1. ・论著・
一维凝胶电泳图谱数字化定量比较法的建立及验证▲
胡蝶飞 李国坚。 吴继周 臧 宁 宁秋悦
（广西医科大学第一附属医院感染性疾病科，南宁市５３００２２）
【摘要】 目的探讨凝胶定量软件Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ用于血清差异蛋白质组学研究的可行性。方法运用凝胶成像系统
中的定量软件Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ对各电泳图上的各条带进行定量分析，将图形结果转换为数据结果；用上述技术分别对健康体
检者和肝癌病人各３２份除高丰度蛋白的血清电泳图进行分析，验证该研究方法的可行性。结果两组间有１０个条带差异
具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。通过文献检索，其中９条找到相对应分子量的ＨＣＣ标志物，结论凝胶定量软件Ｑｕａｎｔｉｔｙ
Ｏｎｅ可量化处理电泳条带的分子量和灰度；一维凝胶电泳技术可用于血清差异蛋白初期比较研究。
【关键词】 血清蛋白组学；ＳＤＳ・ＰＡＧＥ；Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ软件；原发性肝细胞癌
Ｉ中图分类号】 Ｒ ７３５．７ Ｉ文献标识码】 Ａ 【文章编号】 １６７３－７７６８（２０１ １）Ｏｌ－０００１ ４）４
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｎｅ・ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
（１－ＤＥ）Ｄｉｇｉｔａｌｉｚｅｄ ｍａｐ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｔｈｏｄ
ＨＵ Ｄ如－ｆｅｉ，ｕ Ｇｕｏ－ｊｉａｎ，ＷＵ Ｊｉ－ｚｈｏｕ，ＺＡＮＧ Ｎｉｎｇ。ＮＩＮＧ Ｑｉｕ－ｙｕｅ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，ｔｈｅｆｉｒａ ａｙｆｉｔ矗Ｕｅｄ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＧｕａｎｇｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３００２１ Ｃｈｉｎａ）
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ，ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｏｎｅ・ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（１－ＤＥ）ｉｎ ｓｅｍｍ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ
ｐｒｏｔｅｏｍｉｅｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ。Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｕｓｅ ａ
ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｇｅｌ ｉｍａｇｉｎｇ枷ｗａｒｅ Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ ｔｏ ｑｕａｎｔｉｆｙ ｅａｃｈ ｂａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
ｍａｐ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｃｏｎｖｅｒｔ ｔｈｅ ｇｒａｐｈｉｃａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｔｏ ｄｉｇｉｔａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ．Ｅｌｅｅｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｍａｐｓ ｏｆ ３２ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ３２ ｈｅａｌｔｈ ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｒｕｍ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ Ｉｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｏｕｒ
ｓｔｕｄｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ １０ ｂａｎｄｓ ｗｉｔｈ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ
ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｗｅ ｆｏｕｎｄ ９ ＨＣＣ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｉｔｈ ａ ｍａｔｃｈｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｖｉａ ｄｏｃｕｍｅｎｔ ｒｅｔｒｉｅｖａｌ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ
ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｌ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｓｏｆｌｗａｒｅ Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ ｉｓ ｆｅａｓｉｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ．Ｗｅ ｈａｖｅ ｐｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ ｏｎｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｇｅｌ
ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｉｓ ｆｅａｓｉｂｌｅ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｓｅｒｏｍ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ．
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｓｅｒｕｍ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ；ＳＤＳ—ＰＡＧＥ；Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ ｓｏｆｔｗａｒｅ；Ｐｒｉｍａｒｙ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ
电泳之后的信息处理与电泳本身同样重要。目前有许 Ｂ超。肝功检查未见异常．在全身体检巾未发现任何疾病。
多软件町以用于分析电泳结果，比较有名的有：Ｑｕａｎｔｉｔｙ ３２例肝癌患者血清标本，来自广西医科大学第一附属医院
Ｏｎｅ、Ｂａｎｄｓｃａｎ、ＢａｎｄＬｅａｄｅｒ、Ｓｉｇｍａ Ｇｅｌ等。来自Ｂｉｏ—Ｒａｄ的 确诊的原发性肝癌患者，手术患者术后均经病理证实．Ｉ晦床
一维凝胶定鼋软件Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ主要用来进行凝胶或者培 诊断标准按照２００１年９月在Ｊ“州召开的第八届全同肝癌
养皿的荧光定量分析。它的分析功能主要有４种：泳道／条 学术会议Ｉ－正式通过的肝癌诊断标准。１。肝癌患者、健康体
带轨迹定鳝法、等高线直接定量法、菌落计数、分子量测定。 榆者血清的基本资料见表ｌ。空腹抽取健康体检者及肝癌患
本实验我们选取止常人和肝癌患者血清．根据前期试验结 者５列静脉血，４。Ｃ冰箱放置２ ｈ自然凝固后，４℃３ ０００ ｒｐｍ
果．选定１．２倍体积乙腈沉淀血清，配置尿素Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ 离心１０ ｍｉｎ，取上层』ｌＩＬ清，一８０。Ｃ存放用于进一步分离。
