Full detail of flurometry

1. FLUORIMETRY
PREPARED BY :- MISS ANAMIKA SINGH

2. FLUORESCENCE:-
W H E N A BEA M O F L I G H T PA S S ES T H R O U G H A S U B STAN CE , T H E
PA RT I CL E S W O U L D AB S O R B S S O M E F R O M O F E N E R G Y A ND
E M I T S T H E R A D I AT I O N .
I T I S P H E N O M E N O N I N W H I C H T H E E XC I T E D S I N G L E T
E L E CT R O N ( T H E E L E C T R O N A RE PA I RE D ) E M I T S E M I S S I O N
R A D I AT I O N W H E N B R O U G H T D O W N TO G R O U N D L E VE L AT T HE
C E RTA I N WAV E L E N G T H .
F L U O R E S C E N C E O C C U R AT ( 1 0 - 9 - 1 0 - 6 S E C )
DEFINITION

3. I T I S A T YP E O F E L E C T R O M A G N E T I C S P E CT R O S C O P Y T H AT
A N A LY S E S T H E F L U O R E S C E N C E F R O M T H E S A M P L E .
 I T I N VO LVE T H E U S E O F B E A M O F L I G H T, U S U AL LY ULT RA
V I O L E T L I G H T T H AT E XC I T E D T H E E L E C T R O N S I N T H E
M O L E C UL E O F C E RTA I N C O M P O U N D ( F L U O R E S CE N CE
S U B S TA N C E ) A N D T H AT P R O D U C E S A L I G H T O F L O W E R E N E R G Y.
P H O S P H O R E S C E N C E : -
W H E N L I G H T R A D I AT I O N I S I N C I D E N T O N CE RTA I N
S U B STAN CES T H E Y E M I T L I G H T C O N T I N U O U S LY E VE N AF T ER
T H E I N C I DE NT L I G H T I S C U T O F F. T H I S T Y P E O F D E L AY E D
F L U O R E S CE N C E I S CAL L E D P H O S P H O R E S C E NC E . S U B S TA N C E
S H O W I N G P H O S P H O R E S C E NC E A R E P H O S P H O R E SCE NT
S U B S TA N C E .
FLUORIMETRY

4.  M O L E C UL E C O N TA I N S Σ ( S I G M A ) E L E CT R O N  ( P I E ) A ND N O N
B O N D I N G ( N ) E L E C T R O N .
 T H E E L E CT R O N E M AY B E P RE S E NT I N B O N D I N G M O L E CU L AR
O R B I TAL . I T I S C AL L E D A S H I G H E ST O C C U PI E D M O L E CU L E R
O R B I TA L ( H O M O ) . I T H A S L E S T E N E R G Y A N D M O R E S TA B L E .
 W H E N T H E M O L E C UL E AB S O R B R A D I ANT E N E R G Y F RO M A
L I G H T S O U R C E ,T H E B O N D I N G E L E CT R O N M AY B E P R O M O T E D
TO A NT I B O N D I N G O R B I TAL ( L UM O ) . I T H A S M O R E E NE R G Y
A N D H E N C E L E S S S TA B L E .
PRINCIPLE

5.  A M O L E C U L A R E L E C T R O N I C S TAT E I N W H I C H A L L O F T H E
E L E C T R O N A R E PA I R E D A R E C A L L E D S I N G L E S TAT E .
 I N A S I N G L E T S TAT E M O L E C U L E A R E D I A M A G N E T I C .
 M O S T O F T H E M O L E C U L E I N T H E I R G R O U N D S TAT E A R E
PA I R E D .
 W H E N S U C H A M O L E C U L E A B S O R B U V / V I S I B L E R A D I AT I O N
, O N E O R M O R E O F T H E PA I R E D E L E C T R O N R A I S E D TO A N
E XC I T E D S I N G L E T S TAT E / E XC I T E D T R I P L E T S TAT E .
THEORY OF FLUORESCENCE
AND PHOSPHORESCENCE

6.  F L U O R E S C E N C E
 P H O S P H O R E S C E N C E
 R A D I AT I O N L E S S P R O C E S S
 V I B R AT I O N A L R E L A X AT I O N
 I N T E R N A L C O N V E R S I O N
 E XT E R N A L C O N V E R S I O N
 I N T E R S Y S T E M C R O S S I N G
FROM THE EXCITED SINGLET STATE
ONE OF THE FOLLOWING
PHENOMENON OCCURS

