1. USA:
Livingston, NJ
Europe:
Barcelona, Spain
Oxford, UK
Hamburg, Germany
Asia:
Kobe, Japan
South America:
Lima, Peru
PGD: an overview
SSaannttiiaaggoo MMuunnnnéé

2. IInnddiiccaattiioonnss ttoo bbee ddiissccuusssseedd::
11.. PPGGDD ffoorr aaddvvaanncceedd mmaatteerrnnaall aaggee
22.. PPGGDD ffoorr rreeccuurrrreenntt pprreeggnnaannccyy lloossss
33.. PPGGDD ffoorr ttrraannssllooccaattiioonnss
44.. PPGGDD ffoorr ggeennee ddeeffeeccttss

3. PPGGDD ffoorr aaddvvaanncceedd mmaatteerrnnaall aaggee:: ssuummmmaarryy
- a High rate of chromosome abbnnoorrmmaalliittiieess iinn eemmbbrryyooss
- HHyyppootthheessiiss:: PPGGDD sshhoouulldd iimmpprroovvee AARRTT oouuttccoommee
- RReessuullttss aarree nnoott ccoonnssiisstteenntt
- PPrrooppoosseedd rreeaassoonnss:: aa)) MMoossaaiicciissmm
bb)) SSeellff--ccoorrrreeccttiioonn
cc)) BBiiooppssyy ddaammaaggee
dd)) MMeetthhooddss uusseedd
-- OOppttiimmiizzeedd mmeetthhooddss ccaann pprroodduuccee ggoooodd rreessuullttss
- NNeeww mmeetthhooddss ((CCGGHH,, aaCCGGHH)) mmaayy pprroodduuccee bbeetttteerr rreessuullttss
- NNeeww mmeetthhooddss ccaann aallssoo bbee uusseedd ffoorr ggeennee ddeeffeecctt ddeetteeccttiioonn

4. HHiigghh rraatteess ooff
CChhrroommoossoommee aabbnnoorrmmaalliittiieess

5. TThhee mmaajjoorriittyy ooff eemmbbrryyooss wwiitthh ‘‘ggoooodd’’
mmoorrpphhoollooggyy aarree cchhrroommoossoommaallllyy aabbnnoorrmmaall
% chromosomally
abnormal embryos
56%
Maternal age
Morphology:
embryos analyzed: 6054. Morphologically normal embryos: 33775511.. SSoouurrccee:: MMuunnnnéé eett aall.. 22000077..
SSiimmiillaarr rreessuullttss aallssoo ffoouunndd bbyy MMuunnnnee eett aall 11999955,, MMaarrqquueezz eett aall.. 22000000,, MMaaggllii eett aall.. 22000077..

6. Trisomy 21

7. Despite llaarrggee ssttuuddiieess iinnddiiccaattiinngg tthhee
aaddvvaannttaaggeess ooff aanneeuuppllooiiddyy ssccrreeeenniinngg,, tthhee
nnoottiioonn tthhaatt PPGGSS ffoorr iinnffeerrttiilliittyy iiss bbeenneeffiicciiaall iiss
nnoott yyeett sshhaarreedd uunniiffoorrmmllyy..

8. CCoonnttrraaddiiccttiinngg PPGGDD rreessuullttss
uussiinngg ddaayy 33 bbiiooppssyy aanndd FFIISSHH
Positive effect
Gianaroli et al. 1999
Munne et al 1999
Gianaroli et al 2001a
Gianaroli et al. 2001b
Munne et al. 2003
Gianaroli et al. 2004
Munne et al. 2005
Munne et al 2006
Verlinsky et al. 2005
Colls et al. 2007
Garrisi et al. 2009
Rubio et al. 2009
No effect (small)
Werlin et al. 2003
Jansen et al. 2008
Mersereau et al. 2008
Schoolcraft et al. 2009
No effect (Large)
Staessen et al. 2004
Platteau et al. 2005
Negative effect
Mastenbroek et al. 2007
Hardarson et al. 2008

9. CCoonnttrraaddiiccttiinngg PPGGDD rreessuullttss
uussiinngg ddaayy 33 bbiiooppssyy aanndd FFIISSHH
Proposed explanations:
1) Mosaicism
2) Embryo biopsy damage
3) Sub-optimal PGD methods