ＰＡＧ胶进行电泳后，将电泳结果扣描成照片格式，导入 表ｌ 两组研究对象基本情况比较
Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ软件，并根据泳道／条带轨迹定量法和等高线 Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｂａｓｉｃ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ
定量法分析，将各条带位置和色度转换为数据，将数据进行 ｈｅｐａｔｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｈｅａｌｔｈ ｐｅｏｐｌｅ
ｔ检验。以确定两组蛋白各条带的量的差异。检索文献奁找
与其相对应的分子量的ＨＣＣ标志物，验证此方法是否适用
于血清中小分子蛋白差异分析。
ｌ材料与方法
’Ｐ＜０．０５。
１．１ 样本选择３２例健康人血清标本。来自广西医科大学 １．２试剂尿素（ＧｉＩ）（・ｏＢＲＬ公司），牛血清白蛋白（ＢＳＡ）、
第一附属医院体检中心体检者，既往无肝脏疾患，肝脏 ＢＣＡ法蛋白定造试剂盒产品（上海捷瑞牛物公司），丙烯酰
铵、Ｎ．Ｎ’－甲又双丙丙烯酰铵、ＡＰ、％ｓ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、Ｄ１Ｔｒ、ＳＤＳ、
‘基金项日：国家自然科学基金项目（３０７６０２１９）、广两自然科学基金项
日（０６４０１０８）
ＴＥＭＥＤ、Ｂ一巯基乙醇、甘氨酸、甘油均为卜海牛工生物工程
。通讯作者 有限责任公司产品，乙腈、醋酸、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染料、乙
万方数据

2. ２
酸钠、冰乙酸、氢氧化钠、盐酸均为国产分析纯。 想要了解的泳道，Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ即显示出一条曲线，旁边弹
１．３仪器Ｐｏｗｅｒ Ｐａｃ ＨＣＴＷ电泳仪、Ｍｉｎｉ Ｐｒｏｔｅａｎ ２ｗｅｌｌ垂 出对话框“Ｓｔｄ．Ｃｕｒｖｅ Ｏｐｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，在“Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ
直电泳槽（Ｂｉｏ—Ｂａｄ公司），Ｅ１ｘ８００自动酶标仪（Ｂｉｏ．Ｔｅｋ Ｍｏｄｅｌ”中选择“Ｐｏｉｎｔ ｔｏ Ｐｏｉｎｔ Ｓｅｍｉ－ｌｏｇ”或“Ｅｌｄｅｒ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ”。
Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ公司），高速低温离心机（德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司）， 钩选“Ｓｈｏｗ Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ ｄａｔａ ｏｆ Ｐｏｉｎｔｓ”，随即曲线上标注许多
真空旋转浓缩机（美国Ｔｈｅｒｍａｌ公司），扫描仪（ＥＰＳＯＮ公 数字，即是水平方向上对应的Ｂａｎｄｓ的分子量。
司）。 １．４．４．３ 等高线定量法 执行“Ｖｏｌｕｎｍ・Ｖｏｌｕｍｎ Ｃｏｎｔｏｕｒ
１．４方法 Ｔｏｏｌ”，点击Ｂａｎｄｓ的外围，执行“Ｖｏｌｕｍｎ－Ｖｏｌｕｍｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ
１．４．１血清样品的预处理冻融血清，４℃下以１２ ０００ ｒｐｍ Ｒｅｐｏｒｔ”，在“Ｖｏｌｕｍｎ Ｒｅｐｏｒｔ Ｏｐｔｉｏｎｓ”中选择参数“Ｂａｃｋｇｒｏｕｄ
离心５ ｍｉｎ，取上清液０．５ ｒｎｌ与０．６ ｍｌ乙腈混合（构成 Ｓｕｂｓｔｒｕｅｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄ”。选择“ｌｏｃａｌ”方式做背景去除；双击
１．２倍体积倍数的乙腈），立即震荡混匀约１０ ｓ，置于摇床 “Ｖｏｌｕｍｎ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ”选项，在“Ｖｏｌｕｍｎ Ｔｙｐｅ”中选择
