1) The plasma membrane ganglioside sialidase (PMGS) regulates neural development and regeneration by modifying plasma membrane ganglioside levels.
2) Overexpression of PMGS enhances axon growth both in vitro and in the presence of myelin inhibitors by altering membrane composition, including increased GM1 and ceramide levels and redistribution of receptors between lipid rafts and other domains.
3) PMGS may overcome myelin inhibition of axon growth by modifying membrane signaling through changes in ganglioside and lipid composition.
El documento analiza la noción de animalidad en el pensamiento de Nietzsche y su relación con la biopolítica. Sostiene que para Nietzsche la vida es voluntad de poder, que genera constantemente formas de vida. El ideal ascético surge de la necesidad de proteger una vida que degenera, creando una autoinmunización. Aunque niega la vida, el ideal ascético la conserva, haciendo que la vida se sirva de él para persistir. De este modo, Nietzsche ofrece aportes para pensar modos de relación con lo viv
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La fotografía se desarrolló a partir de varios descubrimientos e invenciones clave entre 1816 y 1840. En 1816, Niépce obtuvo la primera imagen fotográfica, aunque imperfecta. En 1839, Daguerre presentó el daguerrotipo, un procedimiento fiable para capturar imágenes. En 1840, Talbot desarrolló el proceso del calotipo que producía negativos y positivos. En 1842, Herschel introdujo el término "negativo" y "positivo" para describir las imágenes.
Exposición a vibraciones globales en maquinaria de obra pública, estudio de s...Miguel Angel Silva Asenjo
Este documento presenta los resultados de un estudio sobre la exposición a vibraciones en maquinaria de obra pública. Se midieron las vibraciones en diversos tipos de maquinaria pertenecientes a 4 empresas y se analizaron parámetros como la aceleración, la edad de la maquinaria, el peso y la potencia. Los resultados mostraron que algunas máquinas superaban los límites de exposición, y que factores como la edad y el peso/potencia afectaban a los niveles de vibración. Se concluyó que era necesario mejorar las
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My talk presenting my thesis work per invitation of Research and Development Division of Genzyme Corporation to the Lipid Storage Disorders Department. October 5, 2007. Boston, MA: "Sphingosine 1-phosphate Receptor Subtype Influence over Glioblastoma Multiforme Pathology". My PhD was earned through the Integrated Biomedical Sciences, September 2007, The Ohio State University, College of Medicine Columbus, OH. Area of focus for my PhD: Biochemical and Molecular Disease Mechanisms. Dissertation title: Sphingosine 1-phosphate Receptor Subtype Influence Over Glioblastoma Multiforme Malignant Behavior"
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1) PPARα plays a major role in intestinal fatty acid sensing and regulates target genes in response to unsaturated and monounsaturated fatty acids.
2) Genes involved in dietary lipid metabolism are regulated longitudinally along the intestine in response to PPARα activation.
3) The intestine responds to different doses of dietary fat in a robust and concentration-dependent manner by differentially regulating lipid metabolism genes.
4) Saturated fat stimulates obesity and hepatic steatosis by enhancing overflow of dietary fat to the distal intestine, affecting gut microbiota composition.
5)
The document summarizes Craig Karr's presentation on drug discovery tools for glycobiologists given at the Cambridge Healthtech Institute Glycomics conference in April 2004. Karr discussed a high throughput biochemistry approach to drug discovery using parallel target discovery and screening efforts. This includes developing a platform to rapidly profile and deorphan novel glycosyltransferase targets derived from glycomics using peptide arrays and enzymatic assays. Validation results were shown for several human glycosyltransferases.
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Rho GTPases as regulators of morphological neuroplasticityFatih University
Rho GTPases play a key role in regulating neuronal morphology by mediating interactions between cell adhesion molecules and the cytoskeleton. Specifically, Rho inhibits neurite extension while Rac and Cdc42 promote neurite outgrowth and dendritic spine formation. In glial cells, Rho GTPases are involved in myelination by oligodendrocytes and Schwann cells. The role of RhoA in particular contributes to the inhibitory environment of the CNS that prevents axon regeneration.
El lunes y martes 20 y 21 de noviembre coordinamos un simposio internacional en la Fundación Ramón Areces, sobre los defectos del transporte de aminoácidos.
2. • So far it has been shown that :
• 1)Plasma Membrane Ganglioside Sialidase (PMGS / Neu3)
PMGS is localized asymmetrically in non-polarized early stage neurons.
is the unique enzyme that specifically hydrolyzes cytoskeleton
This determines a specific neurite as the future axon, by actin
remodeling via the inhibition of RhoA pathway in a PI3K-Rac1-dependent
oligosialogangliosides to produce GM1 in the plasma
manner.
membrane.