10. MMoossaaiicciissmm

11. MMoossaaiicciissmm pprroodduucceess <<77%% mmiissddiiaaggnnoossiiss
592 embryos found abnormal by PGD were rreeaannaallyyzzeedd aanndd ffoouunndd ttoo bbee::
3[13]1[16]2[18]1[21]3[22] 1[13]1[16]1[18]1[21]1[22]
nnoorrmmaall 1133
mmoossaaiicc <<4499%% aabbnnoorrmmaall 2277
mmoossaaiicc 5500--9999%% aabbnnoorrmmaall 112244
mmoossaaiicc 110000%% aabbnnoorrmmaall 229977
hhoommooggeenneeoouussllyy aabbnnoorrmmaall 113311
CCoollllss eett aall.. ((22000077))
1[13]1[16]2[18]2[21]1[22]
2[13]1[16]2[18]2[21]2[22]
1[13]1[16]2[18]2[21]1[22]
3[13]1[16]2[18]1[21]3[22]
2[13]1[16]2[18]1[21]1[22]
1[16] 2[13]2[16]2[18]2[21]2[22]
2[13]3[18]1[21]1[22]
66..88%%

12. CClliinniiccaall mmiissddiiaaggnnoossiiss
The FISH eerrrroorr ooff tthhee aassssaayy ttrraannssllaatteess iinnttoo aa
cclliinniiccaall mmiissddiiaaggnnoossiiss rraattee ooff 00..55%%
NNEEGGAATTIIVVEE PPRREEDDIICCTTIIVVEE VVAALLUUEE:: 9999..55%%
- DDaattaa ffrroomm >>115500 IIVVFF cceenntteerrss rreeffeerrrriinngg ttoo RReepprrooggeenneettiiccss
- 1100 aanneeuuppllooiidd aabboorrttiioonnss ooff 22114488 iimmppllaanntteedd ffeettuusseess
-- AAvveerraaggee mmaatteerrnnaall aaggee == 3377 yyeeaarrss

13. RReeaassoonnss ffoorr
CCoonnttrraaddiiccttoorryy rreessuullttss::
NNoott ooppttiimmiizzeedd mmeetthhooddss

14. OOppttiimmaall PPGGSS mmeetthhooddss
OOppttiimmaall PPGGSS QQuueessttiioonnaabbllee PPGGSS
BBiiooppssyy mmeeddiiaa wwiitthh aammiinnooaacciiddss ssiimmppllee mmeeddiiaa
BBiiooppssyy ttiimmee // eemmbbrryyoo 11 mmiinn >> 55 mmiinn
## cceellllss bbiiooppssiieedd oonnee ttwwoo
FFiixxaattiioonn mmeetthhoodd CCaarrnnooyy’’ss TTwweeeenn 2200
## cchhrroommoossoommeess tteesstteedd ≥≥88 £66
## aannaallyyssttss // ccaassee 22 11
UUssee ooff NNRRRR** yyeess nnoo
LLaarrggee eexxppeerriieennccee yyeess nnoo
EErrrroorr rraattee <<1100%% 1100--5500%%
NNuummbbeerr ooff zzyyggootteess >>55 £ 55
*NRR: No result rescue, or re-testing of dubious chromosome with different probes.

15. “ The data presented here clearly indicates that two cell
biopsy significantly impacts clinical outcome. Our
previous report providing no arguments in favour of PGS
(Staessen et al., 2004) was criticised by others arguing
that PGS might have been beneficial if only one cell had
been removed (Cohen et al., 2007). In respect to the
present findings, this criticism seems justified”.
P < 0.001
TTwwoo cceellll bbiiooppssyy iiss ddeettrriimmeennttaall

16. SSttuuddiieess uussiinngg ttwwoo--cceellll bbiiooppssyy
Implantation Staessen et al. (2004):
11.5%
17.1%
CONTROL 2-CELLS
BIOPSIED
Staessen et al (2004)
- No significant differences
- But 2 cells biopsied

17. PPGGDD ffoorr AAMMAA:: rraannddoommiizzeedd ssttuuddiieess
MMaasstteennbbrrooeekk eett aall.. ((22000077))
11)) 2200%% ooff ccyycclleess uunnddiiaaggnnoosseedd ((lliitteerraattuurree:: 11--33%% ooff eemmbbrryyooss *))
22)) 5599%% iimmppllaannttaattiioonn rreedduuccttiioonn dduuee ttoo bbiiooppssyy::
iimmppllaannttaattiioonn
5599%% rreedduuccttiioonn
CCoonnttrrooll 1144..77%%
BBiiooppssiieedd,, nnoo PPGGDD 66..00%%
BBiiooppssiieedd aanndd PPGGDD 116..88%%
33)) AAvveerraaggee nnuummbbeerr ooff eemmbbrryyooss aannaallyyzzeedd wwaass oonnllyy 55
44)) CChhrroommoossoommeess 1155 aanndd 2222 ((2211%% aabbnnoorrmmaalliittiieess)) nnoott aannaallyyzzeedd
* 1% Gianaroli et al. (2004), 3.1% Colls et al. (2007)