３０ ｒａｉｎ（６０ ｒｐｍ，３７℃）然后于４℃下以１２ ０００ ｒｐｍ离心 “Ｓｔａｎｄａｒｄ”，将Ｍａｋｅｒ数值填入“Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ”框中，即得到
１５ ｒａｉｎ，取７５０一上清于真空浓缩机浓缩至１２５“ｌ。 真实的定量值。
１．４．２配置尿素Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶，见表２。 １．５统计分析方法将上述方法所得的分子量与对应的
表２尿素Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶的构成 灰度值建立Ｅｘｃｅｌ数据文件，用ＳＰＳＳ １３．０对数据资料进行
Ｔａｂｌｅ ２ Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ ｕｒｅａ Ｔｆｉｅｉｎｅ・・ＳＤＳ・・ＰＡＧＥ ｇｌｕｅ 分析．用成组ｔ检验比较组问的差异，以Ｐ＜Ｏ．０５为差异有
统计学意义。
２结果
用Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ软件中的泳道／条带轨迹定量法和等高
线定最法分别对正常人和肝癌患者各３２份除高丰度蛋白
血清电泳图进行分析（电泳图见图１—９），得到电泳图中条
带分子量大小，依次为８１６６４ Ｄａ，６２４９９ Ｄａ，４９６５１ Ｄａ，
４５５１２ Ｄａ，４０１２４ Ｄａ，２３９９７ Ｄａ，１８８１２ Ｄａ，１７１３５ Ｄａ，
注：Ａ贮液为４９．５％Ｔ。３％Ｃ丙烯酰铵贮存液，Ｂ贮液为 １６５２０ Ｄａ。１４０２４ Ｄａ．１２５９３ Ｄａ，１１２６１ Ｄａ，９８６７ Ｄａ。各分子
４９．５％Ｔ，６％Ｃ丙烯酰铵赌。：存液。 条带在各样品中的灰度值，采用ｔ检验进行统计学分析，有
１．４．３蛋白测定按ＢＣＡ法测定蛋白说明书操作，测定 １０个条带，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５），这些条带的分
除高丰度蛋白后各样品浓度．再调整蛋白浓度为２ ｍｇ／ｍｌ， 子量分别为８１６６４ Ｄａ、４９６５ｌ Ｄａ、４５５１２ Ｄａ、４０１２４ Ｄａ、
样品与５×ＳＤＳ－ＰＡＧＥ Ｌｏａｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ按４：ｌ体积混合，沸水 ２３９９７ Ｄａ．１８８１２ Ｄａ，１７１３５ Ｄａ，１４０２４ Ｄａ，ｉ２５９３ Ｄａ，
浴５ ｍｉｎ，自然冷却后１２ ０００ ｒｐｍ离心５ ｒａｉｎ。固定凝胶，放 ｌ １２６１ Ｄａ，这些条带在肝癌组３１例中可见，而健康体检者
入电泳槽，加入电泳缓冲液，取已处理好的样品１８¨Ｉ上样， 组则未出现。通过检索文献，除分子量为４０１２４ Ｄａ找不到
接通电源，恒压４０Ｖ电泳至溴酚蓝进入分离胶后将电压升 相对应的分子量的标志物外，其余的９条均有相对应的分
至６０ Ｖ，恒压电泳至溴酚蓝到达凝胶底部时，停止电泳。取 子量的ＨＣＣ标志物。８１６６４ Ｄａ与Ｒｅｎ等。２１研究得出的
下凝胶，放入染色液中，３７℃６０ ｒｐｍ水平摇床３０ ｍｉｎ，取出， ＨＣＣ标志物ＨＧＦ（分子量８２６０２．８ Ｄａ）相对应。４９６５１ Ｄａ
小心放入装有脱色液ｌ的塑料方盒中，室温静置５ ｒａｉｎ，再 与Ａｌｄｏ等Ｊ。研究得出的ＨＣＣ标志物ＣｓＡ（分子量
放入装有脱色液２的方盒中，室温静置至蓝色背景基本消 ５０６８８．４４ Ｄａ）相对应。４５５１２ Ｄａ对应的ＨＣＣ标志物有三
失，１５ ＫＤａ以下条带清晰可见。小心取出，平放入塑封袋 个，分别为Ｇｉａｎｎｅｌｌｉ等‘４。研究得出的ＨＣＣ标志物ＳＣＣＡ（分
中，至扫描仪扫描成照片格式的胶图。 子量４４５６４．６０ Ｄａ）、ｓｏｎｇ等一。研究得出的ＨＣＣ标志物
１．４．４一维凝胶电泳图谱的建立 ＴＧＦ．１３１（分子量４４３４１．１６ Ｄａ）、Ｍａｒｒｅｒｏ等旧’研究得出的
１．４．４．１在ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ中将胶图转换为１１Ｆ格式。 ＨＣＣ标志物ＧＰ７３（分子量４５３３３．２４ Ｄａ）相对应。２３９９７ Ｄａ
１．４．４．２泳道／条带轨迹定量法选择“Ｌａｎｅ．Ａｕｔｏ Ｆｒａｍｅ 与Ｋｏｋ等。ｎ研究得出的ＨＣＣ标志物Ｍｎ－ＳＯＤ（分子量
ｌａｎｅｓ”自动识别出每条电泳泳道的位置；或“Ｌａｎｅ．Ｅｄｉｔ ２４７２２ Ｄａ）相对应。１８８１２ Ｄａ与Ｐｏｏｎ等‘８４研究得出的ＨＣＣ
