1. Borrelia ViraStripe® Диагностический набор для определения IgМ
Метод иммуноблоттинга для обнаружения IgG-или IgM-антител против разновидностей Borrelia в человеческой сыворотке. Диагностический набор
для определения IgМ Borrelia ViraStripe ® произведен согласно руководству 98/79/EG и может быть оценен согласно quot;MiQquot; критериям. Borrelia
ViraStripe ® - метод иммуноблоттинга, который использует нативные, очищенные антигены Borrelia afzelii (Pkо), Borrelia burgdorferi sensu stricto и
рекомбинантный ген VIsE. Borrelia ViraStripe ® отвечает качественным стандартам микробиологических-инфектологических методик (27), общим
рекомендациям DIN (Deutsche Industry Norm), устанавливающим двухполосный критерий для положительного результата иммуноблотинга (DIN
58967, часть 40) и DIN 58969-44 специальных требований для определения антител против Borrelia burgdorferi (32).
Borrelia ViraStripe® IgM набор 50 тестов (Изд.№ V-BSSMOK)
Образец: 20 мкл сыворотки
Время тестирования 90 минут
Хранение/Стабильность: около 12 месяцев при +2-+8°С
Компоненты набора
IgМ-специфические полоски с антигенами, полоски из нитроцеллюлозы с системой (Изд.№ V-BSSGAS)
50
контроля и Borrelia-специфичными антигенами в аналитической секции; код полоски: BG,
пронумерованы от 1 до 50
9 мл Конъюгат щелочной фосфатазы против IgМ человека, 10-кратный концентрат жидкий (Изд.№. V-BSSMKI)
100 мл Буфер для разведения/промывки, 10-кратный концентрат (Изд.№. V-UVNUWP)
1 упаковка Порошок для разведения/промывки (5г) (Изд.№ V-UVNUMP)
90 мл Раствор хромоген/субстрата, готовый к использованию (Изд.№ V-UVNUCS)
1 экз. Инструкция по применению диагностического набора Borrelia ViraStripe ® для
определения IgМ
2 экз. Протокол оценки диагностического набора Borrelia ViraStripe® для определения IgМ
Пожалуйста запрашивайте отдельные рабочие инструкции для тестирования образцов спинномозговой жидкости
Дополнительно доступны
330 мкл человеческая сыворотка, готовая к (Номер изделия: V-BSSMPK)
Borrelia IgM положительный контроль
использованию
330 мкл человеческая сыворотка, готовая к (Номер изделия: V-BSSMCO)
Borrelia IgM пороговый контроль
использованию
330 мкл человеческая сыворотка, готовая к (Номер изделия: V-BSSPNK)
Borrelia IgG, IgM, IgA отрицательный
использованию
контроль
50 экз. (Номер изделия: V-BSSMEP)
Borrelia ViraScan ® протоколы оценки для
автоматической интерпретации с
программным обеспечением ViraScan ®
Хранение и cтабильность реактивов
Полоски с антигенами: полоски в закрытых упаковках устойчивы Буфер для разведения/промывки: концентрат и порошок:
до истечения срока годности, если хранятся при температуре 2-8 °C. устойчив до истечения срока годности, если хранится при
Плотно закрывайте пакеты с неиспользованными полосками. температуре 2-8 °C.
Конъюгат, 10-кратный концентрат: устойчив до истечения срока Рабочий раствор буфера: 2 недели годен к использованию если
годности, если хранится при при температуре 2-8 °C хранится при температуре 2-8 °C.
Рабочий раствор: использовать немедленно. Рабочий раствор буфера может быть сохранен в необходимых
Раствор хромоген/субстрата: устойчив до истечения срока количествах в течение более длительного времени в замороженном
годности, если хранится температуре 2-8 °C. Хранить в темном состоянии.
месте!
Подготовка реактивов и исследуемого образца
Конъюгат (рабочий раствор):
Перед использованием доведите все компоненты теста до
Растворите необходимое количество 10-кратного концентрата
комнатной температуры (20-25°C).
согласно таблице (1): Раствор всегда готовится свежий во время
Полоски с антигенами:
процедуры промывания (пункт 7 проведения теста).
Полосы антигена соединены концами для удобства обработки.
