SlideShare a Scribd company logo
1 of 5
Download to read offline
Borrelia ViraStripe® Диагностические регенты для определения IgG
Метод иммуноблотинга (электрофоретическое разделение белков после их гибридизации с антигенами или мечеными атомами по способу вестерн-
блоттинга) для обнаружения IgG-или IgM-антител против разновидностей Borrelia в человеческой сыворотке. Диагностический набор для
определения IgG Borrelia ViraStripe ® произведен согласно руководству 98/79/EG и может быть оценен согласно quot;MiQquot; критериям. Borrelia ViraStripe
® - метод иммуноблоттинга, который использует нативные, очищенные антигены Borrelia afzelii (Pkо), Borrelia burgdorferi sensu stricto и
рекомбинантный ген VIsE. Borrelia ViraStripe ® отвечает качественным стандартам микробиологических-инфектологических методик (27), общим
рекомендациям DIN (Deutsche Industry Norm), устанавливающим двухполосный критерий для положительного результата иммуноблотинга (DIN
58967, часть 40) и DIN 58969-44 специальных требований для определения антител против Borrelia burgdorferi (32).

                                  50 тестов                                                              Номер изделия V-BSSGOK
 Borrelia ViraStripe®
 Диагностический набор для
 определения IgG
 Образец                          20 мкл сыворотки
 Время тестирования               90 минут
 Хранение/Стабильность            около 12 месяцев при 2-8°C
Компоненты комплекта

 50 полосок                       IgG-специфические полоски с антигенами, полоски из                     ( Номер изделия V-BSSGAS)
                                  нитроцеллюлозы с системой контроля и Borrelia-специфичными
                                  антигенами в аналитической секции; код полоски: BG,
                                  пронумерованы от 1 до 50
 9 мл                             Конъюгат щелочной фосфатазы против IgG человека, 10-                   ( Номер изделия V-UVNGKI)
                                  кратный концентрат жидкий
 100 мл                           Буфер для разведения/промывки, 10-кратный концентрат                  ( Номер изделия V-UVNUWP)

 1 пакет                          Порошок для разведения/промывки (5г)                                  ( Номер изделия V-UVNUMP)

 90 мл                            Раствор хромоген/субстрата, готовый к использованию                   ( Номер изделия V-UVNUCS)

 1 экз.                           Инструкция по применению диагностического набора
                                  Borrelia ViraStripe ® для определения IgG

 2 экз.                            Протокол оценки диагностического набора Borrelia
                                   ViraStripe® для определения IgG
Пожалуйста запрашивайте отдельные рабочие инструкции для того, чтобы исследовать образцы спиномозговой жидкости.
Дополнительно доступны
 330 мкл                                                               человеческая сыворотка,          (Номер изделия: V-BSSGPK)
               Borrelia IgG Положительный контроль
                                                                        готовая к использованию
 330 мкл                                                               человеческая сыворотка,          (Номер изделия: V-BSSGCO)
               Borrelia IgG пороговый контроль
                                                                       готовая к использованию
 330 мкл                                                               человеческая сыворотка,          (Номер изделия: V-BSSPNK)
               Borrelia IgG, IgM, IgA отрицательный контроль
                                                                       готовая к использованию
 50 экз.                                                                                                (Номер изделия: V-BSSGEP)
               Borrelia ViraScan ® протоколы оценки для
               автоматической интерпретации с программным
               обеспечением ViraScan ®
Хранение и стабильность реактивов
 Полоски с антигенами: полоски в закрытых упаковках Буфер для разведения/промывки: концентрат и порошок:
 устойчивы до истечения срока годности, если хранятся при устойчив до истечения срока годности, если хранится при
 температуре                  Плотно    закрывайте   пакеты   с температуре 2-8 °C.
                 2-8   °C.
 неиспользованными полосками.                                     Рабочий раствор буфера: 2 недели годен к использованию если
 Конъюгат, 10-кратный концентрат: устойчив до истечения срока     хранится при температуре 2-8 °C.
 годности, если хранится при при температуре 2-8 °C               Рабочий раствор буфера может быть сохранен в необходимых
 Рабочий раствор: использовать немедленно.                        количествах в течение более длительного времени в замороженном
 Раствор хромоген/субстрата: устойчив до истечения срока          состоянии.
 годности, если хранится температуре 2-8 °C. Хранить в темном
 месте!
Подготовка реактивов и исследуемого образца
                                                                  Конъюгат (рабочий раствор):
 Перед использованием доведите все компоненты теста до
                                                                  Растворите необходимое количество 10-кратного концентрата
 комнатной температуры (20-25°C).
                                                                  согласно таблице (1): Раствор всегда готовится свежий во время
                                                                  процедуры промывания (пункт 7 проведения теста).

 Полоски с антигенами:                                              Раствор Хромоген/субстрата: Готовый к использованию.
 Полосы антигена соединены концами для удобства обработки.          Образцы пациента:
 Тщательно отделите требуемое число полосок при помощи              Используйте 20 мкл неразведенной сыворотки на один тест
 пинцета. Касайтесь полосок пинцетом только в области
 маркировки.

 Буфер для разведения/промывки (рабочий раствор):                   Дополнительно доступные контроли:
 Чтобы подготовить рабочий раствор буфера, разведите 10-            Используйте 100 мкл каждого положительного, порогового и
 кратный концентрат в пропорции1:10 дистиллированной водой          отрицательного контроля, в неразведенном виде, на серию тестов.
 (100 мл концентрата + 900 мл дистиллированной воды), добавьте      Использование порогового контроля требуется для каждого
 порошок для разведения/промывки до полного растворения.            испытания выполняемого согласно лабораторным методическим
 Поместите рабочий раствор буфера на 10 - 15 минут на               рекомендациям по качеству (28).
 магнитную мешалку, pH = 7,5 ± 0,1.
Таблица 1: Приготовление конъюгата рабочего раствора
 Число      Разбавитель                                 Конечный
                                Конъюгат - концентрат
 полос   /промывной буфер                                объем
          рабочий раствор
                                         0,15 мл
               1,35 мл                                   1,5 мл
  1                         +
                                       0,30 мл
               2.70 мл                                   3,0 мл
  2                         +
                                       0.45 мл
               4,05 мл                                   4,5 мл
  3                         +
                                       0,60 мл
               5,40 мл                                   6,0 мл
  4                         +
               8,10 мл                 0,75 мл           7,5 мл
  5                         +
               8,10 мл                 0,90 мл           9,0 мл
  6                         +
               9,45 мл                 1,05 мл           10,5 мл
  7                         +
              10,80 мл                 1,20 мл           12.0 мл
  8                         +
              10,80 мл                 1,35 мл           13,5 мл
  9                         +
              13,50 мл                 1,50 мл           13,5 мл
  10                        +
              14,85 м                  1,65 мл           16,5 мл
  11                        +
              16,20 мл                 1,80 мл           18,0 мл
  12                        +
              17,55 мл                 1,95 мл           19,5 мл
  13                        +
              18,90 мл                 2,10 мл           21,0 мл
  14                        +
              20,25 мл                 2,25 мл           22,5 мл
  15                        +
              21,60 мл                 2,40 мл           24,0 мл
  16                        +
              22,95 мл                 2,55 мл           25,5 мл
  17                        +
              24,30 мл                 2,70 мл           27,0 мл
  18                        +
              25,65 мл                 2,85 мл           28,5 мл
  19                        +
              27,00 мл                 3,00 мл           30,0 мл
  20                        +
              28,35 мл                 3,15 мл           31,5 мл
  21                        +
              29,70 мл                 3,30 мл           33,0 мл
  22                        +
              31,05 мл                 3,45 мл           34,5 мл
  23                        +
              32,40 мл                 3,60 мл           36,0 мл
  24                        +
              33,75 мл                 3,75 мл           37,5 мл
  25                        +
              35,10 мл                 3,90 мл           39,0 мл
  26                        +
              36,45 мл                 4,05 мл           40,5 мл
  27                        +
              37,80 мл                 4,20 мл           42,0 мл
  28                        +
              39,15 мл                 4,35 мл           43,5 мл
  29                        +
              40,50 мл                 4,50 мл           45,0 мл
  30                        +
              41,85 мл                 4,65 мл           46,5 мл
  31                        +
              43,20 мл                 4,80 мл           48,0 мл
  32                        +
              44,55 мл                 4,95 мл           49,5 мл
  33                        +
              45,90 мл
  34                        +          5,10ml            51,0ml
              47,25 мл                 5.25 мл           52,5 мл
  35                        +
              48,60 мл                 5,40 мл           54,0 мл
  36                        +
              49.95 мл                 5,55 мл           55,5 мл
  37                        +
              51,30 мл                 5.70 мл           57,0 мл
  38                        +
              52,65 мл                 5,85 мл           58,5 мл
  39                        +
              54,00 мл                 6,00 мл           60,0 мл
  40                        +
              55,35 мл                 6,15 мл           61,5 мл
  41                        +
              56,70 мл                 6,30 мл           63,0 мл
  42                        +
              58,05 мл                 6,45 мл           64,5 мл
  43                        +
              59,40 мл                 6,60 мл           66,0 мл
  44                        +
              60,75 мл                 6,75 мл           67,5 мл
  45                        +
              62,10 мл                 6,90 мл           69,0 мл
  46                        +
              63,45 мл                 7,05 мл           70,5 мл
  47                        +
              64,80 мл                 7,20 мл           72,0 мл
  48                        +
              66,15 мл                 7,35 мл           73,5 мл
  49                        +
              67,50 мл                 7,50 мл           75,0 мл
  50                        +