Ｆｒａｍｅ”对泳道框架位置、大小等进行调节。选择 标志物ＶＥＧＦ（分子量１８９９７．７１ Ｄａ）相对应。１７１３５ Ｄａ与
“Ｌａｎｅ—Ｌａｎｅ Ｂａｃｋｇｒｏｕｄ…”，弹出“Ｌａｎｅ Ｂａｃｋｇｒｏｕｄ Ｓｕｂｓｔｒｕｃ． ＤＧ Ｗａｒｄ等一。研究得出的ＨＣＣ标志物ＮＹ－ＥＳＯ．１（分子量
ｔｉｏｎ”，点击“Ａｌｌ Ｌａｎｅｓ”对所有泳道进行一次性处理，在 １７９９２．４０ Ｄａ）相对应。１４０２４ Ｄａ与ＤＧ Ｗａｒｄ等一。研究得出
“Ｒｏｌｌｉｎｇ Ｄｉｓｋ Ｓｉｚｅ”中填上一个合适的值，点击“Ｄｏｎｅ”按钮。 的ＨＣＣ标志物ＬＡＧＥ－ｌ（分子量１４８０３．７５ Ｄａ）相对应。
选择“Ｂａｎｄ．Ｄｅｔｅｃｔ Ｂａｎｄｓ…”，弹出“Ｄｅｔｅｃｔ Ｂａｎｄｓ”，钩选 １２５９３ Ｄａ与ＤＧ Ｗａｒｄ等‘９。研究得出的ＨＣＣ标志物
“ＡＵ”．使用“Ｌａｎｅ Ｗｉｄｔｈ”调整Ｂａｎｄｓ识别的宽度。在 １３－２．ｍｏｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（分子量１３７１４．５７ Ｄａ）相对应。１ １２６１ Ｄａ
“Ｍａｔｃｈ－Ｓｔａｎｄａｒｄ”中弹出“Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ”，选择“Ｎｅｗ 与Ｆａｂｉｏ等。”。研究得出的ＨＣＣ标志物Ｉｎｔｅｄｅｕｋｉｎ－８（分子量
Ｓｔａｎｄａｒｄ”在“Ｓｔａｎｄａｒｄ”菜单中输入Ｍａｒｋｅｒ的分子量。点击 １１０９８．１２ Ｄａ）相对应。结果表明，Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ软件可用于
“Ｔｙｐｅ”下面的小箭头。执行“Ｍａｔｃｈ．Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｃｕｒｖｅ”，点击 分析电泳结果。
万方数据

3. 目《 ２０ｉＩ｝：月里』立＃Ｉ自
｛：三曼量－曼！！兰量 茎叠曼曼圣曼Ｉ受鼍
ｉ ■■蔷■墨皇薯■ 三■■■●■●●●
『《， Ｈ４
０”＊∞ｍ女ｍ…ｒ．ｓｍ－ｐＡＧＥ。ｕ＃目ｌ～Ｆ…ｌ∞ｈ≈Ｒｕｌｅｒ＆ｎ¨＊＆（”ｒⅥ２０Ｄ１５０１２０１００・
ｇｌｕ“ｐ……ＴｆｉｃｉＭ
Ⅲｌ～目４：Ⅲ＃ｍＩ一３２
ｇｌ＂００ｌｕｍａＩ…１ｗｌ”’Ｐｈ０㈣。Ｅ…１＿＿Ｉ ｈｔ删
８５ ７０６０ ５０∞．３０ Ｍ ２０１５．１０１ １４☆Ⅱ．＊ｍｍｉ自镕％ｍ＊“｝《Ⅲ自“№《＂ＭＭ”＊，ｌ＃§ｎ日∞３６ ｍ∥｝｝
４：Ｅｊｗｌｎ】山ｍ“例ｍ
２５．Ⅲ１５，１０）㈨ｈ¨¨小９…ｆ ｃｈ ｏ呷ｈｏ岬。“…ｐ”
（：ｈ８ｎＩ ｏｆ Ｎ¨ｊ一１２ ｄ ｈｅ．１ｉｂ ｓｌ】｝Ｐ＾ｆ，Ｅ
ｐｎ．¨ｉ１（舢ｈｖｕｋ…ｌ“Ｌ瑚Ｉ ５０，１２０ Ｉ∞“＂“ｊⅢ４０ ３０
兰；；＿ｔｔｔｔＩ
二Ｉ；Ｉｍｌｌｌ
目５ 目６
一：皇■；棚
一．：一＝＝一ｊ
目７
Ｉ ｌ
兰ＩＩ二＝ ｌ▲ 譬■ Ｉ－■ Ｉ■ Ｉ Ｉ■
ｄ ５一目ｑ～Ⅲ＊ｍ１—３１９”“∞Ｍｇ ｒｍ卅Ｈｍ．ｆ，Ｍ；Ｅ’Ｕ＃ｍ Ｉ自ｈ山ｓｌ～∥Ｈｕｌ．－ｒ女Ｄ“ｍ—ｊ《”ｆⅥ２∞１５０１ ２０
Ｉ（”∞７０ ｍⅣＩ∞３０ ２５ ２０ １５．１０）２４～Ｈ｜日∞Ⅲｌ＊＊ｍｍ∞￥＃『Ｉｍｎ自，ｍⅣＢ９ｒ＿Ｈ＃Ｂ Ｌ＃目ｒ｛ｆ＾”３６ ｍ∥”
９一Ｅｌ”。ｐｈｕｍ‘”“Ⅲ…ｆ
ｃ｝ｌａｍ ｒ－１一ｊ２＿・ｆ…Ⅲｃ…¨ｉ１｝Ⅲ帅ｂｉａｍ．ｍ删－ｓ路一ｐＡＩ：Ｅ ｄｌ”‰ｊｕｍ¨Ｉ…ｅｌ“Ｉ＿１ｈｕｍｌｕＰ“】ｏｌ
～ｌＩａ“ｍ“ｉｎ（ｍ１．１ｆ＿‘山…ｉｇｌＩｄｍ
ｌｌＨＩｌ㈣ｔｃ……Ｉ・－ｒ ｈ。咖“ＨｌｌｒＴＩｔ＾ｆ ｃｎｈ¨ｌ＿“删ｈ，ｌｍＩｊｎ¨『州…ｌｈ‘ｌ’ｎ’【＿＿ｌ”’¨…ｌ｛ｌ…，ｔ＊…㈣１ｐｋｗ卅ｒｌＨｌｎｌ小ｍ。一ｍ
１Ｍｌ ｄ）Ｈ｝加Ⅻ２５
１２０ Ｉ∞８ｓ ７０ ２０ １５ ＩＵ）“－ｌｕｍｎｔ２—９
万方数据

4. ４ Ｉｎｔｅｒｎａ／Ｍａ／／ｃｂｗ，Ｃｈ／ｎａ．Ｆｅｂ．２０１ １．ＶｏＬ ６．月钒ｌ
３讨论 应，４５５１２ Ｄａ与ＳＣＣＡ、ＴＧＦ一１３１、ＧＰ７３相对应。在这种对应
中，基本每条条带所得到的分子量比这些蛋白真正的分子
凝胶扫描成电泳图片时要求有一个较高的分辨率，为
量均小一些，但差值很小，在３．２％范围。这个误差可能是
尽量使凝胶上的每个条带清晰可见，本研究选择了９６００的
由于电泳和条带数据化的误差所致。该方法具有适用于大
分辨率。软件自动识别泳道、条带，这就要求泳道、条带直