2) inhibition of PMGS lowers membrane GM1 levels and retards axonal growth
Hasegawa, T., et al., J Biol Chem, 2000. 275(19): p. 14778.
Miyagi, T., et al., J Biol Chem, 1999. 274(8): p. 5004-11.
3) PMGS over-expression enhances GM1 levels261(1): p. 21-7. accelerates axonal
Wada, T., et al., Biochem Biophys Res Commun, 1999. and notably
growth
• The modulation of the PMGS activity is able to modify the
endogenous levels of plasma membrane GM1 in neurons,
as shown in previous works from our lab.
Rodriguez J.A. et al., J Neurosci, 2001. 21(21): p. 8387-95
Da Silva J.S. et al., Nat. Neurosc., 2005 .8 : p. 606-15
3. CNS does not regenerate spontaneously after injury.
Loss of function
1. Reduced capacity of injured neurons to induce axonal re-growth.
More than 70% of axons from PMGS over-expressing neurons
regenerate after transection in vitro while, less than 25% of control
axons, do so.
Control
OE PMGS
4. CNS does not regenerate spontaneously after injury.
Loss of function
1. Reduced capacity of injured neurons to induce axonal re-growth.
2. Formation of a non-permissive barrier for axonal progression.
3. Presence of specific inhibitory factors as:
Myelin-associated inhibitors:
- MAG
- Nogo
- OMgp
- Sem3A
Extra-cellular Matrix associated Glial Scar components:
- CSPG
5. Are axons of PMGS over-
Is PMGS a tool for axon regeneration
expressing neurons able to
in the presence of an inhibitory
grow across surfaces covered
environment ?
with either myelin
or its derived factors?
6. Axons of PMGS over-expressing neurons can grow across
myelin-covered surfaces
Crude Myelin Mature Oligodendrocytes
Control
Control
OE PMGS-HA
OE PMGS-HA
7. Axons of PMGS over-expressing neurons can grow in the presence of
myelin-derived inhibitors (Mag and Sem3A)
140
C ont r ol Ov er ex p. P M GS *
120
Tub
*
*
100
Axon length (µm)
80
60
40 ** **
20
HA
0
Untreated + Mag-Fc + Sem3A
Untreated + Mag-Fc + Sem3A
OE-PMGS
8. PMGS over-expression enhances axonal growth in
the presence of myelin inhibitors.
Which is the mechanism underlying this effect?
9. MY ELIN-ASSOCIATED INHIBITORS
Nogo Glial
MAG Scar
Oligo OMgp
Nogo 66
NiG
EGFR ? PMGS TrkA
NgR p75
GD1a
? GM1
GT1b
GTP
Neuron
RhoA P
Ca2+
PI3K
GDP
RhoA
GROWTH ENHANCEMENT
GROWTH INHIBITION
AND REGENERATION
GDP GTP
Rac1 Rac1
10. The PC12 model
NGF stimulation differentiates PC12 to a “neuron
like” phenotype and this differentiation is delayed
by contact with myelin extracts.
These cells express p75, NgR, TrkA and EGFR,
signaling proteins target of our study.
We generated a PC12 clone stably expressing
PMGS-HA to study its effect in axon growth
inhibition.
11. PMGS-HA PC12 are able to differentiate in presence of myelin
PC12 on PLL PC12 on Myelin
48 hrs
PC12 WT or
PMGS-HA
In DMEM
NO FCS/HS
+ NGF
100 ng/ml
PMGS-HA PC12 on PLL PMGS-HA PC12 on Myelin
12. PMGS-HA PC12 are able to differentiate in presence of myelin
PC12 on PLL PC12 on Myelin
72 hrs
PC12 WT or
PMGS-HA
In DMEM
NO FCS/HS
+ NGF
100 ng/ml
PMGS-HA PC12 on PLL PMGS-HA PC12 on Myelin
13. To study the mechanism by which PMGS overcomes
inhibition, we have focused on :
1. Changes on membrane composition :
- gangliosides
- other lipids
2. Receptor re-organization in membrane domains :
- binding of inhibitors
- receptor localization in/out raft domains
15. Raft
9
8
7
6
5
4
3
2
WT
PC
Fractions
CL 12
ON CLO
E# NE
WT 2+ #
PC Ma 2
12 g- F
CL on c
ON My
GT1b
E# elin
2o
nM
yel
in
WT
PC
CL CL 1
ON ON 2
E
#2 E
WT + M #2
PC ag-
12 Fc
CL on
GD1a/b
ON My
E# elin
2o
nM
yel
in
WT
P
CL C L C 12
ON
E # ON E
WT 2+ #2
enhancement of GM1 in raft fractions
PC Ma
12 g- F
CL on c
ON My
GM1a
E# elin
2o
PMGS induces the reduction of GT1b and the
nM
yel
in
16. PMGS increases the amount of Ceramides and Diacylglycerol
Ceramide WT PC12 PMGS-HA PC12
WT PC12 PMGS-HA PC12
1,0
0,8
Cer
0,6
Quantity in a.u.