Проведение теста:
 1. Ополоснуть инкубационную ванну буфером для                      Маркировать подносы несмываемым маркером. Удалять
 разведения/промывки и удалить раствор.                             загрязнения кратким ополаскиванием буфером.
 2. Разместить по одной полоске в каждый канал.                     Разместить полосы в каналы подноса инкубации, одна полоса
                                                                    для каждого образца, соответственно для контроля, номером
                                                                    вверх. Используйте пинцет.

 3. Добавить в каждый канал по 1.5 мл буфера и инкубировать в       Визуально удостоверьтесь, что полосы полностью смочены и
 течение 5 минут при комнатной температуре на шейкере.              не плавают частично на поверхности буфера. Используйте
                                                                    платформу шейкера с частотой колебаний 40 циклов/мин.
 4. Добавить 20 мкл каждого образца пациента или 100 мкл каждого    Пипеткой наносите контроль и образцы непосредственно на
 контроля соответственно                                            номер полоски, в то время как происходят колебания
                                                                    платформы.
 5. Инкубировать при колебаниях в течение 30 минут                  Работайте при комнатной температуре (20 - 25°C).
 6. Декантировать жидкость                                          Полоски прилипают к подносу инкубации. Удалите
                                                                    оставшуюся жидкость тщательным осушением подноса
                                                                    инкубации фильтровальной бумагой.

 7. 3x5 минут промывка: добавьте разбавитель/промывной буфер 1.5    Промойте платформу шейкера. При промывке готовят рабочий
 мл, выдержите 5 мин., декантируйте жидкость полностью.             раствор конъюгата, как описано в таблице растворения
                                                                    конъюгата. Осушите инкубационный поднос фильтровальной
                                                                    бумагой, чтобы удалить оставшуюся жидкость.
 8. Пипеткой добавить 1,5 мл рабочего раствора конъюгата в каждый   Удостоверьтесь, что полоски антигена полностью покрыты
 канал                                                              конъюгатом. Визуально проверьте, что полоски частично не
                                                                    плавают на поверхности буфера.
 9. Инкубировать в течение 15 минут на шейкере, при комнатной       Полоски прилипают к инкубационному подносу. Удалите
 температуре.                                                       оставшуюся жидкость, тщательно осушая инкубационный
                                                                    поднос фильтровальной бумагой.
10.Декантировать конъюгат.                                          Полоски прилипают к инкубационному подносу. Удалите
                                                                     оставшуюся жидкость, тщательно осушая инкубационный
                                                                     поднос фильтровальной бумагой
 11. Повторить шаг 7 - 3 раза.                                       .
 12. Добавить 1,5 мл дистиллированной воды, инкубировать в           Визуально проверьте, что полоски частично не плавают на
 течение 1 минуты на шейкере, при комнатной температуре.             поверхности буфера.
 13. Инкубировать в течение 1 минуты при колебаниях.                 Работайте при комнатной температуре (20 - 25°C).
 14. Декантировать жидкость                                          Полоски прилипают к инкубационному подносу. Тщательно
                                                                     осушите поднос фильтровальной бумагой.
 15. Добавить 1,5 мл раствора хромоген/субстрата.                    Визуально проверьте, что полоски частично не плавают на
                                                                     поверхности раствора хромоген/субстрата.
 16. Инкубировать на шейкере: 5-15 минут                             Остановите реакцию, как только полоса порогового контроля
                                                                     станет ясно видима. Предостережение:
                                                                     избегайте превышения срока инкубации, что ведет к
                                                                     появлению фоновых пятен!
                                                                     Внимание!:Полоса порогового контроля IgG: OspC (25 kD)
 17. Остановить реакцию, декантируя жидкость.                        Удалите остающуюся жидкость, тщательно осушая
                                                                     инкубационный поднос фильтровальной бумагой.
 18. Промыть 3 раза с 1,5 мл дистиллированной воды.                  Вне времени инкубации.
 19. Высушить полоски для интерпретации результатов.                 Удалить полоски из каналов во влажном состоянии, используя
                                                                     пинцет. Разместить влажные полоски на фильтровальной
                                                                     бумаге, высушить на воздухе перед интерпретацией данных.
Принцип теста
 При помощи Borrelia ViraStripe® могут быть определены Borrelia-   Иммуноблот с интегрированной системой контроля:
 специфические антитела в человеческой сыворотке.                  Зеленая разделительная линия делит полоску на секцию контроля
 Специфические антитела связываются с закрепленным на полоске      и секцию анализа. Секция контроля включает контроль сыворотки
 антигеном в течение инкубации с сывороткой. Конъюгат              и три контроля конъюгата (IgG, IgA, IgM). Секция анализа
 щелочной фосфатазы связывается с комплексом антиген-антитело      включает в себя электрофоретические раздельные Borrelia-
 в течение инкубации с конъюгатом. Щелочная фосфатаза              специфические антигены.
 конвертирует хромоген/субстрат и окрашивает комплекс
 антиген-антитело на полоске в фиолетовый цвет. Процедуры
 промывки между инкубацией с сывороткой, конъюгатом - и
 хромоген/субстратом удаляют не прореагировавшие реактивы.

Оценка результатов теста
 1. Подготовить протокол       Регистрируйте данные в протоколе оценки. Приклейте полоски в протокол. Разместите зеленую линию
 оценки:                       разделения точно на напечатанную линию разделения в протоколе.

 2. Действительность теста:    Тест считается действительным если полосы функционального контроля и полосы контроля конъюгата и
                               полосы порогового контроля для каждой полоски четко определяются.
                               В случае, если нет реакции хотя бы одного из этих контролей, тест считается недействительным и должен
                               быть повторен с соблюдением всех необходимых условий, описанных в инструкции.
                               Не оценивайте недействительные полоски.
 3. Классификация образцов     Разместите зеленую линию разделения точно по линии разделения, напечатанной на листе оценки.
 пациентов:                    Оцените полосы на полосках пациента и отметки на листе оценки.
 4. Интерпретация              Пороговый контроль должен использоваться для каждой серии испытаний (28). Интенсивность порогового
 интенсивности полосы с        контроля указывает границу для оценки полосы.
 пороговым контролем:          Полосу на полосе пациента считают значимой, если ее интенсивность равна или выше чем интенсивность
                               порогового контроля. Четкие полосы отмечаются знаком X в протоколе.
                               Для Borrelia ViraStripe ® IgG полоса OspC (25 kD) - пороговая полоса.
                               Полоса не оценивается, если ее интенсивность ниже, чем интенсивность пороговой полосы.
                               Регистрируйте полосы пациента в листе оценки.