量临床样本的初筛，具有节约成本、重复性好、所需时间短、
且分界清楚，在上样时我们做到上样量的统一及适中，在进
所需设备要求低的优点。因此，我们认为该模型是完全可
行到脱色这一步时，我们发现用脱色液２（１０％醋酸）浸泡
以应用于大样本蛋白组学差异初步筛查。
凝胶，脱色后所得的凝胶上半部分较下半部分宽大，整个胶
图胀为一上宽下窄的梯形，泳道随之倾斜，相同分子量条带 参考文献
不处于同一直线上，扫描后的胶图泳道、条带软件几乎不能
［１］ 中国抗癌协会肝癌专业委员会．原发性肝癌的临床诊断与分期
识别，需要手动建立，且条带相对位置发生变化。用１０％醋
标准［Ｊ］．中华肝脏病杂志，２００ｌ，９（６）：３２４．
酸浸泡凝胶至底色呈现浅蓝色后，再换用脱色液１浸泡至
［２］Ｒｅｎ Ｙ，Ｃａｎ Ｂ，Ｌａｗ ｓ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｐａｔｏｅｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｃａｎｃｅｒ
底色干净，对脱色步骤进行如上改良后，凝胶脱色不仅彻底 ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｅ ｆａｅｔｏｍ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：ａ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｍｌｌｌ＇ｋｅｒ
而且为一标准长方形，软件自动识别泳道及条带过程顺利， ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ
最大程度的消除了人为因素的影响。分子量的预测首先建 Ｒｅｓ．２００５，１１（１７）：６１９０—６１９７．
［３］ｓｐａｄａｍ Ａ，Ａｊｅｉｉｏ ａ１．Ｓｅｒｕｍ ｅｈｒｏｍｏｓｒａｎｉｎ－Ａ ｉｎ ｈｅｐ－
立在泳道和条带都已经创建好的基础上。而后人为一些泳 Ａ．Ｍｏｒａｃｅ Ｃ。ｅｌ
ａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｕｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｌｉｍｉｍ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓ－
道上的条带加上一个已知的标准，通过不同泳道和条带之
ｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ。２００５，１１（１３）：１９８７—１９９０．
间的对比绘制回归曲线，通过回归曲线的走向进而预测特
［４］ＧｉａｎｎｅＨｉ Ｇ，Ｍａｒｉｎｏｓｃｉ Ｆ，Ｔｒｅｍｔｏｌｉ Ｐ，ｅｔ ａ１．ＳＣＣＡ ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｍｂｉｎｅｄ
定条带上的分子量。我们还可在一次电泳中多跑几条不同
ｗｉｔｈ ａｌｐｈａ—ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｓ
ｓｅｒｏｌｏｇｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ＨＣＣ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，
分子量成分的ｍａｒｋｅｒ，通过不同ｍａｒｋｅｒ之间的相互校正，减
２００５，ｉ１７（３）：５０６—５０９．
少分子量的误差，提高预测的分子量的准确性。此外，不同
［５］Ｓｏｎｇ ＢＣ，ＣｈｕｎｇＹＨ。Ｋｉｍ ＪＡ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈｆａｅｔｏｒ－ｂｅｔａｌ
的凝胶预测得到的相同位置的条带分子量也不尽相同。为 ８８ ａ ｕｓｅｆｕｌ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃ ｎｌＫｔｒｋｅｒ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｈｅｐａｔｏｃｅｉｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．