18. OOppttiimmaall ffiixxaattiioonn mmeetthhooddss
OOppttiimmaall mmeetthhoodd:: mmooddiiffiieedd CCaarrnnooyy’’ss
• PPrroovviiddeess llaarrggeesstt nnuucclleeaarr ddiiaammeetteerr
• TThhee lleeaasstt oovveerrllaappss
• TThhee lloowweesstt eerrrroorr ((1100%% vvss.. 3300%%))
Velilla et al. 2002 Twin 20 method Carnoy’s method

19. p13
p12
p11.2
q11.2
q21
q22.1
q22.2
q22.3
p13
p12
p11.2
q11.2
q21
q22.1
q22.2
q22.3
Colls et al. (2007)
Probe
LSI 21
Probe
Tel 21q
NNoo RReessuulltt RReessccuuee ((NNRRRR)):: aalltteerrnnaattiivvee--llooccuuss
pprroobbeess ttoo rreessoollvvee uunncclleeaarr rreessuullttss

20. NNoo RReessuulltt RReessccuuee ((NNRRRR)):: aalltteerrnnaattiivvee--llooccuuss
pprroobbeess ttoo rreessoollvvee uunncclleeaarr rreessuullttss
NNoo FFaallssee ++
RReessuullttss EErrrroorrss
WWiitthhoouutt NNRRRR 77..55%% 77..22%%
NNRRRR 33..22%% 44..77%%
NNRRRR:: NNoo RReessuulltt RReessccuuee,, ffrroomm:: CCoollllss eett aall.. ((22000077))

21. EErrrroorr rraattee sshhoouulldd bbee <<100%%
Analysis of remaining cceellllss ooff eemmbbrryyooss pprreevviioouussllyy aannaallyyzzeedd bbyy PPGGDD::
ssttuuddyy eerrrroorr rraattee
BBaaaarrtt eett aall 22000044 5500..00%%
LLii eett aall.. 22000055 4400..00%%
GGlleeiicchheerr eett aall.. 22000099 1155--2200%%
MMuunnnnee eett aall.. 22000022 77..22%%
CCoollllss eett aall..,, 22000077 44..77%%
MMaaggllii eett aall.. 22000077 33..77%%

22. NNuummbbeerr ooff cchhrroommoossoommeess aannaallyyzzeedd
AAtt lleeaasstt 99 cchhrroommoossoommeess sshhoouulldd bbee tteesstteedd::
## cchhrroommoossoommeess %% aabbnnoorrmmaall
aannaallyyzzeedd ffeettuusseess ddeetteeccttaabbllee
55 2288%%
66 4477%%
99 7700%%
1122 8800%%
2244 110000%%

23. PPGGDD rreessuullttss uussiinngg
ooppttiimmiizzeedd mmeetthhooddss

24. P<0.001
SSiiggnniiffiiccaanntt rreedduuccttiioonn iinn
TTrriissoommiicc ooffffsspprriinngg
Aneuploidy rates for chromosomes X,Y,13,18,21. Munne et al. 2006 and Reprogenetics data up
to 10/2007. Average age 37, Observed: Based on 2300 pregnancies after PGD, Expected: Eiben et
al. 1994. Observed and expected adjusted by maternal ages

25. IImmpprroovveedd iimmppllaannttaattiioonn rraattee
AAfftteerr PPGGDD
Gianaroli 1999 Munne 2003
Control PGS Control PGS
Gianaroli et al 1999 Munne et al. 2003
# cases 135 127 103 103
Mean age 36 36 40 40
Fetal heart 12% 24% 10% 20%
P<0.001 P<0.005
Prospective matched studies. Chromosomes aannaallyyzzeedd:: XX,,YY,,1133,,1188,,2211 ++ 1155,,1166,,2222

26. PPrreeggnnaannccyy lloossss iinn IIVVFF
3399..44%%
SART-ASRM (2005)
5533..33%%
1133..33%%
1177..77%%
2266..22%%

27. RReedduuccttiioonn iinn pprreeggnnaannccyy
lloossss aafftteerr PPGGDD
Munne et al.
P <0.05 P <0.001

28. OOnnggooiinngg pprreeggnnaannccyy rraatteess aafftteerr PPGGDD::
DDaattaa ffrroomm ffiivvee IIVVFF cceenntteerrss
Controls PGD
Clinic cycles Loss
rate
Live
birth
cycles Loss
rate
Live
birth
1 505 27% 35% 70 22% 40%
2 210 36% 14% 72 27% 15%
3 1204 34% 12% 120 15% 23%
4 509 29% 15% 236 26% 22%
5 191 25% 17% 208 16% 25%
Total 2619 30%a 18%b 706 21%a 24%b
Patients 38-42, FISH with 9-probes, 1 cell biopsied, SART data of 5 centers with >10%
PGD cases, 2003-2005, Munné et al. (2007) SART; a= p<0.01 b= p<0.001