7. F L U O R E S C E N C E : - L I G H T E M I T I N G AT O N C E S O U R C E S TA RT &
S TO P S W H E N S O U R C E S TO P
F L U O R E S C E N C E & P H O S P H O R E S C E N C E : -

8. JABLONSKI ENERGY DIAGRAM

10.  F L U O R E S CE N C E I S M O S T C O M M O N LY O B S E RV E D I N
C O M P O U N D C O N TA I N I N G A R O M AT I C F U NC T I O N A L G R O U P S
W I T H L O W E N E R G Y .
 M O S T U N SU B ST I T U T E D A R O M AT I C H Y D R O C A RB O N S S H O W
F L U O R E S CEN C E – Q U A N T U M E F F I C I E NC Y I NC R EA S E WI T H
T H E N O . O F R I N G S A N D D E G R E E O F C O N D E N S AT I O N .
 S I M P L E H E T E R O C Y C L E D O N O T E X H I B I T F L U O R E S C E N C E .
 T H E N N -  * S I N G L E T Q U I C K LY C O N V E RT TO T H E N -
 * T R I P L E T A N D P R E V E N T F L U O R E S C E N C E
FLUORESCENCE AND
CHEMICAL STRUCTURE

11.  F U S I O N O F H E T E R O C Y C L I C N U C L E U S TO B E N ZE N E R I N G
I N C R E A S E F L U O R E S C E N C E
 S U B S T I T U T I O N O N T H E B E N ZE N E R I N G S H I F T S WAV E L E N G T H
O F A B S O R B A N C E M A XI M A A N D C O R R E S P O N D I N G C H A N G E S I N
F L U O R E S C E N C E I N P E A K S .
 F L U O R E S C E N C E D E C R E A S E W I T H I N C R E A S I N G ATO M I C N O .
O F T H E H A L O G E N .
 S U B S T I T U T I O N O F C A R B O XY L I C A C I D O R C A R B O XY L I C
G R O U P O N A R O M AT I C R I N G I N H I B I T F L U O R E S C E N C E .

12. I N TE R NAL C O N V E R SI O N I S A T RA N S I T I O N O C C U R R I N G
B E T W E E N STAT E S O F T H E S A M E M U LT I PL I C I T Y A ND I T TA K E
P L A CE AT T I M E S C AL E O F 1 0 - 1 2 S ( FA S T E R T H A N T H AT O F
F L U O R E S C E N C E P R O C E S S )
I N T E R SY S T E M C R O S S I N G : - I N T E R S Y ST E M CR O S S I N G R E F E R TO
N O N R A D I AT I VE T R A NS I T I O N B E T W E E N S TAT E S O F D I F F E RE NT
M U LT I PL I C I T Y . I T O C C U R S V I A I N V ER S I O N T H E S P I N O F T H E
E XC I T E D RE S ULT I N G I N T W O U N PA I R E D E L E C T R O N W I T H T H E
S A M E S P I N O R I E N TAT I O N R E S U LT I N G I N A S TAT E W I T H S P I N = 1
A N D M U LT I P L I C I T Y O F 3 ( T R I P L E T S TAT E )
INTERNAL CONVERSION VS
INTERSYSTEM CROSSING

13.  T H E D I F F E R E NC E B E T W E E N T H E M A XI M U M WAV E L E N G T H O F
T H E E XC I TAT I O N L I G H T A N D M AXI M U M WAV E L E N G T H O F T H E
E M I T T E D FL O R E S CE N CE L I G H T I S A C O N S TAN T R E FE R RE D TO
A S T H E S T R O K E S S H I F T.
 M E A SU RE O F E N E R G Y L O S T D U RI N G T H E L I F E T I M E O F T H E
E XC I T E D S TAT E ( R A D I AT I O N L E S S V I B R AT I O N A L
D E AC T I VAT I O N ) B E F O R E R E T U R N I N G TO T H E G R O U N D
S I N G L E T L E V E L ( F L O R E S C E N C E E M I S S I O N )
 T H E B E ST R E S ULT A R E O B TA I NE D FR O M C O M P O U N D
I N VO LV I N G L A R G E S H I F T S .

