izravno na test ploču , Sljedeći korak je primjena
matrice koja je zasićena otopina niske mase, kiselih organskih spojeva Shuch kao sinapinska kiselina -
uzorci se obloži matrice. Sljedeći korak sušenja. Nakon sušenja, pripremljeni ploča učita u MALDI-TOF MS
analizator sa softverom koji je povezan s sustavom što omogućuje brzu identifikaciju.analizator sa softverom koji je povezan s sustavom što omogućuje brzu identifikaciju.
7. Da je pripremljen uzorak ploče, metalni nosač, nalazi se u instrument i kratak laser7. Da je pripremljen uzorak ploče, metalni nosač, nalazi se u instrument i kratak laser
mahunarke hit analita (smjesa ispitivanog kolonije i kisele matrice). Mala desorbirati i ionizirane molekule
ubrzati proces elektrostatskog polja i besciljno kroz fieldfree tunel dok ne dođu do detektora masenog
spektrometra-a. Molekule različitih masa i
troškovi će „letjeti” na različitim brzinama (otud izraz „vrijeme-of-flight”). Rezultat je spektralni potpis sa
šiljcima u pravilu u rasponu od 000 1000-20, m / z (masa za naboja omjer). Ovaj potpis je tada tražio u
odgovarajuću bazu podataka za identifikaciju organizma na rod ili vrstu razini, u skladu s vrijednostima koje
odredi davatelj baze podataka.
8. Snaga MALDI TOF MS prikazani su u posebnim studijama vrsta koji je dao gotovo 100%8. Snaga MALDI TOF MS prikazani su u posebnim studijama vrsta koji je dao gotovo 100%
ispravni identifikacije brojnih bakterijskih vrsta kao što je Neisseria, Clostridia, Hycobacteria Nonfermenters,
Salmonella i td gljivice (96% od 250 kliničkih izolata Candida), tako da se teoretski nema ograničenja
identifikacijskom sposobnost iako u nekim slučajevima, kao što su filamentozne gljive i dermatofita zbog svojih
jedinstvenih karakteristika rasta i morfologije daljnja poboljšanja u bazama podataka i pre-analitičkim protokolima su
potrebne
9. Još superiorna primjena MALDI TOF MS nasuprot uobičajenom tehnikom je mikrobiologiju9. Još superiorna primjena MALDI TOF MS nasuprot uobičajenom tehnikom je mikrobiologiju
izravno identificiranje patogena u samom uzorku bez koraka za kulturu koji je dao 66-90% ispravne
identifikacije. To čini MALDI TOF MS obećavajući alat u rani početak empirijskih antimikrobne terapije Zbogidentifikacije. To čini MALDI TOF MS obećavajući alat u rani početak empirijskih antimikrobne terapije Zbogidentifikacije. To čini MALDI TOF MS obećavajući alat u rani početak empirijskih antimikrobne terapije Zbog
daljnjeg skraćivanja identifikacije vremena.
10. Najslabiji dio ove tehnologije je testiranje osjetljivosti na antibiotike koja je u razvoju10. Najslabiji dio ove tehnologije je testiranje osjetljivosti na antibiotike koja je u razvoju
a tu je i uspjesi u sposobnosti razlikovanja meticilin-osjetljiv S. aureus od methicillinresistant S. aureusa tu je i uspjesi u sposobnosti razlikovanja meticilin-osjetljiv S. aureus od methicillinresistant S. aureusa tu je i uspjesi u sposobnosti razlikovanja meticilin-osjetljiv S. aureus od methicillinresistant S. aureusa tu je i uspjesi u sposobnosti razlikovanja meticilin-osjetljiv S. aureus od methicillinresistant S. aureus
Detekcija raznih bakterijskih ciljanja antimikrobnih molekula (kao što je b-laktamaza, methylases i crpka za
istjecanje) i otkrivanja nekih drugih glavnih čimbenika virulencije kao Panton-Valentine leukocidin s
osjetljivošću od 100% i specifičnosti 90,6%
11. Također, još jedna primjena MALDI TOF MS tehnologije u genotipa - MALDI-RE11. Također, još jedna primjena MALDI TOF MS tehnologije u genotipa - MALDI-RE
(SEQUENOM) i elektrosprej ionizacija masena spektrometrija (ESI-MS), MS metode se koriste za analizu pojačanje
produkata PCR, i omogućuje precizno tipizaciju bakterija, može usporediti s drugim molekulske postupkom kao što je
kucanje multilocus sekvenci (MLST)
12. Ipak, ova tehnologija otkriva mnoge stvari i otvoriti vidike i za vrijeme njegova12. Ipak, ova tehnologija otkriva mnoge stvari i otvoriti vidike i za vrijeme njegova
Integracija u rutinskoj praksi bilo je različitih trenutaka od visokih očekivanja do pada, ali postoji savršeno jasno
da MALDI TOF MS je revolucija u kliničku mikrobiologiju laboratoriju, tehnologija današnjice koji pruža brz i
brzu identifikaciju gotovo svim mikrobnih patogena, to je jednostavan za korištenje i način niske cijene.