29. PPGGDD ffoorr RReeccuurrrreenntt
PPrreeggnnaannccyy LLoossss ((RRPPLL))

30. BBAACCKKGGRROOUUNNDD OOFF RRPPLL
• Defined as 33 oorr mmoorree lloosstt pprreeggnnaanncciieess
• IItt ooccccuurrss iinn 11%% ooff ffeerrttiillee ppooppuullaattiioonn
• AAttttrriibbuutteedd ttoo aannaattoommiicc,, eennddooccrriinnee,,
iimmmmuunnoollooggiiccaall oorr ggeenneettiicc pprroobblleemmss bbuutt ……
• ……>>5500%% ooff RRPPLL ccaasseess aarree UUNNEEXXPPLLAAIINNEEDD

31. AAllll ccoonnttrroolllleedd PPGGDD ssttuuddiieess oonn iiddiiooppaatthhiicc
RRPPLL sshhooww aa ddeeccrreeaassee iinn mmiissccaarrrriiaaggeess
Idiopathic RPL :
• Werlin L, et al. (2003) Preimplantation genetic diagnosis (PGD) as both a
therapeutic and diagnostic tool in assisted reproductive technology. Fertil Steril,
80:467
• Munné et al. (2005) Preimplantation genetic diagnosis reduces pregnancy loss in
women 35 and older with a history of recurrent miscarriages. Fertil Steril 84:331
• Munné et al. (2006) PGD for recurrent pregnancy loss can be effective in all age
groups. Abstract PGDIS
• Garrisi et al. (2008) Preimplantation genetic diagnosis (PGD) effectively reduces
idiopathic recurrent pregnancy loss (RPL) among patients with up to 5 previous
consecutive miscarriages after natural conceptions. Fertil. Steril in press
• Rubio et al. (in press) Prognosis factors for Preimplantation Genetic Screening
in repeated pregnancy loss. Reprod Biomed Online, in press

32. NN==112222
WWiitthh ≥≥33
pprreevviioouuss
lloosssseess
8%
85% 89%
44%
39%
16% 12%
33%
P<0.05 P<0.001 P<0.001
94%
**MMuunnnnéé eett aall.. 22000055 aanndd uunnppuubblliisshheedd ddaattaa,, ****BBrriigghhaamm eett aall.. 11999999
**
*
RReedduuccttiioonn iinn mmiissccaarrrriiaaggeess
iinn RRPPLL aafftteerr PPGGDD

33. RReedduuccttiioonn iinn mmiissccaarrrriiaaggeess
iinn RRPPLL aafftteerr PPGGDD
accordi PGD results accordinngg ttoo pprreevviioouuss nnuummbbeerr ooff mmiissccaarrrriiaaggeess
## pprreevviioouuss %% lloossss %% lloossss
mmiissccaarrrriiaaggeess ccyycclleess eexxppeecctteedd aafftteerr PPGGDD
22 7766 3311%% 1133%% NNSS
33--55 117799 4400%% 1144%% pp<<00..002255
>>55 2244 4488%% 2299%% NNSS
GGaarrrriissii eett aall.. ((22000088))

34. RReedduuccttiioonn iinn mmiissccaarrrriiaaggeess
iinn RRPPLL aafftteerr PPGGDD
accordi PGD results accordinngg ttoo aaggee wwhheenn pprreevviioouuss nnuummbbeerr ooff
mmiissccaarrrriiaaggeess iiss 33--55
mmaatteerrnnaall %% lloossss %% lloossss
aaggee ccyycclleess eexxppeecctteedd aafftteerr PPGGDD
<<3388 8833 3366%% 1144%% pp<<00..0055
≥≥3388 9966 4444%% 1144%% pp<<00..000055
GGaarrrriissii eett aall.. ((22000088))

35. RReedduuccttiioonn iinn mmiissccaarrrriiaaggeess
iinn RRPPLL aafftteerr PPGGDD
PPGGDD rreessuullttss aaccccoorrddiinngg ttoo ffeerrttiilliittyy
mmeetthhoodd ccyycclleess %% lloossss %% lloossss %%
ccoonncceeppttiioonn eexxppeecctteedd aafftteerr PPGGDD pp ttoo tteerrmm
IIVVFF 111155 3355%% 1144%% pp<<00..0011 3344%%
nnaattuurraall 112244 4411%% 1155%% pp<<00..000055 3377%%
AAvveerraaggee mmaatteerrnnaall aaggee:: 3377..55
GGaarrrriissii eett aall.. ((22000088))