Тщательно отделите требуемое число полосок при помощи пинцета. Раствор Хромоген/субстрата: Готовый к использованию.
Касайтесь полосок пинцетом только в области маркировки. Образцы пациента:
Возвратите неиспользованные полоски в пакет и храните при +2- Используйте 20 мкл неразведенной сыворотки на один тест
Дополнительно доступные контроли:
+8°C.
Буфер для разведения/промывки (рабочий раствор): Используйте 100 мкл каждого положительного, порогового и
Чтобы подготовить рабочий раствор буфера, разведите 10-кратный отрицательного контроля, в неразведенном виде, на серию тестов.
концентрат в пропорции1:10 дистиллированной водой (100 мл Использование порогового контроля требуется для каждого
концентрата + 900 мл дистиллированной воды), добавьте порошок испытания выполняемого согласно лабораторным методическим
для разведения/промывки до полного растворения. Поместите рекомендациям по качеству (28).
рабочий раствор буфера на 10 - 15 минут на магнитную мешалку, pH
= 7,5 ± 0,1.

2. Таблица 1: Приготовление конъюгата рабочего раствора
Число Разбавитель Конечный
Конъюгат - концентрат
полос /промывной буфер объем
рабочий раствор
0,15 мл
1,35 мл 1,5 мл
1 +
0,30 мл
2.70 мл 3,0 мл
2 +
0.45 мл
4,05 мл 4,5 мл
3 +
0,60 мл
5,40 мл 6,0 мл
4 +
8,10 мл 0,75 мл 7,5 мл
5 +
8,10 мл 0,90 мл 9,0 мл
6 +
9,45 мл 1,05 мл 10,5 мл
7 +
10,80 мл 1,20 мл 12.0 мл
8 +
10,80 мл 1,35 мл 13,5 мл
9 +
13,50 мл 1,50 мл 13,5 мл
10 +
14,85 м 1,65 мл 16,5 мл
11 +
16,20 мл 1,80 мл 18,0 мл
12 +
17,55 мл 1,95 мл 19,5 мл
13 +
18,90 мл 2,10 мл 21,0 мл
14 +
20,25 мл 2,25 мл 22,5 мл
15 +
21,60 мл 2,40 мл 24,0 мл
16 +
22,95 мл 2,55 мл 25,5 мл
17 +
24,30 мл 2,70 мл 27,0 мл
18 +
25,65 мл 2,85 мл 28,5 мл
19 +
27,00 мл 3,00 мл 30,0 мл
20 +
28,35 мл 3,15 мл 31,5 мл
21 +
29,70 мл 3,30 мл 33,0 мл
22 +
31,05 мл 3,45 мл 34,5 мл
23 +
32,40 мл 3,60 мл 36,0 мл
24 +
33,75 мл 3,75 мл 37,5 мл
25 +
35,10 мл 3,90 мл 39,0 мл
26 +
36,45 мл 4,05 мл 40,5 мл
27 +
37,80 мл 4,20 мл 42,0 мл
28 +
39,15 мл 4,35 мл 43,5 мл
29 +
40,50 мл 4,50 мл 45,0 мл
30 +
41,85 мл 4,65 мл 46,5 мл
31 +
43,20 мл 4,80 мл 48,0 мл
32 +
44,55 мл 4,95 мл 49,5 мл
33 +
45,90 мл
34 + 5,10ml 51,0ml
47,25 мл 5.25 мл 52,5 мл
35 +
48,60 мл 5,40 мл 54,0 мл
36 +
49.95 мл 5,55 мл 55,5 мл
37 +
51,30 мл 5.70 мл 57,0 мл
38 +
52,65 мл 5,85 мл 58,5 мл
39 +
54,00 мл 6,00 мл 60,0 мл
40 +
55,35 мл 6,15 мл 61,5 мл
41 +
56,70 мл 6,30 мл 63,0 мл
42 +
58,05 мл 6,45 мл 64,5 мл
43 +
59,40 мл 6,60 мл 66,0 мл
44 +
60,75 мл 6,75 мл 67,5 мл
45 +
62,10 мл 6,90 мл 69,0 мл
46 +
63,45 мл 7,05 мл 70,5 мл
47 +
64,80 мл 7,20 мл 72,0 мл
48 +
66,15 мл 7,35 мл 73,5 мл
49 +
67,50 мл 7,50 мл 75,0 мл
50 +
Проведение теста:
1. Ополоснуть инкубационную ванну буфером для Маркировать подносы несмываемым маркером. Удалять
разведения/промывки и удалить раствор. загрязнения кратким ополаскиванием буфером.