14.  AT L O W C O N C E NT R AT I O N O F F L U O R O P H O R E , T H E
F L U O R E S CE N C E I NT E NS I T Y O F A S A M P L E I S E S S E N T I AL LY
L I N E A R LY P R O P O RT I O N A L TO C O N C E N T R AT I O N .
 H O W E V E R ,A S T H E C O N C E N T R AT I O N I N C R E AS E , A P O I NT I S
R E AC H E D AT W H I C H T H E I N T E N S I T Y I N C RE A SE I S
P R O G R E S S I V E LY L E SS L I NE A R , A N D T H E I N T E N S I T Y
E VE NT U AL LY DE C RE AS E A S C O N C E N T R AT I O N I N C R E A SE
F U RT H E R .
Fluorescence intensity

15.  E XT E R N A L F L U O R O P H O R E C A N B E I N T R O D U C E D I N TO T H E
S Y S T E M B Y C H E M I C A L C O U P L I N G O R N O N – C O VA L E N T B I N D I N G .
 F I R S T LY I T M U S T N O T A F F E C T T H E M E C H A N I S T I C P R O P E RT I E S
O F T H E S Y S T E M U N D E R I N V E S T I G AT I O N .
 S E C O N D LY , I T S F L U O R E S C E N C E E M I S S I O N N E E D S TO B E
S E N S I T I V E TO E N V I R O N M E N TA L C O N D I T I O N I N O R D E R TO
E N A B L E M O N I TO R I N G O F T H E M O L E C U L A R E V E N T S .
 L A S T LY T H E F L U O R O P H O R E M U S T B E T I G H T LY B O U N D AT A
U N I Q U E L O C AT I O N .
E XA M P L E : - 1 A N I L I N O - 8 - N A P H T H A L E N E S U L P H O N AT E ( A N S )
, F L U O R E S C A M I N E O - P H T H A L D E H Y D E O R 6 - A M I N O Q U I N O LY- N -
H Y D R O XY S U C C I N I M I D Y L C A R B O N AT E .
EXTRINSIC FLUORESCENCE

16. S E N S I T I V I T Y : - I T I S M O R E S E N S I T I V E A S C O N C E N T R AT I O N I S L O W
A S u g / ml O R n g / ml .
P R E C I S I O N : - U P TO 1 %C A N B E A C H I V E D .
S P E C I F I C I T Y : - M O R E S P E C I F I C T H A N A B S O R B T I O N M E T H O D
W H E R E A B S O R P T I O N M A XI M A M AY B E S A M E F O R T W O C O M P O U N D .
R A N G E O F A P P L I C AT I O N : - E V E N N O N F L U O R S C E N T C O M P O U N D
C A N A L S O B E C O N V E RT E D TO F L U R O S E N C E N T C O M P O U N D B Y
C H E M I C A L C O M P O U N D .
ADVANTAGE OF FLUORESCENCE
SPECTROSCOPY

17.  N O T U S E F U L F O R I D E N T I F I C AT I O N .
 N O T A L L C O M P O U N D F L U O R E S C E N C E .
 C O N TA M I N AT I O N C A N Q U E N C H T H E F L U O R E S C E N C E A N D
H E N C E G I V E FA L S E / N O R E S U LT S .
DISADVANTAGE OF
FLUORESCENCE SPECTROSCOPY

18.  D E C R E A S E I N F L U O R E S C E N C E I N T N S I T Y D U E TO S P E C I F I C
E F F E C T O F C O N S T I T U E N T S O F T H E S O L U T I O N .
 D U E TO C O N C E N T R AT I O N , P H , P R E S S U R E , O F C H E M I C A L
S U B S TA N C E , T E M P E R AT U R E , V I S C O C I T Y , E T C .
T Y P E S O F Q U E N C H I N G
S E L F Q U E N C H I N G
C H E M I C A L Q U E N C H I N G
S TAT I C Q U E N C H I N G
C O L L I S I O N Q U E N C H I N G
QUENCHING

19. SELF QUENCHING

20.  H E R E D E C R E A S E I N F L O R E S C E N C E I N T E N S I T Y D U E TO T H E
FA C TO R L I K E C H A N G E I N P H , P R E S E N C E O F O XY G E N ,
H A L I D E S & H E AV Y M E TA L S .
 P H A N I L I N E AT P H 5 - 1 3 G I V E S F L U O R E S C E N C E B U T AT P H < 5 &
> 1 3 I T D O E S N O T E XH I B I T F L U O R E S C E N C E .
 H A L I D E S L I K E C H L O R I D E , B R O M I D E , I O D I D E & E L E C T R O N
W I T H D R AW I N G G R O U P L I K E N O 2 , C O O H , E T C . L E A D S TO
Q U E N C H I N G .
 H E AV Y M E TA L L E A D S TO Q U E N C H I N G , B E C A U S E O F T H E
C O L L I S I O N O F T R I P L E T G R O U N D S TAT E .
CHEMICAL QUENCHING