此，我们对所有凝胶经过校正后得到的分子量进行统计，取 Ｃａｎｃｅｒ，２００２，９４（１）：１７５—１８０．
其平均值。Ｍａｒｋｅｒ除了分子量确定外，还有浓度的具体说 ［６】Ｍａｒｒｅｗ ＪＡ，Ｒｏｍａｎｏ ＰＲ．Ｎｉｋｏｔａｅｖａ Ｏ，ｅｔ ａ１．ＧＰ７３，ａ ｒｅｓｉｄｅｎｔ ＧｏＩｇｉ
明，所以ｍａｒｋｅｒ不仅可用于分子量的测定，还可用于计算每 ＃ｙｅｏｐｒｏｍｉｎ。ｉｓ ａ ｎｏｖｅｌ ８ｅｒｌｌｍ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｈｅｐａｔｏｅｅＵｕｌａｒ ｃａｌ＿ｃｉｎｏｎｗ，
个泳道条带的灰度值。在计算条带灰度值时，Ｑｕａｎｔｉｔｙｏｎｅ ［Ｊ］．Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ，２００５，４３（６）：１００７—１０１２．
［７］Ｌｏｏｉ ＫＳ，Ｎａｋａｙａｓｕ Ｅｓ，Ｄｓｅｚ ＲＡ，ｅｔ ａ１．Ｕｓｉｎｇ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔＯ
软件可自动选定条带的灰度范围或者在软件无法自动识别
ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｏｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ ａ８ ｎｕｌｒｋｅｌ＇ｓ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｅｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｅｉ—
的时候进行手动选择，软件可以自动去掉凝胶背景颜色以
ｎｏｍａ［Ｊ］．Ｊ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｏｓ，２００８，７（９）：４００４—４０１２．
消除各凝胶因染色脱色不同而引起灰度值的差异。为了得
［８］Ｐｏｏｎ ＲＴ，Ｈｏ ＪＷ，Ｔ０ｎｇ ＣＳ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ∞ｍｍ
到更精确的条带灰度值，减少软件在自动或手动框定条带 ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｅｎｄｅｓｔａｔｉｎ ｉｎ ｗｉｔｈ
ｐａｔｉｅｎｔｓ
范围时产生的误差，我们除了采用ｍａｒｋｅｒ的部分条带灰度
ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｂｒ Ｊ Ｓｔａｇ，２００４。９１（１０）：１３５４一
值建立标准曲线外，部分还用于数据输出后的校正调节。 １３６０．
本研究对各３２份的健康体检者和肝癌患者血清进行 ［９］ＩＸ；Ｗａｒｄ。Ｙ Ｃｈｅｎｇ，Ｇ Ｎ ７Ｋｏｎｔｃｈｏｕ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｐｏｓｔ－ｔ胁
了蛋白质差异比较研究。将两组比较，选择差异有统计学 ｒｔｍｎｔ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ＨＣＣ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ∞ｍ“ｐｒｏｔｅｏｍｅ【Ｊ］．Ｂｒｉｔｉｓｈ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，２００６，９５（１０）：１３７９—１３８３．
意义的蛋白分子量与已经发现的特别是目前临床上得到广
［１０］Ｇｒｉｚｚｉ Ｆ，Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｉｎｉ Ｂ．Ｈａｍｆｉｃｋ Ｃ，ｅｌ：ａ１．Ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ ｏｆｃａｎｃｅｒ．ｔｅｓ－
泛认可的原发性肝细胞癌血清肿瘤标志物进行比较，所得
ｔｌｓ ａｎｔｉｇｅｎｓ ａｓ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｐａｔｏ－
到的１０条差异带中，除１条的分子量为４０１２４ Ｄａ找不到相
ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。２００７。５：
