3. CRISPER-CAS
• Una delle tecniche più utilizzate.
• Si usa un vettore con crRNA che ha basi
complementari a quelle del frammento
che si vuole tagliare, tracr RNA che si
lega alla CAS e l’enzima CAS, che taglia
le basi (blunt ends).
crRNA+tracrRNA = sgRNA(single guide)
• La cellula cerca di «riparare il DNA»
legando nuovamente i filamenti, (NHEJ
nonhomologous end joining, processo di
riparazione), ma con la sequenza ormai
modificata.
4. TECNICA ZFN (ZINC
FINGERS NUCLEASES)
• Questa tecnica sfrutta nucleasi artificiali, le
ZFN
• In particolare le endonucleasi sono chiamate fokl
e sono in grado di riconoscere solo triplette di
nucleotidi, rendendo la tecnica molto meno
precisa rispetto alla classica crisper.
• Se oltre agli ZFN si aggiunge un frammento di
DNA con le estremità omologhe a quelle del
DNA tagliato, questo si legherà al filamento
possiamo inserire DNA a nostro piacimento.
5. CAS-X
• È molto simile alla crisper-cas9, ma fa uso di un’altra proteina, la CAS-X
• Il vantaggio è che è molto più piccola della CAS9
• il fatto che CasX provenga da batteri non nell’essere umano potrebbe renderla più accettabile per il sistema
immunitario umano.
• Cas-x, quindi, riesce a fare tutto quello che fa la cas9, ma con dei vantaggi non da poco.
6. TECNICA TALEN (TRANSCRIPTION
ACTIVATOR-LIKE EFFECTOR NUCLEASES)
• La TALEN scansiona il DNA nucleotide per
nucleotide, alla ricerca della sequenza da tagliare,
come se scansionassero il doppio filamento (right
and left talen).
• Una volta trovata la sequenza entra in gioco, anche
qui, la fokl, che taglia il filamento.
• Il vantaggio sta nel fatto che questa tecnica è
precisa al nucleotide
• È efficace soprattutto nelle zone in cui il DNA è più
compatto