21. STATIC QUENCHING :-
T H I S O C C U R S D U E TO C O M P L E X F O R M AT I O N . E . G . C A F F E I N E
R E D U C E S T H E F L U O R E S C E N C E O F R I B O F L AV I N B Y C O M P L E X
F O R M AT I O N .
COLLISION QUENCHING :-
I T R E D U C E F L U O R E S C E N C E B Y C O L L I S I O N . W H E R E N O . O F
C O L L I S I O N I N C R E A S E D H E N C E Q U E N C H I N G TA K E P L A C E

22.  C O N C E N T R AT I O N
 Q U A N T U M Y I E L D O F F L U O R E S C E N C E
 I N T E N S I T Y O F I N C I D E N T L I G H T
 A D S O R P T I O N
 O XY G E N
 P H
 T E M P E R AT U RE & V I S C O S I T Y
 P H O TO D E C O M P O S I T I O N
 Q U E N C H E R S
 S C AT T E R
FACTOR EFFECTING
FLUORESCENCE INTENSITY

23. F L U O R E S C E N C E I N T E N S I T Y I S P R A P O RT N A L TO
C O N C E N T R AT I O N O F S U B S TA N C E O N LY W H E N T H E
A B S O R B A N C E I S L E S S T H E N 0 . 0 2
A = L O G l o / i t O R A = a b c
l o = I N T E N S I T Y O F I N C I D E N T L I G H T
a = A B S O R P T I V I T Y O F C O N S TA N T
b = PAT H L E N G T H
c = C O N C E N T R AT I O N
CONCENTRATION

24. (Ø)= NUMBER OF PHOTONS EMITTED NUMBER OF
PHOTON ABSORBED IT IS ALWAYS LEES THEN 1.0
SINCE SOME ENERGY IS LOST BY RADIATION LESS
PATHWAYS(COLLISIONAL ,INTERSYSTEM CROSSING,
VIBRATIONAL RELAXATION).
QUANTUM YIELD OF
FLURESCENCE (Ø)

25. INTENSITY OF INCIDENT LIGHT : -
INCREASE IN THE I NTENSITY
OF INCIDENT LIGHT ON THE SAMPLE FLURESCENCE
INTENCITY ALSO INCREASE .
ADSORPTION : -
ADSORPTION OF SAMPLE SOLUTION IN THE
CONTAINER MAY LEADS TO A SERIOUS PROBLEM .
OXYGEN :-
OXIDATION OF FLUORESCENT SPECIES TO A NON
FLUORESCENT SPECIES, QUENCHES FLUROSCENT
SUBSTANCE
PH :-
ALTERATION OF PH OF A SOLUTION WILL HAVE
SIGNIFICANT EFFECT ON FLUROSCENCE FOR A ANILINE IN
ALKALI MEDIUM GIVE VISIBLE FLURESCENCE BUT IN
ACIDIC CONDITION GIVE FLURESCENCE IN VISIBLE
REGION .

26. T E M P E R AT U RE A N D V I S C O S I T Y : -
T E M P E R AT U R E I N C R E A S E C A N
I N C R E A S E T H E C O L L I S I O N A L D E A C T I VAT I O N , A N D R E D U C E
F L U O R E S C E N T I N T E N S I T Y . I F V I S C O S I T Y O F S O L U T I O N I S M O R E
T H E F R E Q U E N C Y O F C O L L I S O N A R E R E D U C E D A N D I N C R E A S E I N
F L U O R S C E N T I N T E N S I T Y .
P H O TO C H E M I C A L D E C O M P O S I T I O N : -
A B S O R P T I O N O F I N T E N S E
R A D I AT I O N L E A D S TO P H O TO C H E M I C A L D E C O M P O S I T I O N O F A
F L U R O S C E N T S U B S TA N C E TO L E S S F L U O R S C E N T O R N O N
F L U O R S C E N T S U B S TA N C E .
Q U E N C H E R : -
Q U E N C H I N G I S T H E R E D U C T I O N O F F L U O R E S C E N C E
I N T E N S I T Y B Y T H E P R E S E N C E O F S U B S TA N C E I N T H E S A M P L E
O T H E R T H A N T H E F L U O R E S C E N T A N A L AY T E .
S C AT T E R : -
S C AT T E R I S M A I N LY D U E TO C O L L O I D A L PA RT I C L E S
I N S O L U T I O N . S C AT T I N G O F I N C I D E N T L I G H T A F T E R PA S S I N G
T H R O U G H T H E S A M P L E L E A D S TO D E C R E A S E I N F L U R E S E N C E
I N T E N S I T Y .

