Marina García Carmona IX Fòrum TRiCS Ins Narcís Oller Valls

1. Autora: Marina Garcia Carmona
Curs: 2n Batxillerat A
Any: 2014 - 2015
Tutor: Xavier Salat
INSTITUT NARCÍS OLLER

2. INTRODUCCIÓ
CONSIDERACIONS GENERALS SOBRE LES MUTACIONS I LA MUTAGÈNESIS
EXPERIMENTEM AMB MUTAGÈNESIS EN SACCHAROMYCES CERVISAE
MATERIAL
DETERMINEM EL TIPUS DE LLEVAT I EL TEMPS D’EXPOSICIÓ
RESULTATS
SOTMETEM A SACCHAROMYCES CERVISAE A CONDICIONS D’ESTRÈS
RESULTATS
COMPARATIVA ENTRE GRÀFICS
CONCLUSIONS
CONSEQÜÈNCIES I NOVES PREGUNTES

3. JUSTIFICACIÓ DEL TREBALL
PROBLEMA A TRACTAR
Com afectaran els raigs ultraviolats i les successives situacions d’estrés al
creixement dels llevats Saccharomyces cervisae
HIPÒTESIS
OBJECTIU
La comprovació de l’efecte mutagènic mitjançant les radiacions ultraviolades i altres
situacions d’estrès successives sobre els llevats causant-los mutacions de les quals
algunes els poden arribar a causar la mort

4. MUTACIÓ
A L’ATZAR
DIRIGIDA
MUTAGÈNESIS
Induïdes per AGENTS
MUTAGÈNICS
Radiacions
Agents químics

5. SITUACIONS D’ESTRÉS EN EL MEDI DE CULTIU
Processos osmòtics
Temperatura
Absència d’oxigen

6. MATERIAL
Sc1118 ScBY4742 Placa de Petri
Matràs erlenmeyer
Medis YPD
Micropipetes
automàtiques
AiguaBec de Bunsen
Gradeta
Eppendorfs
Nansa de
Digralsky

7. Espectrofotòmetre
Cubeta
Aparell de raigs ultraviolats
Forn de laboratori Estufa de CO2
Roba de seguretat
Comptador automàtic

8. DETERMINEM EL TIPUS DE LLEVAT I EL TEMPS D’EXPOSICIÓ
1.- Esterilitzem
2.- 900mL d’aigua i 100 mL dels llevats a la cubeta. (1/100 -> Dos dilucions)
3.- Espectrofotometria 660 nm (mostra blanca)
4.- 3·106 cèl·lules / mil·lilitre
5.- 5 dilucions -> 300 cèl·lules (eppendorfs)
6.- Raigs ultraviolats
7.- Plaques de Petri

9. RESULTATS
579 514 542 612 641 532 564 581 461 544
0
100
200
300
400
500
600
700
0 0 5 5 10 10 15 15 20 20
Nombredecolòniesperplaca
Minuts d'exposició a raigs ultraviolats
Llevat Sc1118

10. 1.- Esterilitzem
2.- 900mL d’aigua i 100 mL dels llevats a la cubeta. (1/100 -> Dos dilucions)
3.- Espectrofotometria 660 nm (mostra blanca)
4.- 2,2·106 cèl·lules / mil·lilitre
5.- 5 dilucions -> 220 cèl·lules (eppendorfs)
6.- Raigs ultraviolats
7.- Plaques de Petri
693 769 0 0
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
0 0 20 20
Nombredecolòniesperplaca
Minuts d'exposició a raigs ultraviolats
Llevat ScBY4742

11. SOTMETEM A SACCHAROMYCES CERVISAE A CONDICIONS
D’ESTRÈS
Repetim l’anterior
1.- Esterilitzem
2.- 900mL d’aigua i 100 mL dels llevats a la cubeta. (1/100 -> Dos dilucions)
3.- 2,2·106 cèl·lules / mil·lilitre
4.- 5 dilucions -> 220 cèl·lules (eppendorfs)
5.- Raigs ultraviolats
6.- Plaques de Petri
7.- Situacions d'estrès

12. RESULTATS
139 155 116 100 52 55
0
50
100
150
200
0 0 5 5 10 10
Nombredecolòniesperplaca
Temps d'exposició a raigs ultraviolats
ScBY4742 - Control
165 145 86 91 58 48
0
50
100
150
200
0 0 5 5 10 10
Nombredecolòniesperplaca
Temps d'exposició a raigs ultraviolats
ScBY4742 - Temperatura
120 130 101 99 42 39
0
20
40
60
80
100
120
140
0 0 5 5 10 10
Nombredecolòniesperplaca
Temps d'exposició a raigs ultraviolats
ScBY4742 - CO2
84 123 72 81 46
0
20
40
60
80
100
120
140
0 0 5 5 10
Nombredecolòniesperplaca
Temps d'exposició a raigs ultraviolats
ScBY4742 - NaCl
Totes les fotos a 5 minuts
d’exposició a raigs UV

13. 100% 105.58% 101.65% 97.61% 87.77% 100% 73.47% 36.39%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
120%
0 5 10 15 20 BY 0 BY 5 BY 10
Viabilitat
Temps d'exposició a raigs ultraviolats
Comparació Sc1118 i ScBY4742
COMPARATIVA ENTRE GRÀFICS

14. 100% 105% 85% 70% 73% 60% 68% 52% 36% 36% 28% 31%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
120%
Control 0 Tª 0 CO2 0 NaCl 0 Control 5 Tª 5 CO2 5 NaCl 5 Control 10 Tª 10 CO2 10 NaCl 10
Viabilitat
Condicions d'estrés en llevats exposats diferents temps a raigs ultraviolats
Comparació ScBY4742 en diferents situacions d'estrés

15.  La utilització d’un tipus de Saccharomyces cervisae més dèbil permet contemplar
de forma més notable l’efecte de la mutagènesis.
 En els llevats ScBY4742 l’efecte mutagènic és molt notable i com és habitual als 20
minuts s’ha produït una esterilització.
 La situació d’estrès que més afecta als llevats és el medi amb NaCl, ja que fa que
tardin fins a 5 dies a créixer i les poblacions són considerablement més petites.
 La segona situació que més els afecta és l’absència d’oxigen, però tampoc és gaire
rellevant perquè són organismes anaerobis facultatius.
 Sorprenentment, la situació que menys els afecta és la temperatura.

16. Quins gens han estat modificats en les mutacions?
Quins han estat els organismes que han contaminat les plaques?
Quins efectes causaria la modificació del pH?
…