2. Разместить по одной полоске в каждый канал. Разместить полосы в каналы подноса инкубации, одна полоса
для каждого образца, соответственно для контроля, номером
вверх. Используйте пинцет.
3. Добавить в каждый канал по 1.5 мл буфера и инкубировать в Визуально удостоверьтесь, что полосы полностью смочены и
течение 5 минут при комнатной температуре на шейкере. не плавают частично на поверхности буфера. Используйте
платформу шейкера с частотой колебаний 40 циклов/мин.
4. Добавить 20 мкл каждого образца пациента или 100 мкл каждого Пипеткой наносите контроль и образцы непосредственно на
контроля соответственно номер полоски, в то время как происходят колебания
платформы.
5. Инкубировать при колебаниях в течение 30 минут Работайте при комнатной температуре (20 - 25°C).
6. Декантировать жидкость Полоски прилипают к подносу инкубации. Удалите
оставшуюся жидкость тщательным осушением подноса
инкубации фильтровальной бумагой.
7. 3x5 минут промывка: добавьте разбавитель/промывной буфер 1.5 Промойте платформу шейкера. При промывке готовят рабочий
мл, выдержите 5 мин., декантируйте жидкость полностью. раствор конъюгата, как описано в таблице растворения
конъюгата. Осушите инкубационный поднос фильтровальной
бумагой, чтобы удалить оставшуюся жидкость.
8. Пипеткой добавить 1,5 мл рабочего раствора конъюгата в каждый Удостоверьтесь, что полоски антигена полностью покрыты
канал конъюгатом. Визуально проверьте, что полоски частично не
плавают на поверхности буфера.
9. Инкубировать в течение 15 минут на шейкере, при комнатной Полоски прилипают к инкубационному подносу. Удалите
температуре. оставшуюся жидкость, тщательно осушая инкубационный
поднос фильтровальной бумагой.

3. 10.Декантировать конъюгат. Полоски прилипают к инкубационному подносу. Удалите
оставшуюся жидкость, тщательно осушая инкубационный
поднос фильтровальной бумагой
11. Повторить шаг 7 - 3 раза. .
12. Добавить 1,5 мл дистиллированной воды, инкубировать в Визуально проверьте, что полоски частично не плавают на
течение 1 минуты на шейкере, при комнатной температуре. поверхности буфера.
13. Инкубировать в течение 1 минуты при колебаниях. Работайте при комнатной температуре (20 - 25°C).
14. Декантировать жидкость Полоски прилипают к инкубационному подносу. Тщательно
осушите поднос фильтровальной бумагой.
15. Добавить 1,5 мл раствора хромоген/субстрата. Визуально проверьте, что полоски частично не плавают на
поверхности раствора хромоген/субстрата.
16. Инкубировать на шейкере: 5-15 минут Остановите реакцию, как только полоса порогового контроля
станет ясно видима. Предостережение:
избегайте превышения срока инкубации, что ведет к
появлению фоновых пятен!
Внимание!:Полоса порогового контроля IgМ: OspC (25 kD)
17. Остановить реакцию, декантируя жидкость. Удалите остающуюся жидкость, тщательно осушая
инкубационный поднос фильтровальной бумагой.
18. Промыть 3 раза с 1,5 мл дистиллированной воды. Вне времени инкубации.
19. Высушить полоски для интерпретации результатов. Удалить полоски из каналов во влажном состоянии, используя
пинцет. Разместить влажные полоски на фильтровальной
бумаге, высушить на воздухе перед интерпретацией данных.
