Albert Boronat Toscano IX Fòrum TRiCS C Sant Pau Apòstol Tarragona

1. DYNAMIC MITHOCONDRIA
ESTUDI EN LLEVATS

2. INTRODUCCIÓ
• Què és un llevat?
• El seu metabolisme:
- Fermentació
- Respiració
- Efecte Crabtree

3. OBJECTIUS DE LA INVESTIGACIÓ
• Demostrar que el metabolisme energètic dels llevats influeix en els
canvis de forma i/o en la distribució dels seus orgànuls, en aquest cas el
seu mitocondrioma.
• Verificar l’existència de l’efecte Crabtree.

4. PART PRÀCTICA:
Per què s’ha treballat amb la cèl·lula de llevat Saccharomyces cerevisiae?
• És fàcilment manipulable en el laboratori.
• És un organisme no patogen i pot ser manipulat sense precaucions especials.
• Creix ràpidament en medis de cultiu relativament poc complexos i econòmics.
• Comparteix molts dels processos cel·lulars d’organismes més complexos.

5. PART PRÀCTICA:
PROTOCOL DE L’EXPERIMENT
Què es va fer ?
• Es va estudiar el comportament de les cèl.lules de llevat en diferents
condicions (concentració de sucres i presència d’oxigen). Per tal de
verificar o falsejar les hipótesis planteadas.
Com es va fer?
• Rehidratació dels llevats i preparació dels quatre cultius en les diferents
condicons.
• Extracció, tinció i observació de les mostres.

6. • Es pesen els llevats (secs).
• Es rehidraten els llevats amb aigua destil·lada.
• Es posen a la incubadora a 37 ̊̊C durant 30 minuts.

7. • Es preparen els quatre cultius en les diferents condicions.
• S'inoculen els llevats rehidratats en els diferents cultius.

8. • Taula dels diferents cultius:
CULTIU [ ] GLUCOSA OXIGEN
1r Alta No
2n Baixa Sí
3r Baixa No
4t Alta Sí

9. • Per últim es disposen els cultius en la incubadora de nou a una
temperatura de 28 ̊̊C.
0
1
2
3
4
5
6
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
[]dellevatsenelmedi
Temps (h)
g llevats/ ml solució
[ ] llevats en el medi

10. • S’extreuen mostres de cada cultiu.
• Es preparen les mostres per tal d’observar-les amb més precisió.
• Es tenyeixen les mostres amb el tint Fluorocrom DIOC.
• S’observen les mostres al microscopi de fluorescència.

11. • En el primer cultiu, els llevats es troben amb una alta concentració de
glucosa i sense oxigen.
OBSERVACIÓ EN EL MICROSCOPI DE FLUORESCÈNCIA

12. • En el segon cultiu, les cèl·lules es troben amb una baixa concentració
de glucosa i amb la presència d’oxigen.

13. • En el tercer cultiu, les cèl·lules de llevats es troben amb una baixa
concentració de glucosa i sense presència d’oxigen.

14. • En el quart cultiu, les cèl·lules dels llevats estan amb una alta
concentració de glucosa i amb la presència d’oxigen.

15. CONCLUSIONS
 El metabolisme energètic dels llevats condiciona la disposició del
mitocondrioma en el citoplasma.
 S’ha comprovat que existeix l’efecte Crabtree en les cèl·lules que, tot i
que tenen presència d’oxigen, estan en un medi amb una alta
concentració de sucres.

16. GRÀCIES PER LA SEVAATENCIÓ.