36. AAllll PPGGDD ssttuuddiieess oonn RRPPLL ffoorr ttrraannssllooccaattiioonnss
sshhooww aa ddeeccrreeaassee iinn mmiissccaarrrriiaaggeess
RPL due to translocations:
• Munné et al (1998). Spontaneous abortions are reduced after pre-conception
diagnosis of translocations. J Assited Reprod Genet 290:
• Munné S et al. (2000) Outcome of Preimplantation Genetic Diagnosis of
translocations. Fertil Steril. 73:1209
• Verlinsky et al. (2005) Preimplantation testing for chromosomal disorders improves
reproductive outcome of poor prognosis patients. Reprod Biomed Online 11:219
• Munné S (2006) Preimplantation genetic diagnosis for translocations. Hum Reprod 21:839
• Otani et al.(2006) Preimplantation genetic diagnosis significantly improves the
pregnancy outcome of translocation carriers with a history of recurrent
miscarriage and failing to produce a live birth. Reprod Biomed Online 13: 879

37. PPGGDD ffoorr ttrraannssllooccaattiioonnss iiss bbeetttteerr ooppttiioonn
tthhaann nnaattuurraall ccyyccllee
PPaattiieennttss ssuucccceessssffuull RRiisskk ooff ttiimmee
pprreeggnnaanncciieess mmiissccaarrrriiaaggee ffrraammee
((ccuummuullaattiivvee))
wwiitthh PPGGDD
11 4433 3333%% 1177%% 11..44 ccyycclleess ((<<44 mmoonntthhss))
22 220000 2266%% 1111 %% 11..44 ccyycclleess ((<<44 mmoonntthhss))
33 5522 5522%% 1188%% 11..44 ccyycclleess ((<<44 mmoonntthhss))
wwiitthhoouutt PPGGDD
44 4477 3322%% 6688%% 1111..55 mmoonntthhss
55 4477 6688%% 6655%% 2233..33 mmoonntthhss
66 4411 7744%% 2266%% 66 yyeeaarrss
77 2288 6644%% 3388%% 44..22 yyeeaarrss
11:: LLiimm eett aall.. ((22000044)),, 22:: MMuunnnnee eett aall.. ((22000066dd)) aanndd uunnppuubblliisshheedd,, 33:: OOttaannii eett aall.. ((22000066)) aanndd uunnppuubblliisshheedd rreessuullttss,, 44:: SSuuggiiuurraa--
OOggaassaawwaarraa eett aall.. ((22000044))((aa)),, 55:: SSuuggiiuurraa--OOggaassaawwaarraa eett aall.. ((22000044))((bb)),, 66:: GGooddddjjiinn eett aall ((22000044))((ee));; 77:: SStteepphheennssoonn aanndd ssiieerrrraa ((22000066))

38. SSttrraatteeggiieess ffoorr ffuullll
cchhrroommoossoommee ccoouunntt

39. DDiiffffeerreenntt ssttrraatteeggiieess ffoorr
AAnnaallyyzziinngg aallll cchhrroommoossoommeess
• SSeeqquueennttiiaall FFIISSHH wwiitthh 2244 pprroobbeess
• CCoommppaarraattiivvee GGeennoommee HHyybbrriiddiizzaattiioonn ((CCGGHH))
• AArrrraayy CCGGHH
• SSiinnggllee NNuucclleeoottiiddee PPoollyymmoorrpphhiissmm ((SSNNPP)) aarrrraayy
– IInntteerrpprreettaattiioonn:: ssttaannddaarrdd
– IInntteerrpprreettaattiioonn:: bbiiooiinnffoorrmmaattiiccss
– IInntteerrpprreettaattiioonn:: KKaarryyoommaappppiinngg

40. CCoommppaarraattiivvee GGeennoommee
HHyybbrriiddiizzaattiioonn ((CCGGHH))
• TTeecchhnniiqquuee rreellaatteedd ttoo FFIISSHH
• AAlllloowwss tthhee ccooppyy nnuummbbeerr ooff eevveerryy cchhrroommoossoommee ttoo bbee ddeetteerrmmiinneedd
TTeesstt DDNNAA NNoorrmmaall DDNNAA
NNoorrmmaall TTrriissoommyy MMoonnoossoommyy
Kallioniemi et al. (1992), applied to single cells by Wells et al. (1999)

41. CCGGHH oonn bbllaassttooccyysstt bbiiooppssiieess::
AAddvvaannttaaggeess
Disadvantages:
-Time consuming: requires embryo freezing
Advantages:
- Reduced impact of embryo biopsy
- More cells biopsied: more robust diagnosis
- Less risk of mosaicism misdiagnosis
- 100% detected aneuploidies
- No need for fixing cells or testing parental DNA

42. 2244 cchhrroommoossoommee aannaallyyssiiss iinn
bbllaassttooccyysstt bbiiooppssiieess:: cclliinniiccaall rreessuullttss
CCyycclleess MMaatt.. PPrreevv.. eemmbbrryyooss pprreeggnnaannccyy iimmppllaanntt..
aaggee ffaaiilleedd rreeppllaacceedd rraattee rraattee
ccyycclleess
TTeesstt :: 7700 3377..77 22..44 22..00 8811%% 6622%%
ccoonnttrrooll :: 227722 3377..11 11..22 22..77 5577%% 3355%%
pp<<00..00000011 pp<<00..000011
SScchhoooollccrraafftt eett aall.. ((22000099,, AASSRRMM))