Принцип теста
При помощи Borrelia ViraStripe® могут быть определены Borrelia Иммуноблот с интегрированной системой контроля:
-специфические антитела в человеческой сыворотке. Зеленая разделительная линия делит полоску на секцию контроля
Специфические антитела связываются с закрепленным на полоске и секцию анализа. Секция контроля включает контроль сыворотки
антигеном в течение инкубации с сывороткой. Конъюгат и три контроля конъюгата (IgG, IgA, IgM). Секция анализа
щелочной фосфатазы связывается с комплексом антиген-антитело включает в себя электрофоретические раздельные Borrelia-
в течение инкубации с конъюгатом. Щелочная фосфатаза специфические антигены
конвертирует хромоген/субстрат и окрашивает комплекс
антиген-антитело на полоске в фиолетовый цвет. Процедуры
промывки между инкубацией с сывороткой, конъюгатом - и
хромоген/субстратом удаляют не прореагировавшие реактивы.
Оценка результатов теста
1. Подготовить протокол Регистрируйте данные в протоколе оценки. Приклейте полоски в протокол. Разместите зеленую линию
оценки: разделения точно на напечатанную линию разделения в протоколе.
2. Действительность теста: Тест считается действительным если полосы функционального контроля и полосы контроля конъюгата и
полосы порогового контроля для каждой полоски четко определяются.
В случае, если нет реакции хотя бы одного из этих контролей, тест считается недействительным и должен
быть повторен с соблюдением всех необходимых условий, описанных в инструкции.
Не оценивайте недействительные полоски.
3. Классификация образцов Разместите зеленую линию разделения точно по линии разделения, напечатанной на листе оценки.
пациентов: Оцените полосы на полосках пациента и отметки на листе оценки.
4. Интерпретация Пороговый контроль должен использоваться для каждой серии испытаний (28). Интенсивность порогового
интенсивности полосы с контроля указывает границу для оценки полосы.
пороговым контролем: Полосу на полосе пациента считают значимой, если ее интенсивность равна или выше чем интенсивность
порогового контроля. Четкие полосы отмечаются знаком X в протоколе.
Для Borrelia ViraStripe ® IgМ полоса OspC (25 kD) - пороговая полоса.
Полоса не оценивается, если ее интенсивность ниже, чем интенсивность пороговой полосы.
Регистрируйте полосы пациента в листе оценки.
5. Критерии оценки quot;Если образец реактивных полос соответствует специфическим условиям (...), результат положительный, то
результатов есть положительный результат EIA или другого теста первого шага подтвержден. Если, несмотря на
присутствие специфических диагностических полос, критерии положительного результата не выполнены,
результат считают сомнительным. В таком случае рекомендуется последующий контроль (...) quot;. (27)

4. Критерии оценки результатов согласно quot;MiQquot; + VIsE для IgМ
Общее примечание: все полосы должны иметь интенсивность по крайней мере равную или выше, чем полоса порогового контроля. (27).
IgМ: положителен, если присутствуют 1 или более полос: p39, OspC, Osp17, VlsE; p41
Номенклатура и описание borrelia полос в литературе и quot;MiQquot;
Номенклатура антигенов, Комментарии
согласно: Антиген
литературе, MiQ (27)
Антитела против VIsE (Вариабельный главный белок
специфичный VIsE (30)
VIsE
(VMP) как в выраженной последовательности) описаны
как специфичные. IgG антитела продуцируются уже на
ранних стадиях и появляются в течение более поздних
стадий инфекции, вызываемой borrelia.
Описаны Перекрестные реактивности с другими
относительно специфичный белок жгутиков
p41
спирохетами и жгутиковыми бактериями.
(ресничек) (2, 16, 23, 24)
Эти антитела обнаруживаются на ранней стадии
высокоспецифичный BmpA (Borrelia
p39
болезни у многих пациентов.
мембранный белок)(1,16)
Известны по крайней мере 13 различных
высокоспецифичный) (1,8
OspC
иммуноспецифических типов OspC.
, 13,14,23)
Связан с Decorin на поверхности клетки хозяина.
специфичный DbpA. (Decorin связанный
Osp17
Антитела противDbpA описаны как специфические.
белок) (29, 30)
Проявляются в IgG при артрите и невоборрелиозе.
Видоспецифичны.
Рабочие характеристики Borrelia ViraStripe IgG
Чувствительность:
Чувствительность Borrelia ViraStripe ® оценена с использованием 69 сывороток от пациентов с клинически определенным диагнозом
боррелиоза. Оценивались сыворотки от пациентов с ранней стадией боррелиоза при эритеме мигрирующей, хронической эритеме
мигрирующей и множественной эритеме мигрирующей.