27. INSTRUMENTATION

28. M E R C U RY VA P O U R L A M P : -
M E R C U RY VA P O U R AT H I G H P R E S S U R E G I V E I N T E N S E L I N E S O N
C O N T I N O U S B A C K G R O U N D A B O V E 3 5 0 N M . L O W P R E S S U R E
M E R C U RY VA P O U R G I V E S A N A D D I T I O N A L L I N E AT 2 5 4 N M . I T
I S U S E D I N F I LT E R F L U O R I M E T E R .
SOURCE OF LIGHT
a) MERCURY VAPOUR LAMP

29. I T G I V E S M O R E I N T E N S E R A D I AT I O N T H E N M E R C U RY VA P O U R
L A M P . I T I S U S E D I N S P E C T R O F L U O R I M E T E R
b) XENON ARC LAMP

30. I F E XC I TAT I O N H A S TO B E D O N E I N V I S I B L E R E G I O N T H I S C A N
B E U S E D . I T I S U S E D I N L O W C O S T I N S T R U M E N T
C) TUNGSTEN LAMP

31. F I LT E R : - T H E S E AR E N O T H I N G B U T O P T I C AL F I LT E RS
W O R K S O N T H E P R I NC I PAL O F A B S O R P T I O N O F U N WA N T E D
L I G H T A N D T R A N S M I T T I N G T H E R E Q U I R E D WAV E L E N G T H O F
L I G H T . I N E XP E N S I VE I N ST RU M E NT FL U R I M E TE R P R I M A RY
F I LT E R A N D S E C O N D RY F I LT E R A R E P R E S E N T
P R I M A RY F I LT E R : -
A B S O R B S V I S I B L E R E G I O N A N D T R A NS M I T
U V R A D I AT I O N .
S E C O N D RY F I LT E R : -
A B S O R B S U V R A D I AT I O N A N D T RAN S M I T
V I S I B L E R A D I AT I O N
FILTER

32. T H E Y CO N V E RT P O LY C H R O M AT I C L I G H T I N TO
P O LY C H R O M AT I C L I G H T I N TO M O N O C H R O M AT I C L I G H T . T H E Y
C A N I S O L AT E A S P E CI F I C R A N G E O F A WAV E L E N G T H O R A
PA RT I C U L E R WAV E L E N G T H O F R A D I AT I O N F R O M A S O U R C E .
E XC I TAT I O N M O N O C H R O M ATO R S : - P R O V I D E S S UT I AB L E
R A D I AT I O N F O R E XC I TAT I O N O F M O L E C U L E .
E M I S S I O N M O N O C H R O M ATO R S : - I S O L AT E O NLY T H E
R A D I AT I O N E M I T T E D B Y T H E F L U R O S C E N T M O L E C U L E
MONOCHROMATORS

33. T H E S E A RE M E NT F O R H O L D I N G L I Q U I D S AM P L E . T H E S E A RE
M A D E U P Q U A RT Z A N D C A N H AV E VA RI O U S S H A P E E X .
C Y C L I N D R I C A L O R R A C TA N G U L E E T C .
SAMPLE CELL

34. P H O TO M E T R I C D E T E C TO R A R E U S E D T H E Y A R E : -
1 ) B A R R I E R L AY E R C E L L
2 ) P H O TO M U LT I O L AY R C E L L S
B A R R I E R L AY E R C E L L : -
 I T I S E M P L O Y E D I N I N E XP E N S I V E I N S T R U M E N T . F O R E X . F I LT E R
F L U O R I M E T E R
DETECTORS