 5. Критерии оценки            quot;Если образец реактивных полос соответствует специфическим условиям (...), результат положительный, то
 результатов                   есть положительный результат EIA или другого теста первого шага подтвержден. Если, несмотря на
                               присутствие специфических диагностических полос, критерии положительного результата не выполнены,
                               результат считают сомнительным. В таком случае рекомендуется последующий контроль (...) quot;. (27)

Критерии оценки результатов согласно quot;MiQquot; + VIsE для IgG
Общее примечание: все полосы должны иметь интенсивность по крайней мере равную или выше, чем полоса порогового контроля. (27).
IgG: положителен, если присутствуют более 2-х из следующих полос:
p83, p58, p43, p39, p30, OspC, p21, Osp17 или DbpA, p14, VIsE,
Номенклатура и описание borrelia полос в литературе и quot;MiQquot;
 Номенклатура антигенов,                                                     Комментарии
 согласно:                         Антиген
 литературе, MiQ (27)

                                                                             Антитела против VIsE (Вариабельный главный белок
                              специфичный VIsE (30)
 VIsE
                                                                             (VMP) как в выраженной последовательности) описаны
                                                                             как специфичные. IgG антитела продуцируются уже на
                                                                             ранних стадиях и появляются в течение более поздних
                                                                             стадий инфекции, вызываемой borrelia.
                                                                             Антитела часто появляются спустя 6-12 недель после
                              Высокоспецифичный белок мембранного
 p83
                                                                             инфекции. Они типичны для стадии III, могут также
                              пузырька на поверхности клетки(1, 4, 15, 16)
                                                                             появляться постепенно на стадиях I и II.
                                                                             Белок не охарактеризован. Выделен из 60 kD (Hsp60),
                              специфичный (6)
 p58
                                                                             часто в стадии III.
                                                                             Не охарактеризован. Главным образом, описан для
                                                                             стадии III.
                                                                             Не охарактеризован. Главным образом, описан для
                              специфичный
 P43
                                                                             стадии III.
                                                                             Описаны Перекрестные реактивности с другими
                              относительно специфичный белок жгутиков
 p41
                                                                             спирохетами и жгутиковыми бактериями.
                              (ресничек) (2, 16, 23, 24)
                                                                             Эти антитела обнаруживаются на ранней стадии
                              высокоспецифичный BmpA (Borrelia
 p39
                                                                             болезни у многих пациентов.
                              мембранный белок)(1,16)
                              высокоспецифичный (6)                          В настоящее время мало исследован.
 p30
                                                                             Известны по крайней мере 13 различных
                              высокоспецифичный) (1,8, 13,14,23)
 OspC
                                                                             иммуноспецифических типов OspC.
                                                                             Не охарактеризован в деталях.
                              специфичный (3)
 p21
                                                                             Связан с Decorin на поверхности клетки хозяина.
                              специфичный DbpA. (Decorin связанный
 Osp17
                                                                             Антитела противDbpA описаны как специфические.
                              белок) (29, 30)
                                                                             Проявляются в IgG при артрите и невоборрелиозе.
                                                                             Видоспецифичны.
                                                                             Протеин охарактеризован как специфичный иммуноген
                              Специфичный (31)
 p14
                                                                             от Borrelia afzelii.
Рабочие характеристики Borrelia ViraStripe IgG
Чувствительность:
Чувствительность Borrelia ViraStripe ® оценена с использованием 69 сывороток от пациентов с клинически определенным диагнозом
боррелиоза. Оценивались сыворотки от пациентов с ранней стадией боррелиоза при эритеме мигрирующей, хронической эритеме
мигрирующей и множественной эритеме мигрирующей.
 Чувствительность                              lgG                                        IgM / IgG
 Стадия боррелиоза: эритема мигрирующая        9 (31%)                                    23 (79%)
 (n=29)
 Стадия боррелиоза: эритема хроническая        12 (44 %)                                  21 (78 %)
 мигрирующая (n = 27)
 Стадия боррелиоза: множественная              9 (69 %)                                   12 (92 %)
 эритема мигрирующая (n = 13)
Специфичность:
Сыворотки от 143 доноров из южной Германии были изучены для оценки специфичности Borrelia ViraStrip
 Доноры (n = 143)                                                    140 (95 %)

Диагностическое значение антител против Borreliae:
Диагностическое значение антител против Borreliae:
 1. IgG-антитела появляются в срок от нескольких недель до         4. Иммунная реакция и, следовательно, образец диагностической
 месяцев после инфекции. В ранней стадии инфекции они часто не     полосы, отличаются от пациента пациенту. Общее правило -
 обнаруживаются (23).В случае подозрения на недавнюю               увеличение типов антител и количества специфических полос по
 инфекцию должны быть проверены IgM-и IgA-антитела. В этом         мере продолжительности болезни (1).
 случае повторный образец должен быть проверен некоторое           5. Раннее лечение антибиотиком может подавить развитие
 время спустя. Пациенты во 2-ой или 3-ей стадии болезни обычно     антител (18).
 дают положительный результат анализа на IgG-антитела.             6. Перекрестные реактивности с антигенами Borrelia описаны в
 2. IgM-антитела обычно появляются спустя 2-3 недели с начала      инфекциях, вызываемых трепонемой, лептоспирами и другими
 болезни (23). Титр антител часто снижается в течение от           жгутиковыми бактериями (2, 16, 23). Острая EBV- инфекция
 нескольких недель до месяцев после выздоровления. Также           (Эпштейна-Барра вирус) может вызвать поликлональную
 возможно, что титр антител остается постоянным до нескольких      стимуляцию Borrelia-антител (23). Если IgM антитела против
 лет (11).                                                         белков OspC и 41 kD появляются без клинических признаков
 3. IgA-антитела обнаруживаются у многих пациентов на ранней       боррелиоза, необходимо проверить наличие EBV-инфекции.
 стадии боррелиоза. В некоторых случаях они обнаруживаются до      Перекрестные реактивности также описаны в случаях
 появления IgM-антител.                                            аутоиммунных болезней: рассеянного склероза, бокового
                                                                   амиотрофического склероза, гриппа и сифилиса.
Предупреждения и предосторожности:
1. Все человеческие компоненты сыворотки в наших изделиях             6. Раствор хромоген/субстрата содержит BCIP и нитросиний
были проверены на отсутствие ВИЧ - и HCV-антител и Hbs-               тетразолий. Избегайте контакта с кожей и глазами. В случае
Antigene. Однако все человеческие компоненты диагностического         контакта с кожей и глазами промыть большим количеством воды.
теста, а также образцы пациентов нужно считать потенциально           7. Образцы исследования и все потенциально загрязненные
инфекционными и обращаться с соответствующими                         материалы должны быть дезактивированы, используя
предосторожностями.                                                   установленные лабораторные методы, например 20 минут
2. Не набирать пипетку ртом.                                          автоклавирования при 121,5°C. Жидкие отходы смешать с
3. Носить одноразовые перчатки при работе.                            гипохлоритом натрия в окончательной концентрации 1%-
4. Не есть, не пить и не курить в рабочей зоне.                       гипохлорита натрия. Выдержать 30 минут для окончательной
5. Конъюгат содержит азид натрия 0,1 %, контроли и буфер для          дезинфекции.
разведения/промывки содержат 0,02 % тимеросал: Внимание:
вреден для здоровья. Промыть большим количеством воды после
контакта с кожей или глазами. Ядовит при попадании внутрь! (см.
листы данных о безопасности).