43. CCGGHH--bbaasseedd DDNNAA
MMiiccrrooaarrrraayy ((aaCCGGHH))
Test
DNA
Normal
DNA
2700 probes
Same band resolution as karyotype

44. 47,XY+2

45. aaCCGGHH aaddvvaannttaaggeess
• aaCCGGHH RReessuullttss iinn 2244 hhoouurrss,, aalllloowwiinngg eeiitthheerr PPBB,, ddaayy 33 oorr
bbllaassttooccyysstt bbiiooppssyy
• ppaarreennttaall DDNNAA nnoott nneeeeddeedd:: pprroocceedduurree ccaann bbee ddeecciiddeedd oonn
ssaammee ddaayy ooff bbiiooppssyy
• IIss qquuaannttiittaattiivvee ddeetteeccttiinngg mmiittoottiicc--oorriiggiinn aanneeuuppllooiiddyy aanndd
MMIIII mmiittoottiicc eerrrroorrss wwiitthhoouutt ccrroossssiinngg--oovveerr ((SSNNPP aarrrraayy
mmeetthhooddss tthhaatt aarree oonnllyy qquuaalliittaattiivvee ddoo nnoott ddeetteecctt tthheemm))..

46. DDeetteeccttiioonn ooff aabbnnoorrmmaalliittiieess::
aaCCGGHH ddeetteecctteedd 5500%% mmoorree aabbnnoorrmmaalliittiieess tthhaann FFIISSHH--1122 aanndd 2200%%
mmoorree aabbnnoorrmmaall eemmbbrryyooss ((CCoollllss eett aall.. 22000099))
46,XX-10 +16
aaCCGGHH vvss FFIISSHH--1122

47. aaCCGGHH vvaalliiddaattiioonn:: eerrrroorr rraattee
• VVaalliiddaattiioonn mmeetthhoodd:: RReeaannaallyyssiiss ooff tthhee rreesstt ooff tthhee eemmbbrryyoo
bbyy FFIISSHH wwiitthh 1122 cchhrroommoossoommeess pplluuss tthhoossee ffoouunndd aabbnnoorrmmaall
bbyy aaCCGGHH
• EErrrroorr rraattee ((bbiiooppssyy ddaayy 33)):: 66%% ((ssaammee aass eexxppeecctteedd bbyy
mmoossaaiicciissmm))
• CCeellllss wwiitthh nnoo rreessuullttss:: 11%%

48. SSNNPP aanndd CCNNPP aarrrraayyss::
FFoorr ddiiaaggnnoossiiss ooff aanneeuuppllooiiddyy

49. WWhhaatt aarree SSNNPPss??
• SNP: Single NNuucclleeoottiiddee PPoollyymmoorrpphhiissmm
• TThheeyy aarree nnoorrmmaallllyy ooccccuurrrriinngg ggeenneettiicc vvaarriiaanntt
• 11,,88554,,000000 iiddeennttiiffiieedd ssoo ffaarr
• 9999%% iinnhheerriitteedd
MMiiccrrooaarrrraayy EExxaammppllee::
AAffffiimmeettrriixx SSNNPP 66..00 cchhiipp ccaann mmeeaassuurree
ssiimmuullttaanneeoouussllyy 990000,,000000 SSNNPPss aanndd CCNNPPss aatt
11..88 mmiilllliioonn ggeennoommee llooccaattiioonnss

50. AAnnaallyyssiiss wwiitthh kkaarryyoommaappppiinngg::
HHaannddyyssiiddee’’ tteeaamm
• SNP array method based on mapping crossovers between
parental haplotypes
• Requires previous genotyping of parents and family
member(s) with SNP arrays
• Mendelian analysis of parental and grandparental
haplotypes
• Construction of karyomaps identifying the parental and
grandparental origin of each chromosome or chromosome
segment in each embryo
• Developed by Handyside, Thornhill, Harton, Mariani, Affara
and Griffin
Slide adapted from A.Handyside