35.  I T C O N S I S T O F A C O P P E R P L AT E C O AT E D W I T H A T H I N L AY E R
O F C U P R O U S O XI D E ( C U 2 O ) . A S E M I T R A N S PA R E N T F I L M O F
S I LV E R I S L A I D O N T H I S P L AT E TO P R O V I D E G O O D C O N TA C T .
 W H E N E XT E R N A L L I G H T FA L L S O N T H E O XI D E L AY E R T H E
E L E C T R O N S E M I T T E D F R O M T H E O XI D E L AY E R M O V E I N TO
C O P P E R P L AT E .
 T H E N O XI D E L AY E R B E C O M E S P O S I T I V E A N D C O P P E R P L AT E
B E C O M E S N E G AT I V E .
 H E N C E A N E M F D E V E L O P B E T W E E N T H E O XI D E L AY E R A N D
C O P P E R P L AT E A N D B E H AV E S L I K E A VO LTA I C C E L L . S O I T I S
C A L L E D P H O TO VO LTA I C C E L L .
 A G A LVA N O M E T E R I S C O N N E C T E D E XT R E M E LY B E T W E E N
S I LV E R F I L M A N D C O P P E R P L AT E A N D T H E D E F L E C T I O N I N
T H E G A LVA N O M E T E R S H O W S T H E C U R R E N T F L O W T H R O U G H
I T . T H E A M O U N T O F C U R R E N T I S F O U N D TO B E P R O P O RT I O N
TO T H E I N T E N S I T Y O F I N C I D E N T L I G H T

36.  T H E S E A R E I N C O R P O R AT E D I N E XP E N S I V E I N S T R U M E N T L I K E
S P E C T R O F L U O R O M E T E R . I T S S E N S I T I V I T Y I S H I G H D U E TO
M E A S U R I N G W E A K I N T E N S I T Y O F L I G H T .
 T H E P R I N C I P L E E M P L O Y E D I N T H I S D E T E C TO R I S T H AT
M U LT I P L I C AT I O N O F P H O TO E L E C T R O N S B Y S E C O N D A RY
E M I S S I O N O F E L E C T R O N .
 T H I S I S A C H I E V E D B Y U S I N G A P H O TO C AT H O D E A N D A S E R I E S
O F A N O D E S ( D Y N O D E S ) . U P TO 1 0 D Y N O D E S A R E U S E D . E A C H
D Y N O D E I S M A I N TA I N E D AT 7 5 - 1 0 0 H I G H E R T H AT T H E
P R O C E E D I N G O N E
 AT E A C H S TA G E T H E E L E C T R O N E M I S S I O N I S M U LT I P L I E D B Y A
FA C TO R O F 4 TO 5 D U E TO S E C O N D A RY E M I S S I O N O F
E L E C T R O N S A N D H E N C E A N O V E R A L L FA C TO R O F 1 0 6 I S
A C H I E V E D .
 P M T S H O U L D B E S H I E L D E D F R O M S T R AY L I G H T I N O R D E R TO
H AV E A C C U R AT E R E S U LT .
PHOTOMULTIPLIER TUBE

37.  P M T C AN D ET ECT V ERY W E A K S I G N A L S , EV E N 2 0 0 T I M E S
W E A K E R T H A N T H AT C O U L D B E D O N E U S I NG P H O TO VO LTA I C
C E L L . H E N C E I T I S U SE F UL I N F L U O R E S C E N CE M E A SU RE M E NT
.

38. GENERAL LAYOUT OF
FLUORIMETER

39. I T C O N TA I N T U N G S T E N L A M P A S A S O U R C E O F L I G H T A N D H A S
A N O P T I C A L S Y S T E M C O N S I S T O F P R I M A RY F I LT E R .
 T H E E M I T T E D RA D I AT I O N I S M E A S U RE D AT 9 0 ˚ B Y USI N G A
S E C O N D RY F I LT E R AN D D E TE CTO R . P R I M A RY F I LTE R A BS O R B
V I S I B L E R A D I AT I O N A N D T RA N SM I T U V R AD I AT I O N W H I C H
E XC I T E S T H E M O L E C U L E P R E S E N T I N S A M P L E C E L L .
 I N S T E A D O F 9 0 I F W E U S E 1 8 0 G E O M E T RY A S I N COL ORI M E T RY
S E C O N D RY F I LT E R H A S TO B E H I G H LY E F F I C I E NT O T H E R W I SE
B O T H T H E U N A B S O R B E D U V R ADI AT I O N A N D F L U O R E SC E NT
R A D I AT I O N W I LL P R O D U CE DE TEC TO R RE S PO N S E A N D G I V E
FA L S E R E S U LT .
INSTRUMENTS
SINGLE BEAM FILTER FLUORIMETER