Литература:

1. AGUERO-ROSENFELD М.; Журнал Клинической Микробиологии, 1993; 3090-3095. 2. ALFEN я, Wellensiek H-J;Lab. med., 1994; 12-19.
3. CDC/ASTPHLD., Рекомендации исследовательской группы по болезни Лайма; Дирборн, 1994. 4. DITTON H-J; FEMS Microbiol., 1992;
217-230. 5. DORWARD D Журнал Клинической Микробиологии, 1991; 1162-1170. 6. DRESSLER F; J. Infect.dis., 1993; 392-400. 7.
ENGSTROM S.M., Shoop E, Johnson. Критерии интерпретации иммуноблота для ранней серодиагностики болезни Лайма; Журнал
Клинической Микробиологии, 1995; 419-427. 8. FINGERLE V.Wilske B Журнал Clinica Microbiol., 1995; 1861-1869. 9. GILMORE
РЕЗЕРФОРД, Kappel KJ, Johnson BJB; Журнал Клинической Микробиологии, 1997; 86-91. 10. HAGEDORN H-J, Kraminer-Hagedom A;
Immunblot как подтверждающее испытание при серодиагностике боррелиоза: помощь или помеха?; Medizinaluntersuchungsstelle Herford;
0KCON GmbH. 11. HAMMERS-BERGGREN S; Журнал Клинической Микробиологии, 1994; 1519-1525. 12. HAUSER U, Lehnert Г,
Lobentanzer R, Wilske B; Критерии интерпретации для стандартизированных пятен по методу вестерн-блоттинга для трех европейских
разновидностей Borrelia burgdorferi Sensu Lato; Журнал Клинической Микробиологии, 1997; 1433-1444. 13. JAURIS-HEIPKE S, Wilske B;
Журнал Клинической Микробиологии, 1995; 1860-1866. 14. JAURIS-HEIPKE S; Int. Конференция Lyme Borreliosis, 1994. 15. БЕГСТВО T;
Инфекция и Устойчивость, 1994; 290-298. 16. MA B; Журнал Клинической Микробиологии, 1992; 370-376. 17. МЕЙЕР В, Хорст Х, Muller-
Kunert E, Scheper T, Schlumberger W, Schroder М., Steinhagen K, StockerW; Borrelia burgdorferi sensu stricto и Borrelia garinii вытяжки имеют
почти одинаковую диагностическую потенцию для серологического обнаружения Anti-Borrelia антител по методу вестерн-блоттинга в
группе пациентов из Нижней Саксонии; Euroimmun. 18. PREAC-MURSIC V; Infect., 1989; 355-359. 19. SCHWAN TG; Журнал
Клинической Микробиологии, 1993; 3096-3108. 20. TUOMI; Журнал Клинической Микробиологии, 1995; 1889-1996. 21. WILSKE B,
Hauser B, Lehnert Г, Jauris-Heipke S; Геновиды и их влияние на результаты иммуноблота; Wien Клин Wochenschr, 1998; 882-885. 22.
WILSKE B, Jauris-Heipke S, Lobentanzer R, Pradel я, Preac-Mursic V, Rossler D, Soutschek E, Johnson R C; Фенотипичный анализ внешнего
поверхностного белка C (OspC) Borrelia burgdorferi Sensu Lato моноклональными антителами: отношения к геновиду и OspA серотипу;
Журнал Клинической Микробиологии, 1995; 103-109. 23. WILSKE B Diagnostic und Labour, 1990; 24. 24. ZOLLER L; Журнал Клинической
Микробиологии, 1991; 174-182. 25. HAUSER, U., Г. Lehnert, и B. Wilske, Журнал Клинической Микробиологии, 1999; 2241-2247. 26.
JAURIS-HEIPKE, s. Rossle, B.,Wanner, G., и Wilske, B., Osp 17, Новый иммунодоминантный внешний поверхностный белок Borrelia afzelii:
рекомбинант Escherichia coli и его использование как диагностического антигена для серодиагоностики болезни Лайма. Med. Microbiol.
Immunol (Berl), 1999, 187 (4): 213-219. 27. WILSKE B., Zoller L, Brade V., Eiffert H., Goble U.B., Stanek Г, und Pfister H.-W., MiQ:
Qualitatsstandards в der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik 12-2000: Lyme-Borreliose, Urban и FISCHER, 2000. 28. RILI-BAK: Bak-
Richtlinie zur Qualitatssicherung quantitativer laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen, (1.1.2002), www.bundesaerztekammer.de
<http://www.bundesaerztekammer.de>. 29. HEIKKILA, T., Seppala, я., Saxen, H., Panelius, J., Yrjanainen, H., и Lahdenne,
P.:Видоспецифическая серодиагностика артрита Лайма и невроборрелиоза, вызываемых Borrelia sensu stricto, B. afzelii и B. garinii,
используя Decorin

More Related Content

What's hot

02 Citrus Systems S Pb
02 Citrus Systems S Pb02 Citrus Systems S Pb
02 Citrus Systems S Pb
Liudmila Li
 
как да направим компост
как да направим компосткак да направим компост
как да направим компост
Fondation Paideia
 
жIнки вченI
жIнки вченIжIнки вченI
жIнки вченI
Paul
 
12. бюллетень верховного суда 2008
12. бюллетень верховного суда 200812. бюллетень верховного суда 2008
12. бюллетень верховного суда 2008
Alexander Kravchenko
 
Организация навигации в интерфейсах веб-сайтов: 5 принципов
Организация навигации в интерфейсах веб-сайтов: 5 принциповОрганизация навигации в интерфейсах веб-сайтов: 5 принципов
Организация навигации в интерфейсах веб-сайтов: 5 принципов
Denis Beskov
 

What's hot (20)

проект Intway Sport
проект Intway Sportпроект Intway Sport
проект Intway Sport
 
Bu3 Pdf
Bu3 PdfBu3 Pdf
Bu3 Pdf
 
SOA and RFID
SOA and RFIDSOA and RFID
SOA and RFID
 
Российский IT-Foresight
Российский IT-ForesightРоссийский IT-Foresight
Российский IT-Foresight
 
Brand Resources
Brand ResourcesBrand Resources
Brand Resources
 
02 Citrus Systems S Pb
02 Citrus Systems S Pb02 Citrus Systems S Pb
02 Citrus Systems S Pb
 
Сущность и создание общефирменной стратегии
Сущность и создание общефирменной стратегииСущность и создание общефирменной стратегии
Сущность и создание общефирменной стратегии
 
A BRIEF ESSAY ON THE HISTORY OF CREATING A MICROSCOPE
A BRIEF ESSAY ON THE HISTORY OF CREATING A MICROSCOPEA BRIEF ESSAY ON THE HISTORY OF CREATING A MICROSCOPE
A BRIEF ESSAY ON THE HISTORY OF CREATING A MICROSCOPE
 
как да направим компост
как да направим компосткак да направим компост
как да направим компост
 
жIнки вченI
жIнки вченIжIнки вченI
жIнки вченI
 
Coca-Cola_Студенческая практика_Лето 2009
Coca-Cola_Студенческая практика_Лето 2009Coca-Cola_Студенческая практика_Лето 2009
Coca-Cola_Студенческая практика_Лето 2009
 
Программа лояльности
Программа лояльностиПрограмма лояльности
Программа лояльности
 
Design Matters
Design MattersDesign Matters
Design Matters
 
Desert
DesertDesert
Desert
 
методика оценки деятельности органов исполнительной власти субъектов рф
методика оценки деятельности органов исполнительной власти субъектов рфметодика оценки деятельности органов исполнительной власти субъектов рф
методика оценки деятельности органов исполнительной власти субъектов рф
 
12. бюллетень верховного суда 2008
12. бюллетень верховного суда 200812. бюллетень верховного суда 2008
12. бюллетень верховного суда 2008
 
Установки по приготовлению антисептиков и других дезинфекторов
Установки по приготовлению антисептиков и других дезинфекторовУстановки по приготовлению антисептиков и других дезинфекторов
Установки по приготовлению антисептиков и других дезинфекторов
 