对应分子量的标志物。其余的９条，分子量分别为８１６６４
３．
Ｄａ、４９６５ｌ Ｄａ、２３９９７ Ｄａ、１８８１２ Ｄａ、１７１３５ Ｄａ、１４０２４ Ｄａ、
（收稿日期：２０１０．１０－２５修回日期：２０１０—１２—１０）
１２５９３ Ｄａ、１１２６ｌ Ｄａ分别与ＨＧＦ、ＣｇＡ、Ｍｎ．ＳＯＤ、ＶＥＧＦ
、ＮＹ．ＥＳＯ．１、ＬＡＧＥ．１、１３－２一Ｍｏｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－８相对
万方数据

5. 一维凝胶电泳图谱数字化定量比较法的建立及验证
作者： 胡蝶飞， 李国坚， 吴继周， 臧宁， 宁秋悦， HU Die-fei， LI Guo-jian， WU Ji-zhou
， ZANG Ning， NING Qiu-yue
作者单位： 广西医科大学第一附属医院感染性疾病科,南宁市,530022
刊名： 内科
英文刊名： CHINESE MEDICAL DIGEST INTERNAL MEDICINE
年，卷(期)： 2011,06(1)
参考文献(10条)
1.Grizzi F;Franceschini B;Hamrick C Usefulness of cancer-testis antigens as biomarkers for the
diagnosis and treatment of hepatocellular carcinoma[外文期刊] 2007
2.DG Ward;Y Cheng;G N′Kontchou Preclinical and post-treatment changes in the HCC-associated serum
proteome 2006(10)
3.Poon RT;Ho JW;Tong CS Prognostic significance of serum vascular endothelial growth factor and
endostatin in patients with hepatocellular carcinoma[外文期刊] 2004(10)
4.Looi KS;Nakayasu ES;Dsaz RA Using proteomic approach to identify tumor-associated antigens as
markers in hepatocellular carcinoma[外文期刊] 2008(09)
5.Marrero JA;Romano PR;Nikolaeva O GP73,a resident Golgi glycoprotein,is a novel serum marker for
hepatocellular carcinoma[外文期刊] 2005(06)
6.Song BC;Chung YH;Kim JA Transforming growth factor-beta1 as a useful serologic marker of small
hepatocellular carcinoma 2002(01)
7.Giannelli G;Marinosci F;Trerotoli P SCCA antigen combined with alpha-fetoprotein as serologic
markers of HCC[外文期刊] 2005(03)
8.Spadaro A;Ajello A;Morace C Serum chromogranin-A in hepatocellular carcinoma:Diagnostic utility
and limits[外文期刊] 2005(13)
9.Ren Y;Cao B;Law S Hepatocyte growth factor promotes cancer cell migration and angiogenic factors
expression:a prognostic marker of human esophageal squamous cell carcinomas[外文期刊] 2005(17)
10.中国抗癌协会肝癌专业委员会 原发性肝癌的临床诊断与分期标准[期刊论文]-中华肝脏病杂志 2001(06)
本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgyxwz-nkxfc201101001.aspx