51. Monosomia 11
Trisomia 21

52. CCoommppaarriissoonn ooff
ddiiffffeerreenntt aapppprrooaacchheess

53. CCoommppaarriissoonn ooff ppllaattffoorrmmss
FFIISSHH 1122 CCGGHH aarrrraayy SSNNPP
pprroobbeess CCGGHH aarrrraayyss
DDaayy 33 bbiiooppssyy// ddaayy 55 rreessuullttss yyeess nnoo yyeess yyeess
PPaarreennttaall DDNNAA nneeeeddeedd nnoo nnoo nnoo yyeess
DDeetteecctt ggeennee ddeeffeeccttss nnoo nnoo nnoo yyeess
DDeetteecctt ppoollyyppllooiiddyy ((rriisskk eerrrroorr)) yyeess nnoo ((00..22%%)) nnoo ((00..22%%)) yyeess
DDeetteecctt MMIIII eerrrroorrss ww//oo ccrroossssoovveerr yyeess yyeess yyeess nnoo??
DDeetteecctt mmiittoottiicc eerrrroorrss yyeess yyeess yyeess nnoo??
EErrrroorr rraattee 77%% 88%% 66%% uunnkk
NNoo RReessuullttss RRaattee 33..22%% 99%% 00%% uunnkk
IInnccrreeaasseedd iimmppllaannttaattiioonn rraattee ++ ++ ++ ++ uunnkk uunnkk
RReepprrooggeenneettiiccss ddaattaa..

54. BBiiooppssyy AAnnaallyyssiiss ccyyccllee iimmppllaannttaattiioonn CCoommmmeennttss tteeaamm
ddaayy rreeppllaacceedd iimmpprroovveemmeenntt
PPBB FFIISSHH ssaammee ++ oonnllyy MMII aanndd MMIIII aabbnnoorrmmaalliittiieess RRGGII
PPBB CCGGHH ssaammee ++ aapppplliieedd ttoo yyoouunngg ddoonnoorrss SShheerr
ddaayy 33 FFIISSHH ssaammee ++ 99-1122 cchhrroommoossoommeess,, 55%% eerrrroorrss RReepprrooggeenneettiiccss
ddaayy 33 FFIISSHH ssaammee ++ 99-1122 cchhrroommoossoommeess,, 55%% eerrrroorrss SSIISSMMEErr
ddaayy 33 FFIISSHH ssaammee -- -- -- -- sseevveerree bbiiooppssyy ddaammaaggee,, eettcc,, eettcc MMaasstteennbbrrooeekk
ddaayy 33 CCGGHH ssaammee ++ // - SShheerr
ddaayy 33 aaCCGGHH ssaammee pprree-cclliinniiccaall RReepprrooggeenneettiiccss
ddaayy 33 SSNNPP aarrrraayy ssaammee pprree-cclliinniiccaall SSoommee MMIIII eerrrroorrss,, mmiittoottiicc nnoott RRMMAA // BBrriiddggee
ddeetteecctteedd?? KKeeaarrnnss // GGSSNN
bbllaassttooccyysstt FFIISSHH ssaammee ++ // - 55 pprroobbeess// ssccoorriinngg ttoooo ssttrriinnggeenntt?? SSyyddnneeyy IIVVFF
bbllaassttooccyysstt CCGGHH nneexxtt ++ ++ ++ BBEESSTT RREESSUULLTTSS SSOO FFAARR RReepprrooggeenneettiiccss //
SScchhoooollccrraafftt
WWhhaatt mmaatttteerrss mmoosstt??
BBiiooppssyy oorr iinnffoorrmmaattiioonn qquuaalliittyy??

55. PPGGDD ffoorr
ggeennee ddeeffeeccttss

56. PPGGDD ffoorr ggeennee ddiissoorrddeerrss
We can do PGD for any disease with known mutation
Disease tested: Acetil Co Oxidase type I defficiency, Adrenoleucodistrophy, Alpha-thalassemia, Alport syndrome,
Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease (ADPKD), Autosomal Recesive Polycystic Kidney Disease (ARPKD),
Beta-thalassemia, Branchio-Oto-Renal syndrome (BOR), BRCA1 breast cancer predisposition, BRCA2 breast cancer
predisposition, CanavanCharcot-Marie-Tooth type IA (CMT1a), Choroideremia, Congenital adrenal hyperplasia (CAH),
Congenital neutropenia, Connexin 26 hearing loss, Cystic fibrosis, Duchenne/Becker Muscular Dystrophy (DMD),
Ectrodactyly, Ectodermal dysplasia, and Cleft lip/palate syndrome (EEC1), Fabry Disease, Familial adenomatous poliposis
coli (FAP), Familial dysautonomia, Familial intrahepatic cholestasis 2, Fanconi anemia, Fragile site mental retardation ,
Gangliosidosis type 1 (GM1), Gaucher disease, Glomuvenous malformations (GVM), Glycogen-storage disease type I
(GSD1), Glycosylation type 1C, Hemoglobin SC disease, Hemophilia A, Hemophilia B, Hereditary nonpolyposis colon
cancer (HNPCC), Hereditary pancreatitis, HLA matching Huntington disease, Hurler syndrome, Hypophosphatasia,
Incontinential pigmenti, Krabbe disease (Globoid cell leukodystrophy), Long QT syndrome, Marfan syndrome, Meckle
gruber, Metachromatic leukodystrophy (MLD), Methylmalonic aciduria cblC type (MMACHC), Myotonic Dystrophy 1,
Myotubular myopathy, Neurofibromatosis 1, Neurofibromatosis 2, Niemann-Pick Disease, Noonan syndrome,
Oculocutaneous albinism 1 (OCA1), Ornithine carbamoyltransferase deficiency (OTC), Osteogenesis Imperfecta 1, Rapp
Hodgkin ectodermal dysplasia, Retinitis pigmentosa, Retinoblastoma, Sickle Cell Anemia, Smith-Lemli-Opitz syndrome
(SLOS), Spinal bulbar muscular atrophy (SBMA), Spinal Muscular Atrophy Type 1 (SMA1), Tay Sachs, Tuberous
sclerosis 1 (TSC1), Tuberous sclerosis 2 (TSC2), Von Hippel-Lindau Syndrome (vHL), X-linked dominant Charcot–Marie–
Tooth (CMTX), etc…… (see review Gutierrez et al. (2008))