E Gov Indicators Regions Metodika V1
E Gov Indicators Regions Metodika V1E Gov Indicators Regions Metodika V1
E Gov Indicators Regions Metodika V1
 
123
123123
123
 
Организация навигации в интерфейсах веб-сайтов: 5 принципов
Организация навигации в интерфейсах веб-сайтов: 5 принциповОрганизация навигации в интерфейсах веб-сайтов: 5 принципов
Организация навигации в интерфейсах веб-сайтов: 5 принципов
 

More from anzor

ДУХОВНАЯ ЖИЗНЬ РОССИИ: ИМЕНА, ИДЕИ, ЛИЦА
ДУХОВНАЯ ЖИЗНЬ РОССИИ: ИМЕНА, ИДЕИ, ЛИЦАДУХОВНАЯ ЖИЗНЬ РОССИИ: ИМЕНА, ИДЕИ, ЛИЦА
ДУХОВНАЯ ЖИЗНЬ РОССИИ: ИМЕНА, ИДЕИ, ЛИЦА
anzor
 
Инструкция по работе с сайтом v2me.ru
Инструкция по работе с сайтом v2me.ruИнструкция по работе с сайтом v2me.ru
Инструкция по работе с сайтом v2me.ru
anzor
 
Прайс-лист
Прайс-листПрайс-лист
Прайс-лист
anzor
 
Ebv Vira Stripe Lg G, Ig M
Ebv Vira Stripe  Lg G, Ig MEbv Vira Stripe  Lg G, Ig M
Ebv Vira Stripe Lg G, Ig M
anzor
 
Price
PricePrice
Price
anzor
 
Svid
SvidSvid
Svid
anzor
 
Свидетельства
СвидетельстваСвидетельства
Свидетельства
anzor
 
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig ABordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
anzor
 
Yersinia Vira Blot ® Lg G, Ig A
Yersinia Vira Blot ® Lg G, Ig AYersinia Vira Blot ® Lg G, Ig A
Yersinia Vira Blot ® Lg G, Ig A
anzor
 
Liver Vira Stripe Ig G
Liver Vira Stripe  Ig GLiver Vira Stripe  Ig G
Liver Vira Stripe Ig G
anzor
 
Ebv Vira Stripe Lg G, Ig M
Ebv Vira Stripe  Lg G, Ig MEbv Vira Stripe  Lg G, Ig M
Ebv Vira Stripe Lg G, Ig M
anzor
 
Ena Vira Stripe® Ig G
Ena Vira Stripe® Ig GEna Vira Stripe® Ig G
Ena Vira Stripe® Ig G
anzor
 
Helicobacter Pylori Vira Blot® Ig G, Ig A
Helicobacter Pylori Vira Blot®  Ig G, Ig AHelicobacter Pylori Vira Blot®  Ig G, Ig A
Helicobacter Pylori Vira Blot® Ig G, Ig A
anzor
 
Borrelia Vira Stripe® Ig M
Borrelia Vira Stripe®  Ig MBorrelia Vira Stripe®  Ig M
Borrelia Vira Stripe® Ig M
anzor
 
Borrelia Virastripe Ig G
Borrelia Virastripe Ig GBorrelia Virastripe Ig G
Borrelia Virastripe Ig G
anzor
 
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig ABordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
anzor
 

More from anzor (17)

ДУХОВНАЯ ЖИЗНЬ РОССИИ: ИМЕНА, ИДЕИ, ЛИЦА
ДУХОВНАЯ ЖИЗНЬ РОССИИ: ИМЕНА, ИДЕИ, ЛИЦАДУХОВНАЯ ЖИЗНЬ РОССИИ: ИМЕНА, ИДЕИ, ЛИЦА
ДУХОВНАЯ ЖИЗНЬ РОССИИ: ИМЕНА, ИДЕИ, ЛИЦА
 
Тема: «Роль учителя истории в формировании гражданственности молодого поколен...
Тема: «Роль учителя истории в формировании гражданственности молодого поколен...Тема: «Роль учителя истории в формировании гражданственности молодого поколен...
Тема: «Роль учителя истории в формировании гражданственности молодого поколен...
 
Инструкция по работе с сайтом v2me.ru
Инструкция по работе с сайтом v2me.ruИнструкция по работе с сайтом v2me.ru
Инструкция по работе с сайтом v2me.ru
 
Прайс-лист
Прайс-листПрайс-лист
Прайс-лист
 
Ebv Vira Stripe Lg G, Ig M
Ebv Vira Stripe  Lg G, Ig MEbv Vira Stripe  Lg G, Ig M
Ebv Vira Stripe Lg G, Ig M
 
Price
PricePrice
Price
 
Svid
SvidSvid
Svid
 
Свидетельства
СвидетельстваСвидетельства
Свидетельства
 
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig ABordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
 
Yersinia Vira Blot ® Lg G, Ig A
Yersinia Vira Blot ® Lg G, Ig AYersinia Vira Blot ® Lg G, Ig A
Yersinia Vira Blot ® Lg G, Ig A
 
Liver Vira Stripe Ig G
Liver Vira Stripe  Ig GLiver Vira Stripe  Ig G
Liver Vira Stripe Ig G
 
Ebv Vira Stripe Lg G, Ig M
Ebv Vira Stripe  Lg G, Ig MEbv Vira Stripe  Lg G, Ig M
Ebv Vira Stripe Lg G, Ig M
 
Ena Vira Stripe® Ig G
Ena Vira Stripe® Ig GEna Vira Stripe® Ig G
Ena Vira Stripe® Ig G
 
Helicobacter Pylori Vira Blot® Ig G, Ig A
Helicobacter Pylori Vira Blot®  Ig G, Ig AHelicobacter Pylori Vira Blot®  Ig G, Ig A
Helicobacter Pylori Vira Blot® Ig G, Ig A
 
Borrelia Vira Stripe® Ig M
Borrelia Vira Stripe®  Ig MBorrelia Vira Stripe®  Ig M
Borrelia Vira Stripe® Ig M
 
Borrelia Virastripe Ig G
Borrelia Virastripe Ig GBorrelia Virastripe Ig G
Borrelia Virastripe Ig G
 
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig ABordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
Bordetella Pertussis Vira Stripe® Ig G, Ig A
 