Чувствительность IgM IgM / IgG
Стадия боррелиоза: эритема мигрирующая
20 (69%) 23 (79%)
(n=29)
Стадия боррелиоза: эритема хроническая
16 (59%) 21 (78%)
мигрирующая (n = 27)
Стадия боррелиоза: множественная
11 (85%) 12 (92%)
эритема мигрирующая (n = 13)
Специфичность:
Сыворотки от 140 доноров из южной Германии были изучены для оценки специфичности Borrelia ViraStrip
Доноры (n = 140) 132 (94 %)
Диагностическое значение антител против Borreliae:
1. IgG-антитела появляются в срок от нескольких недель до 4. Иммунная реакция и, следовательно, образец диагностической
месяцев после инфекции. В ранней стадии инфекции они часто не полосы, отличаются от пациента пациенту. Общее правило -
обнаруживаются (23).В случае подозрения на недавнюю увеличение типов антител и количества специфических полос по
инфекцию должны быть проверены IgM-и IgA-антитела. В этом мере продолжительности болезни (1).
случае повторный образец должен быть проверен некоторое 5. Раннее лечение антибиотиком может подавить развитие
время спустя. Пациенты во 2-ой или 3-ей стадии болезни обычно антител (18).
дают положительный результат анализа на IgG-антитела. 6. Перекрестные реактивности с антигенами Borrelia описаны в
2. IgM-антитела обычно появляются спустя 2-3 недели с начала инфекциях, вызываемых трепонемой, лептоспирами и другими
болезни (23). Титр антител часто снижается в течение от жгутиковыми бактериями (2, 16, 23). Острая EBV- инфекция
нескольких недель до месяцев после выздоровления. Также (Эпштейна-Барра вирус) может вызвать поликлональную
возможно, что титр антител остается постоянным до нескольких стимуляцию Borrelia-антител (23). Если IgM антитела против
лет (11). белков OspC и 41 kD появляются без клинических признаков
3. IgA-антитела обнаруживаются у многих пациентов на ранней боррелиоза, необходимо проверить наличие EBV-инфекции.
стадии боррелиоза. В некоторых случаях они обнаруживаются до Перекрестные реактивности также описаны в случаях
появления IgM-антител. аутоиммунных болезней: рассеянного склероза, бокового
амиотрофического склероза, гриппа и сифилиса.
Предупреждения и предосторожности:
1. Все человеческие компоненты сыворотки в наших изделиях 6. Раствор хромоген/субстрата содержит BCIP и нитросиний
были проверены на отсутствие ВИЧ - и HCV-антител и Hbs- тетразолий. Избегайте контакта с кожей и глазами. В случае
Antigene. Однако все человеческие компоненты диагностического контакта с кожей и глазами промыть большим количеством воды.
теста, а также образцы пациентов нужно считать потенциально 7. Образцы исследования и все потенциально загрязненные
инфекционными и обращаться с соответствующими материалы должны быть дезактивированы, используя
предосторожностями. установленные лабораторные методы, например 20 минут
2. Не набирать пипетку ртом. автоклавирования при 121,5°C. Жидкие отходы смешать с
3. Носить одноразовые перчатки при работе. гипохлоритом натрия в окончательной концентрации 1%-
4. Не есть, не пить и не курить в рабочей зоне. гипохлорита натрия. Выдержать 30 минут для окончательной
5. Конъюгат содержит азид натрия 0,1 %, контроли и буфер для дезинфекции.
разведения/промывки содержат 0,02 % тимеросал: Внимание:
вреден для здоровья. Промыть большим количеством воды после
контакта с кожей или глазами. Ядовит при попадании внутрь! (см.
листы данных о безопасности).

5. Литература:
1. AGUERO-ROSENFELD М.; Журнал Клинической Микробиологии, 1993; 3090-3095. 2. ALFEN я, Wellensiek H-J;Lab. med., 1994; 12-19.
3. CDC/ASTPHLD., Рекомендации исследовательской группы по болезни Лайма; Дирборн, 1994. 4. DITTON H-J; FEMS Microbiol., 1992;
217-230. 5. DORWARD D Журнал Клинической Микробиологии, 1991; 1162-1170. 6. DRESSLER F; J. Infect.dis., 1993; 392-400. 7.