57. CCoonnvveennttiioonnaall aapppprrooaacchh ttoo PPGGDD ooff ggeennee
ddeeffeeccttss ttoo aavvooiidd AAlllleellee DDrroopp OOuutt ((AADDOO))
aaccccuurraattee
aammpplliiffiiccaattiioonn
ooff bbootthh llooccii
AADDOO aaffffeeccttiinngg
nnoorrmmaall aalllleellee
AADDOO aaffffeeccttiinngg
mmuuttaattiioonn ssiittee
MMuuttaattiioonn ssiittee
PPoollyymmoorrpphhiicc
ssiittee

58. MMaatteerrnnaall DDNNAA
PPaatteerrnnaall DDNNAA
PPoossssiibbllee
eemmbbrryyoo
ggeennoottyyppeess
CCoonnttaammiinnaattiioonn
MMaatteerrnnaall ccoonnttaammiinnaanntt
((ee..gg.. ccuummuulluuss cceellll))
UUnnkknnoowwnn ccoonnttaammiinnaanntt
((ee..gg.. sskkiinn cceellllss ffrroomm
llaabb ssttaaffff))
DDNNAA ffiinnggeerrpprriinnttiinngg aaggaaiinnsstt ccoonnttaammiinnaattiioonn

59. Detection of gene mutations by SNP arrays
Gene mutation
♂ ♀
Slide adapted from A.Handyside

60. SSaannttiiaaggoo MMuunnnnéé,, PPhhDD,, DDiirreeccttoorr
JJaaccqquueess CCoohheenn,, PPhhDD,, DDiirreeccttoorr
UUSSAA
PPeerree CCoollllss,, PPhhDD
DDaaggaann WWeellllss,, PPhhDD
GGeeoorrggee PPiieecczzeenniikk,, PPhhDD
CCrriissttiinnaa GGuuttiiéérrrreezz,, PPhhDD
JJoorrggee SSaanncchheezz,, PPhhDD
JJoohhnn ZZhheenngg,, MMDD
TToommaass EEssccuuddeerroo,, MMSS
KKeellllyy KKeetttteerrssoonn,, MMSS
JJiillll FFiisscchheerr,, MMSS
JJeessssiiccaa VVeeggaa,, MMSS
TTiimm SScchhiimmmmeell,, BBSS
SSaasshhaa SSaaddoowwyy,, BBSS
SSoopphhiiaa TToorrmmaassii,, BBSS
NN--nneekkaa GGooooddaallll,, BBSS
RReennaattaa PPrraatteess,, BBSS
PPiieeddaadd GGaarrzzoonn
LLaauurriiee FFeerrrraarraa
BBeekkkkaa SSeelllloonn--WWrriigghhtt
MMaarriiaa FFeellddhhaauuss
mmuunnnnee@@rreepprrooggeenneettiiccss..ccoomm
wwwwww..rreepprrooggeenneettiiccss..ccoomm
SSppaaiinn
MMiirreeiiaa SSaannddaalliinnaass,, MMSS
CCaarrlleess GGiimméénneezz,, PPhhDD
CCééssaarr AArrjjoonnaa,, MMSS
AAnnaa JJiimméénneezz,, PPhhDD
EElleennaa GGaarrcciiaa,, MMSS
JJaappaann
TTeettssuuoo OOttaannii,, MMDD
MMuurriieell RRoocchhee
MMiihhoo MMiizzuuiikkee
UUKK
DDaaggaann WWeellllss,, PPhhDD
EEllppiiddaa FFrraaggoouullii,, PPhhDD
SSaammeerr AAllffaarraawwaattii,, MMSS
SSoouutthh AAmmeerriiccaa
PPaauull LLooppeezz,, BBSS
LLuuiiss AAllbbeerrttoo GGuuzzmmaann,, BBSS
FFrraanncciissccoo PPaarreerraa,, PPhhDD
GGeerrmmaannyy
KKaarrsstteenn HHeelldd,, MMDD