инструкция Borrelia Vira Stripe Lg G

  • 1. Borrelia ViraStripe® Диагностические регенты для определения IgG Метод иммуноблотинга (электрофоретическое разделение белков после их гибридизации с антигенами или мечеными атомами по способу вестерн- блоттинга) для обнаружения IgG-или IgM-антител против разновидностей Borrelia в человеческой сыворотке. Диагностический набор для определения IgG Borrelia ViraStripe ® произведен согласно руководству 98/79/EG и может быть оценен согласно quot;MiQquot; критериям. Borrelia ViraStripe ® - метод иммуноблоттинга, который использует нативные, очищенные антигены Borrelia afzelii (Pkо), Borrelia burgdorferi sensu stricto и рекомбинантный ген VIsE. Borrelia ViraStripe ® отвечает качественным стандартам микробиологических-инфектологических методик (27), общим рекомендациям DIN (Deutsche Industry Norm), устанавливающим двухполосный критерий для положительного результата иммуноблотинга (DIN 58967, часть 40) и DIN 58969-44 специальных требований для определения антител против Borrelia burgdorferi (32). 50 тестов Номер изделия V-BSSGOK Borrelia ViraStripe® Диагностический набор для определения IgG Образец 20 мкл сыворотки Время тестирования 90 минут Хранение/Стабильность около 12 месяцев при 2-8°C Компоненты комплекта 50 полосок IgG-специфические полоски с антигенами, полоски из ( Номер изделия V-BSSGAS) нитроцеллюлозы с системой контроля и Borrelia-специфичными антигенами в аналитической секции; код полоски: BG, пронумерованы от 1 до 50 9 мл Конъюгат щелочной фосфатазы против IgG человека, 10- ( Номер изделия V-UVNGKI) кратный концентрат жидкий 100 мл Буфер для разведения/промывки, 10-кратный концентрат ( Номер изделия V-UVNUWP) 1 пакет Порошок для разведения/промывки (5г) ( Номер изделия V-UVNUMP) 90 мл Раствор хромоген/субстрата, готовый к использованию ( Номер изделия V-UVNUCS) 1 экз. Инструкция по применению диагностического набора Borrelia ViraStripe ® для определения IgG 2 экз. Протокол оценки диагностического набора Borrelia ViraStripe® для определения IgG Пожалуйста запрашивайте отдельные рабочие инструкции для того, чтобы исследовать образцы спиномозговой жидкости. Дополнительно доступны 330 мкл человеческая сыворотка, (Номер изделия: V-BSSGPK) Borrelia IgG Положительный контроль готовая к использованию 330 мкл человеческая сыворотка, (Номер изделия: V-BSSGCO) Borrelia IgG пороговый контроль готовая к использованию 330 мкл человеческая сыворотка, (Номер изделия: V-BSSPNK) Borrelia IgG, IgM, IgA отрицательный контроль готовая к использованию 50 экз. (Номер изделия: V-BSSGEP) Borrelia ViraScan ® протоколы оценки для автоматической интерпретации с программным обеспечением ViraScan ® Хранение и стабильность реактивов Полоски с антигенами: полоски в закрытых упаковках Буфер для разведения/промывки: концентрат и порошок: устойчивы до истечения срока годности, если хранятся при устойчив до истечения срока годности, если хранится при температуре Плотно закрывайте пакеты с температуре 2-8 °C. 2-8 °C. неиспользованными полосками. Рабочий раствор буфера: 2 недели годен к использованию если Конъюгат, 10-кратный концентрат: устойчив до истечения срока хранится при температуре 2-8 °C. годности, если хранится при при температуре 2-8 °C Рабочий раствор буфера может быть сохранен в необходимых Рабочий раствор: использовать немедленно. количествах в течение более длительного времени в замороженном Раствор хромоген/субстрата: устойчив до истечения срока состоянии. годности, если хранится температуре 2-8 °C. Хранить в темном месте! Подготовка реактивов и исследуемого образца Конъюгат (рабочий раствор): Перед использованием доведите все компоненты теста до Растворите необходимое количество 10-кратного концентрата комнатной температуры (20-25°C). согласно таблице (1): Раствор всегда готовится свежий во время процедуры промывания (пункт 7 проведения теста). Полоски с антигенами: Раствор Хромоген/субстрата: Готовый к использованию. Полосы антигена соединены концами для удобства обработки. Образцы пациента: Тщательно отделите требуемое число полосок при помощи Используйте 20 мкл неразведенной сыворотки на один тест пинцета. Касайтесь полосок пинцетом только в области маркировки. Буфер для разведения/промывки (рабочий раствор): Дополнительно доступные контроли: Чтобы подготовить рабочий раствор буфера, разведите 10- Используйте 100 мкл каждого положительного, порогового и кратный концентрат в пропорции1:10 дистиллированной водой отрицательного контроля, в неразведенном виде, на серию тестов. (100 мл концентрата + 900 мл дистиллированной воды), добавьте Использование порогового контроля требуется для каждого порошок для разведения/промывки до полного растворения. испытания выполняемого согласно лабораторным методическим Поместите рабочий раствор буфера на 10 - 15 минут на рекомендациям по качеству (28). магнитную мешалку, pH = 7,5 ± 0,1.
  • 2. Таблица 1: Приготовление конъюгата рабочего раствора Число Разбавитель Конечный Конъюгат - концентрат полос /промывной буфер объем рабочий раствор 0,15 мл 1,35 мл 1,5 мл 1 + 0,30 мл 2.70 мл 3,0 мл 2 + 0.45 мл 4,05 мл 4,5 мл 3 + 0,60 мл 5,40 мл 6,0 мл 4 + 8,10 мл 0,75 мл 7,5 мл 5 + 8,10 мл 0,90 мл 9,0 мл 6 + 9,45 мл 1,05 мл 10,5 мл 7 + 10,80 мл 1,20 мл 12.0 мл 8 + 10,80 мл 1,35 мл 13,5 мл 9 + 13,50 мл 1,50 мл 13,5 мл 10 + 14,85 м 1,65 мл 16,5 мл 11 + 16,20 мл 1,80 мл 18,0 мл 12 + 17,55 мл 1,95 мл 19,5 мл 13 + 18,90 мл 2,10 мл 21,0 мл 14 + 20,25 мл 2,25 мл 22,5 мл 15 + 21,60 мл 2,40 мл 24,0 мл 16 + 22,95 мл 2,55 мл 25,5 мл 17 + 24,30 мл 2,70 мл 27,0 мл 18 + 25,65 мл 2,85 мл 28,5 мл 19 + 27,00 мл 3,00 мл 30,0 мл 20 + 28,35 мл 3,15 мл 31,5 мл 21 + 29,70 мл 3,30 мл 33,0 мл 22 + 31,05 мл 3,45 мл 34,5 мл 23 + 32,40 мл 3,60 мл 36,0 мл 24 + 33,75 мл 3,75 мл 37,5 мл 25 + 35,10 мл 3,90 мл 39,0 мл 26 + 36,45 мл 4,05 мл 40,5 мл 27 + 37,80 мл 4,20 мл 42,0 мл 28 + 39,15 мл 4,35 мл 43,5 мл 29 + 40,50 мл 4,50 мл 45,0 мл 30 + 41,85 мл 4,65 мл 46,5 мл 31 + 43,20 мл 4,80 мл 48,0 мл 32 + 44,55 мл 4,95 мл 49,5 мл 33 + 45,90 мл 34 + 5,10ml 51,0ml 47,25 мл 5.25 мл 52,5 мл 35 + 48,60 мл 5,40 мл 54,0 мл 36 + 49.95 мл 5,55 мл 55,5 мл 37 + 51,30 мл 5.70 мл 57,0 мл 38 + 52,65 мл 5,85 мл 58,5 мл 39 + 54,00 мл 6,00 мл 60,0 мл 40 + 55,35 мл 6,15 мл 61,5 мл 41 + 56,70 мл 6,30 мл 63,0 мл 42 + 58,05 мл 6,45 мл 64,5 мл 43 + 59,40 мл 6,60 мл 66,0 мл 44 + 60,75 мл 6,75 мл 67,5 мл 45 + 62,10 мл 6,90 мл 69,0 мл 46 + 63,45 мл 7,05 мл 70,5 мл 47 + 64,80 мл 7,20 мл 72,0 мл 48 + 66,15 мл 7,35 мл 73,5 мл 49 + 67,50 мл 7,50 мл 75,0 мл 50 + Проведение теста: 1. Ополоснуть инкубационную ванну буфером для Маркировать подносы несмываемым маркером. Удалять разведения/промывки и удалить раствор. загрязнения кратким ополаскиванием буфером. 2. Разместить по одной полоске в каждый канал. Разместить полосы в каналы подноса инкубации, одна полоса для каждого образца, соответственно для контроля, номером вверх. Используйте пинцет. 3. Добавить в каждый канал по 1.5 мл буфера и инкубировать в Визуально удостоверьтесь, что полосы полностью смочены и течение 5 минут при комнатной температуре на шейкере. не плавают частично на поверхности буфера. Используйте платформу шейкера с частотой колебаний 40 циклов/мин. 4. Добавить 20 мкл каждого образца пациента или 100 мкл каждого Пипеткой наносите контроль и образцы непосредственно на контроля соответственно номер полоски, в то время как происходят колебания платформы. 5. Инкубировать при колебаниях в течение 30 минут Работайте при комнатной температуре (20 - 25°C). 6. Декантировать жидкость Полоски прилипают к подносу инкубации. Удалите оставшуюся жидкость тщательным осушением подноса инкубации фильтровальной бумагой. 7. 3x5 минут промывка: добавьте разбавитель/промывной буфер 1.5 Промойте платформу шейкера. При промывке готовят рабочий мл, выдержите 5 мин., декантируйте жидкость полностью. раствор конъюгата, как описано в таблице растворения конъюгата. Осушите инкубационный поднос фильтровальной бумагой, чтобы удалить оставшуюся жидкость. 8. Пипеткой добавить 1,5 мл рабочего раствора конъюгата в каждый Удостоверьтесь, что полоски антигена полностью покрыты канал конъюгатом. Визуально проверьте, что полоски частично не плавают на поверхности буфера. 9. Инкубировать в течение 15 минут на шейкере, при комнатной Полоски прилипают к инкубационному подносу. Удалите температуре. оставшуюся жидкость, тщательно осушая инкубационный поднос фильтровальной бумагой.