ENGSTROM S.M., Shoop E, Johnson. Критерии интерпретации иммуноблота для ранней серодиагностики болезни Лайма; Журнал
Клинической Микробиологии, 1995; 419-427. 8. FINGERLE V.Wilske B Журнал Clinica Microbiol., 1995; 1861-1869. 9. GILMORE
РЕЗЕРФОРД, Kappel KJ, Johnson BJB; Журнал Клинической Микробиологии, 1997; 86-91. 10. HAGEDORN H-J, Kraminer-Hagedom A;
Immunblot как подтверждающее испытание при серодиагностике боррелиоза: помощь или помеха?; Medizinaluntersuchungsstelle Herford;
0KCON GmbH. 11. HAMMERS-BERGGREN S; Журнал Клинической Микробиологии, 1994; 1519-1525. 12. HAUSER U, Lehnert Г,
Lobentanzer R, Wilske B; Критерии интерпретации для стандартизированных пятен по методу вестерн-блоттинга для трех европейских
разновидностей Borrelia burgdorferi Sensu Lato; Журнал Клинической Микробиологии, 1997; 1433-1444. 13. JAURIS-HEIPKE S, Wilske B;
Журнал Клинической Микробиологии, 1995; 1860-1866. 14. JAURIS-HEIPKE S; Int. Конференция Lyme Borreliosis, 1994. 15. БЕГСТВО T;
Инфекция и Устойчивость, 1994; 290-298. 16. MA B; Журнал Клинической Микробиологии, 1992; 370-376. 17. МЕЙЕР В, Хорст Х, Muller-
Kunert E, Scheper T, Schlumberger W, Schroder М., Steinhagen K, StockerW; Borrelia burgdorferi sensu stricto и Borrelia garinii вытяжки имеют
почти одинаковую диагностическую потенцию для серологического обнаружения Anti-Borrelia антител по методу вестерн-блоттинга в
группе пациентов из Нижней Саксонии; Euroimmun. 18. PREAC-MURSIC V; Infect., 1989; 355-359. 19. SCHWAN TG; Журнал
Клинической Микробиологии, 1993; 3096-3108. 20. TUOMI; Журнал Клинической Микробиологии, 1995; 1889-1996. 21. WILSKE B,
Hauser B, Lehnert Г, Jauris-Heipke S; Геновиды и их влияние на результаты иммуноблота; Wien Клин Wochenschr, 1998; 882-885. 22.
WILSKE B, Jauris-Heipke S, Lobentanzer R, Pradel я, Preac-Mursic V, Rossler D, Soutschek E, Johnson R C; Фенотипичный анализ внешнего
поверхностного белка C (OspC) Borrelia burgdorferi Sensu Lato моноклональными антителами: отношения к геновиду и OspA серотипу;
Журнал Клинической Микробиологии, 1995; 103-109. 23. WILSKE B Diagnostic und Labour, 1990; 24. 24. ZOLLER L; Журнал Клинической
Микробиологии, 1991; 174-182. 25. HAUSER, U., Г. Lehnert, и B. Wilske, Журнал Клинической Микробиологии, 1999; 2241-2247. 26.
JAURIS-HEIPKE, s. Rossle, B.,Wanner, G., и Wilske, B., Osp 17, Новый иммунодоминантный внешний поверхностный белок Borrelia afzelii:
рекомбинант Escherichia coli и его использование как диагностического антигена для серодиагоностики болезни Лайма. Med. Microbiol.
Immunol (Berl), 1999, 187 (4): 213-219. 27. WILSKE B., Zoller L, Brade V., Eiffert H., Goble U.B., Stanek Г, und Pfister H.-W., MiQ:
Qualitatsstandards в der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik 12-2000: Lyme-Borreliose, Urban и FISCHER, 2000. 28. RILI-BAK: Bak-
Richtlinie zur Qualitatssicherung quantitativer laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen, (1.1.2002), www.bundesaerztekammer.de
<http://www.bundesaerztekammer.de>. 29. HEIKKILA, T., Seppala, я., Saxen, H., Panelius, J., Yrjanainen, H., и Lahdenne, .:Видоспецифическая
серодиагностика артрита Лайма и невроборрелиоза, вызываемых Borrelia sensu stricto, B. afzelii и B. garinii, используя Decorin