0,4
rl
rl
n
n
Cer
GF
GF
Ct
Ct
eli
eli
My
My
+N
+N
0,2
0,0
C NGF M
Diacylglycerol
100
Quantity in a.u. 80
60
40
20
A
G
WT
-H
0
DA
GS
WT PMGS-HA
PM
17. PMGS increases the amount of two main raft lipids:
Sphingomyelin and Phosphatidyl-Choline
WT PC12 PMGS-HA PC12
PC
SM
SM
PC
PLL Myelin PLL Myelin
Phosphatidyl-Choline Sphingomyelin
100 100
80 Quantity in a.u. 80
60
Quantity in a.u.
60
40 40
20 20
0 0
WT WTM PMGS-HA PMGS-HA M WT WT M PMGS-HA PMGS-HA M
18. Cholesterol is increased in PMGS-HA PC12
ug of cholesterol / ug of protein
3,50
WT = 100 % 3,30
#2 = +8,93%
3,10
Chol = +10,31%
2,90
WT + 2.0 MCD = -7,56%
2,70
WT + 2.5 MCD = -7,22%
2,50
wt clone chol 2 MCD 2.5 MCD
3,6
ug of cholesterol / ug of protein
3,4
3,2
3,0
WT PMGS-HA NeuAc2en
19. MY ELIN-ASSOCIATED INHIBITORS
Nogo Glial
MAG Scar
Oligo OMgp
Nogo 66
NiG
EGFR ? PMGS TrkA
NgR p75
GD1a
? GM1
GT1b
GTP
Neuron
RhoA P
Ca2+
PI3K
GDP
RhoA
GROWTH ENHANCEMENT
GROWTH INHIBITION
AND REGENERATION
GDP GTP
Rac1 Rac1
20. Raft
9
8
7
6
5
4
3
2
Fractions
WT
PC
12
CL
CL O NE
ON #2
E #2+
WT Ch
+2m ol
Binding
Mβ
MC
D
WT
PC
12
CL
CL ON
ON E#
E 2
#2+
p75
WT Ch
+2 m ol
Mag-Fc
Mβ
MC
D
WT
PC
12
CL
CL ON
ON E#
E 2
#2+
WT Ch
GT1b
+2 m ol
Mβ
MC
D
Mag binding is reduced in PMGS-HA PC12
23. Conclusions
4.- The binding of the inhibitory molecules Mag-Fc and CSPG
1.- ThePMGS-HA-PC12 raft membrane fractionsneurons enhances axonal growth in
to over-expression of PMGS in rat hippocampal is reduced.
the presence of myelin-producing oligodendrocytes, myelin extracts, myelin-derived growth
inhibitors (Mag, Sem3A) and CSPG.
5.- The content of Mag receptors (GT1b and p75) and of CSPG effector
2.-(pEGFR) in line stably expressing active PMGS-HA has been produced. These cells
A PC12 cell membrane fractions is rearranged.
grow long axon-like neurites after NGF stimulation, even in the presence of inhibitory myelin
extracts.
6.- Both p75 and NgR localization in rafts is reduced in PMGS-HA PC12
and the effect is more evident in the presence of Myelin.
3.- The lipidic composition of PMGS-HA PC12 membrane is altered:
a) PMGS-HA-PC12 show a higher content of PMGS product GM1, and
We propose that thesubstrata GD1a and GT1b. overcomes axon
a reduced content of its effect of PMGS activity
growth inhibition by changing the membrane composition. This
b) PMGS-HA-PC12 present a modest increase in the levels of other
reducesceramide, sphingomyelin, phosphatidyl-choline and
lipids as the binding of myelin inhibitors and disorganizes the
diacylglycerol.
interactions of their receptors, disturbing intracellular inhibitory
c) Membrane cholesterol is moderately increased in PMGS-HA-PC12.
signaling and allowing axon extension.
This effect is rescued by PMGS activity inhibitors.
24. I would like to thank……
Josè Abad-Rodriguez Carlos G. Dotti
Ferdinando Di Cunto
Bianca, Etienne, Lola, Fabian, Eva, Jorge, Vanessa, Sven,
Froylan, Federica, Simona, Laura, Giulia, Flavio, Cristian, Iva,
Villy, Mauricio, Aga, Enrico, Gaia, Paola, Marta, Federico,
Ylenia, Serena, Enzo, Stefania
For giving me the chance to live such an exciting
experience across different labs and countries and to do
science in such a great way!!!