  • 3. 10.Декантировать конъюгат. Полоски прилипают к инкубационному подносу. Удалите оставшуюся жидкость, тщательно осушая инкубационный поднос фильтровальной бумагой 11. Повторить шаг 7 - 3 раза. . 12. Добавить 1,5 мл дистиллированной воды, инкубировать в Визуально проверьте, что полоски частично не плавают на течение 1 минуты на шейкере, при комнатной температуре. поверхности буфера. 13. Инкубировать в течение 1 минуты при колебаниях. Работайте при комнатной температуре (20 - 25°C). 14. Декантировать жидкость Полоски прилипают к инкубационному подносу. Тщательно осушите поднос фильтровальной бумагой. 15. Добавить 1,5 мл раствора хромоген/субстрата. Визуально проверьте, что полоски частично не плавают на поверхности раствора хромоген/субстрата. 16. Инкубировать на шейкере: 5-15 минут Остановите реакцию, как только полоса порогового контроля станет ясно видима. Предостережение: избегайте превышения срока инкубации, что ведет к появлению фоновых пятен! Внимание!:Полоса порогового контроля IgG: OspC (25 kD) 17. Остановить реакцию, декантируя жидкость. Удалите остающуюся жидкость, тщательно осушая инкубационный поднос фильтровальной бумагой. 18. Промыть 3 раза с 1,5 мл дистиллированной воды. Вне времени инкубации. 19. Высушить полоски для интерпретации результатов. Удалить полоски из каналов во влажном состоянии, используя пинцет. Разместить влажные полоски на фильтровальной бумаге, высушить на воздухе перед интерпретацией данных. Принцип теста При помощи Borrelia ViraStripe® могут быть определены Borrelia- Иммуноблот с интегрированной системой контроля: специфические антитела в человеческой сыворотке. Зеленая разделительная линия делит полоску на секцию контроля Специфические антитела связываются с закрепленным на полоске и секцию анализа. Секция контроля включает контроль сыворотки антигеном в течение инкубации с сывороткой. Конъюгат и три контроля конъюгата (IgG, IgA, IgM). Секция анализа щелочной фосфатазы связывается с комплексом антиген-антитело включает в себя электрофоретические раздельные Borrelia- в течение инкубации с конъюгатом. Щелочная фосфатаза специфические антигены. конвертирует хромоген/субстрат и окрашивает комплекс антиген-антитело на полоске в фиолетовый цвет. Процедуры промывки между инкубацией с сывороткой, конъюгатом - и хромоген/субстратом удаляют не прореагировавшие реактивы. Оценка результатов теста 1. Подготовить протокол Регистрируйте данные в протоколе оценки. Приклейте полоски в протокол. Разместите зеленую линию оценки: разделения точно на напечатанную линию разделения в протоколе. 2. Действительность теста: Тест считается действительным если полосы функционального контроля и полосы контроля конъюгата и полосы порогового контроля для каждой полоски четко определяются. В случае, если нет реакции хотя бы одного из этих контролей, тест считается недействительным и должен быть повторен с соблюдением всех необходимых условий, описанных в инструкции. Не оценивайте недействительные полоски. 3. Классификация образцов Разместите зеленую линию разделения точно по линии разделения, напечатанной на листе оценки. пациентов: Оцените полосы на полосках пациента и отметки на листе оценки. 4. Интерпретация Пороговый контроль должен использоваться для каждой серии испытаний (28). Интенсивность порогового интенсивности полосы с контроля указывает границу для оценки полосы. пороговым контролем: Полосу на полосе пациента считают значимой, если ее интенсивность равна или выше чем интенсивность порогового контроля. Четкие полосы отмечаются знаком X в протоколе. Для Borrelia ViraStripe ® IgG полоса OspC (25 kD) - пороговая полоса. Полоса не оценивается, если ее интенсивность ниже, чем интенсивность пороговой полосы. Регистрируйте полосы пациента в листе оценки. 5. Критерии оценки quot;Если образец реактивных полос соответствует специфическим условиям (...), результат положительный, то результатов есть положительный результат EIA или другого теста первого шага подтвержден. Если, несмотря на присутствие специфических диагностических полос, критерии положительного результата не выполнены, результат считают сомнительным. В таком случае рекомендуется последующий контроль (...) quot;. (27) Критерии оценки результатов согласно quot;MiQquot; + VIsE для IgG Общее примечание: все полосы должны иметь интенсивность по крайней мере равную или выше, чем полоса порогового контроля. (27). IgG: положителен, если присутствуют более 2-х из следующих полос: p83, p58, p43, p39, p30, OspC, p21, Osp17 или DbpA, p14, VIsE,
  • 4. Номенклатура и описание borrelia полос в литературе и quot;MiQquot; Номенклатура антигенов, Комментарии согласно: Антиген литературе, MiQ (27) Антитела против VIsE (Вариабельный главный белок специфичный VIsE (30) VIsE (VMP) как в выраженной последовательности) описаны как специфичные. IgG антитела продуцируются уже на ранних стадиях и появляются в течение более поздних стадий инфекции, вызываемой borrelia. Антитела часто появляются спустя 6-12 недель после Высокоспецифичный белок мембранного p83 инфекции. Они типичны для стадии III, могут также пузырька на поверхности клетки(1, 4, 15, 16) появляться постепенно на стадиях I и II. Белок не охарактеризован. Выделен из 60 kD (Hsp60), специфичный (6) p58 часто в стадии III. Не охарактеризован. Главным образом, описан для стадии III. Не охарактеризован. Главным образом, описан для специфичный P43 стадии III. Описаны Перекрестные реактивности с другими относительно специфичный белок жгутиков p41 спирохетами и жгутиковыми бактериями. (ресничек) (2, 16, 23, 24) Эти антитела обнаруживаются на ранней стадии высокоспецифичный BmpA (Borrelia p39 болезни у многих пациентов. мембранный белок)(1,16) высокоспецифичный (6) В настоящее время мало исследован. p30 Известны по крайней мере 13 различных высокоспецифичный) (1,8, 13,14,23) OspC иммуноспецифических типов OspC. Не охарактеризован в деталях. специфичный (3) p21 Связан с Decorin на поверхности клетки хозяина. специфичный DbpA. (Decorin связанный Osp17 Антитела противDbpA описаны как специфические. белок) (29, 30) Проявляются в IgG при артрите и невоборрелиозе. Видоспецифичны. Протеин охарактеризован как специфичный иммуноген Специфичный (31) p14 от Borrelia afzelii. Рабочие характеристики Borrelia ViraStripe IgG Чувствительность: Чувствительность Borrelia ViraStripe ® оценена с использованием 69 сывороток от пациентов с клинически определенным диагнозом боррелиоза. Оценивались сыворотки от пациентов с ранней стадией боррелиоза при эритеме мигрирующей, хронической эритеме мигрирующей и множественной эритеме мигрирующей. Чувствительность lgG IgM / IgG Стадия боррелиоза: эритема мигрирующая 9 (31%) 23 (79%) (n=29) Стадия боррелиоза: эритема хроническая 12 (44 %) 21 (78 %) мигрирующая (n = 27) Стадия боррелиоза: множественная 9 (69 %) 12 (92 %) эритема мигрирующая (n = 13) Специфичность: Сыворотки от 143 доноров из южной Германии были изучены для оценки специфичности Borrelia ViraStrip Доноры (n = 143) 140 (95 %) Диагностическое значение антител против Borreliae: Диагностическое значение антител против Borreliae: 1. IgG-антитела появляются в срок от нескольких недель до 4. Иммунная реакция и, следовательно, образец диагностической месяцев после инфекции. В ранней стадии инфекции они часто не полосы, отличаются от пациента пациенту. Общее правило - обнаруживаются (23).