40. S I N G L E B E A M I N S T R U M R N T A R E S I M P L E I N C O N S T R U C T I O N
C H E A P E R A N D E A S Y TO O P E R AT E
A D VA N TA G E : -
S I M P L E I N C O N S T R U C T I O N , E A S Y TO U S E , E C O N O M I C A L
D I S A D VA N TA G E : -
 I T I S N O T P O S S I B L E TO U S E R E F E R E N C E S O L U T I O N & S A M P L E
S O L U T I O N AT A T I M E .
 R A P I D S C A N N I N G TO O B TA I N E XC I TAT I O N & E M I S S I O N
S P E C T R U M O F T H E C O M P O U N D I S N O T P O S S I B L E .

41. I T I S S I M I L A R TO S I N G L E B E A M E X C E P T T H AT T H E T W O
I N C I D E N T B E A M S F O R M A S I N G L E L I G H T S O U R C E PA S S T H R O U G H
P R I M A RY F I LT E R S S E P E R AT E LY A N D FA L L O N T H E A N O T H E R
R E F E R E N C E S O L U T I O N . T H E N T H E E M I T T E D R A D I AT I O N F R O M
T H E S A M P L E O R R E F E R E N C E F R O M T H E S A M P L E O R R E F E R E N C E
S A M P L E PA S S S E PA R AT E LY T H R O U G H S E C O N D A RY F I LT E R A N D
P R O D U C E R E S P O N S E C O M B I N LY O N A D E T E C TO R
DOUBLE BEAM FLUORIMETER

42. ADVANTAGES:-
SAMPLE & REFERENCE SOLUTION CAN BE
ANALYSED SIMULTANEOUSLY ,
DISADVANTAGE :-
RAPID SCANNING IS NOT POSSIBLE DUE TO
USE OF FILTERS .

43. I N T H I S P R I M A RY F I LT E R I N D O U B L E B E A M F L U O R I M E T E R I S
R E P L A C E D B Y E X C I TAT I O N M O N O C H R O M ATO R A N D T H E
S S E C O N D RY F I LT E R I S R E P L A C E D B Y E M I S S I O N M O N O C H R O M ATO R
. I N C I D E N T B E A M I S S P L I T I N TO S A M P L E A N D R E F E R N C E B E A M B Y
U S I N G B E A M S P L I T E R .
IN SPECTROFLUORIMETER

44.  D E T E R M I N AT I O N O F I N O R G A N I C S U B S TA N C E A L 3 + L I + ZN 2 +
 D E T E R M I N AT I O N O F T H I A M I N E H C L .
 D E T E R M I N AT I O N O F P H E N Y TO I N .
 D E T E R M I N ATI O N O F I N D O L E S , P H E N O L S , & P H E N O T H I A ZI N E
 D E T E R M I N AT I O N O F N A P H T H O L ' S , P R O T E I N S , P L A N T
P I G M E N T A N D S T E R O I D S .
 F L U O R I M E T RY , N O W A D AY S C A N B E U S E D I N D E T E C T I O N O F
I M P U R I T I E S I N N A N O G R A M L E V E L B E T T E R T H A N
A B S O R B A N C E S P E C T R O P H O TO M E T E R W I T H S P E C I A L
E M P H A S I S I N D E T E R M I N I N G C O M P O N E N T S O F S A M P L E AT
T H E N D O F C H R O M ATO G R A P H I C O R C A P I L L A RY C O L U M N .
APPLICATIONS

45.  D E T E R M I N AT I O N O F R U T H E N I U M I O N S I N P R E S E N C E O F
O T H E R P L AT I N U M M E TA L S .
 D E T E R M I N AT I O N O F B O R O N I N S T E E L , A L U M I N I U M I N
A L L O Y S M A N G A N E S E I N S T E E L .
 D E T E R M I N AT I O N O F B O R O N I N S T E E L B Y C O M P L E X F O R M E D
W I T H B E N ZO I N .
 E S T I M AT I O N O F C A D M I U M W I T H 2 ( 2 H Y D R O X Y P H E N Y L
) B E N ZO X A ZO L E I N P R E S E N C E O F TA RT R AT E .
 R E S P I R ATO RY T R A C T I N F E C T I O N .
APPLICATIONS