В случае подозрения на недавнюю увеличение типов антител и количества специфических полос по инфекцию должны быть проверены IgM-и IgA-антитела. В этом мере продолжительности болезни (1). случае повторный образец должен быть проверен некоторое 5. Раннее лечение антибиотиком может подавить развитие время спустя. Пациенты во 2-ой или 3-ей стадии болезни обычно антител (18). дают положительный результат анализа на IgG-антитела. 6. Перекрестные реактивности с антигенами Borrelia описаны в 2. IgM-антитела обычно появляются спустя 2-3 недели с начала инфекциях, вызываемых трепонемой, лептоспирами и другими болезни (23). Титр антител часто снижается в течение от жгутиковыми бактериями (2, 16, 23). Острая EBV- инфекция нескольких недель до месяцев после выздоровления. Также (Эпштейна-Барра вирус) может вызвать поликлональную возможно, что титр антител остается постоянным до нескольких стимуляцию Borrelia-антител (23). Если IgM антитела против лет (11). белков OspC и 41 kD появляются без клинических признаков 3. IgA-антитела обнаруживаются у многих пациентов на ранней боррелиоза, необходимо проверить наличие EBV-инфекции. стадии боррелиоза. В некоторых случаях они обнаруживаются до Перекрестные реактивности также описаны в случаях появления IgM-антител. аутоиммунных болезней: рассеянного склероза, бокового амиотрофического склероза, гриппа и сифилиса.
  • 5. Предупреждения и предосторожности: 1. Все человеческие компоненты сыворотки в наших изделиях 6. Раствор хромоген/субстрата содержит BCIP и нитросиний были проверены на отсутствие ВИЧ - и HCV-антител и Hbs- тетразолий. Избегайте контакта с кожей и глазами. В случае Antigene. Однако все человеческие компоненты диагностического контакта с кожей и глазами промыть большим количеством воды. теста, а также образцы пациентов нужно считать потенциально 7. Образцы исследования и все потенциально загрязненные инфекционными и обращаться с соответствующими материалы должны быть дезактивированы, используя предосторожностями. установленные лабораторные методы, например 20 минут 2. Не набирать пипетку ртом. автоклавирования при 121,5°C. Жидкие отходы смешать с 3. Носить одноразовые перчатки при работе. гипохлоритом натрия в окончательной концентрации 1%- 4. Не есть, не пить и не курить в рабочей зоне. гипохлорита натрия. Выдержать 30 минут для окончательной 5. Конъюгат содержит азид натрия 0,1 %, контроли и буфер для дезинфекции. разведения/промывки содержат 0,02 % тимеросал: Внимание: вреден для здоровья. Промыть большим количеством воды после контакта с кожей или глазами. Ядовит при попадании внутрь! (см. листы данных о безопасности). Литература: 1. AGUERO-ROSENFELD М.; Журнал Клинической Микробиологии, 1993; 3090-3095. 2. ALFEN я, Wellensiek H-J;Lab. med., 1994; 12-19. 3. CDC/ASTPHLD., Рекомендации исследовательской группы по болезни Лайма; Дирборн, 1994. 4. DITTON H-J; FEMS Microbiol., 1992; 217-230. 5. DORWARD D Журнал Клинической Микробиологии, 1991; 1162-1170. 6. DRESSLER F; J. Infect.dis., 1993; 392-400. 7. ENGSTROM S.M., Shoop E, Johnson. Критерии интерпретации иммуноблота для ранней серодиагностики болезни Лайма; Журнал Клинической Микробиологии, 1995; 419-427. 8. FINGERLE V.Wilske B Журнал Clinica Microbiol., 1995; 1861-1869. 9. GILMORE РЕЗЕРФОРД, Kappel KJ, Johnson BJB; Журнал Клинической Микробиологии, 1997; 86-91. 10. HAGEDORN H-J, Kraminer-Hagedom A; Immunblot как подтверждающее испытание при серодиагностике боррелиоза: помощь или помеха?; Medizinaluntersuchungsstelle Herford; 0KCON GmbH. 11. HAMMERS-BERGGREN S; Журнал Клинической Микробиологии, 1994; 1519-1525. 12. HAUSER U, Lehnert Г, Lobentanzer R, Wilske B; Критерии интерпретации для стандартизированных пятен по методу вестерн-блоттинга для трех европейских разновидностей Borrelia burgdorferi Sensu Lato; Журнал Клинической Микробиологии, 1997; 1433-1444. 13. JAURIS-HEIPKE S, Wilske B; Журнал Клинической Микробиологии, 1995; 1860-1866. 14. JAURIS-HEIPKE S; Int. Конференция Lyme Borreliosis, 1994. 15. БЕГСТВО T; Инфекция и Устойчивость, 1994; 290-298. 16. MA B; Журнал Клинической Микробиологии, 1992; 370-376. 17. МЕЙЕР В, Хорст Х, Muller- Kunert E, Scheper T, Schlumberger W, Schroder М., Steinhagen K, StockerW; Borrelia burgdorferi sensu stricto и Borrelia garinii вытяжки имеют почти одинаковую диагностическую потенцию для серологического обнаружения Anti-Borrelia антител по методу вестерн-блоттинга в группе пациентов из Нижней Саксонии; Euroimmun. 18. PREAC-MURSIC V; Infect., 1989; 355-359. 19. SCHWAN TG; Журнал Клинической Микробиологии, 1993; 3096-3108. 20. TUOMI; Журнал Клинической Микробиологии, 1995; 1889-1996. 21. WILSKE B, Hauser B, Lehnert Г, Jauris-Heipke S; Геновиды и их влияние на результаты иммуноблота; Wien Клин Wochenschr, 1998; 882-885. 22. WILSKE B, Jauris-Heipke S, Lobentanzer R, Pradel я, Preac-Mursic V, Rossler D, Soutschek E, Johnson R C; Фенотипичный анализ внешнего поверхностного белка C (OspC) Borrelia burgdorferi Sensu Lato моноклональными антителами: отношения к геновиду и OspA серотипу; Журнал Клинической Микробиологии, 1995; 103-109. 23. WILSKE B Diagnostic und Labour, 1990; 24. 24. ZOLLER L; Журнал Клинической Микробиологии, 1991; 174-182. 25. HAUSER, U., Г. Lehnert, и B. Wilske, Журнал Клинической Микробиологии, 1999; 2241-2247. 26. JAURIS-HEIPKE, s. Rossle, B.,Wanner, G., и Wilske, B., Osp 17, Новый иммунодоминантный внешний поверхностный белок Borrelia afzelii: рекомбинант Escherichia coli и его использование как диагностического антигена для серодиагоностики болезни Лайма. Med. Microbiol. Immunol (Berl), 1999, 187 (4): 213-219. 27. WILSKE B., Zoller L, Brade V., Eiffert H., Goble U.B., Stanek Г, und Pfister H.-W., MiQ: Qualitatsstandards в der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik 12-2000: Lyme-Borreliose, Urban и FISCHER, 2000. 28. RILI-BAK: Bak- Richtlinie zur Qualitatssicherung quantitativer laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen, (1.1.2002), www.bundesaerztekammer.de <http://www.bundesaerztekammer.de>. 29. HEIKKILA, T., Seppala, я., Saxen, H., Panelius, J., Yrjanainen, H., и Lahdenne, P.:Видоспецифическая серодиагностика артрита Лайма и невроборрелиоза, вызываемых Borrelia sensu stricto, B. afzelii и B. garinii, используя Decorin