1. ENXEÑERÍA XENÉTICA

2. ¿Que é a enxeñería xenética? Un conxunto de técnicas que permiten manipular o xenoma dun ser vivo, é dicir: - Introducir - Eliminar - Modificar Xenes dun xenoma

3. ¿Cales son as principais técnicas que emprega a enxeñería xenética? A tecnoloxía do ADN recombinante A secuenciación do ADN A reacción en cadea da polimerasa (PCR)

4. A tecnoloxía do ADN recombinante Permítenos illar e manipular un fragmento de ADN, ou sexa, un xene dun organismo, para introducilo noutro. Require encimas de restricción , auténticas tesouras moleculares utilizadas polas bacterias para defenderse dos virus.

5. ¿Como actúan as encimas de restricción? Recoñecen secuencias palindrómicas Cortan o ADN Se o corte é escalonado créanse extremos adhesivos ou pegañentos

6. ¿Que pasa se se corta ADN de especies diferentes coa mesma encima de restricción? Que os extremos pegañentos únense entre si e obtemos ADN recombinante : ADN formado por unión de dúas moléculas de ADN de dous organismos distintos

7. Vale, ¿ pero que se fai despois co ADN recombinante? Pódense producir organismos transxénicos , é dicir, organismos que portan xenes doutros seres vivos.

8. ¿Teñen algunha utilidade os organismos transxénicos? Si, por exemplo, mediante microrganismos modificados xeneticamente obtense: Insulina humana Hormona de crecemento humana Interferóns Vacinas Encimas de aplicación industrial

9. ¿Por onde empezamos para obter un organismo transxénico? Primeiro hai que obter un clono de xenes , é dicir un conxunto de xenes idénticos ó que nos interesa.

10. ¿Que pasos hai que seguir para clonar un xene e obter o seu produto? 1º) Identificar o xene que dirixe a produción da substancia desexada. 2º) Illar o xene do xenoma. 3º) Insertar o xene na molécula de ADN axeitada: obter ADN recombinante. 4º) Introducir o ADN co xene no organismo hospedador apropiado. 4ª) Detectar os individuos que conteñen e expresan o xene. 5ª) Purificar a substancia

11. ¿Mais como buscamos un xene nun cromosoma? Depende: - Se polo menos coñecemos parte da secuencia usaremos as técnicas de hibridación, con sondas de ADN ou de ARN. - Tamen podemos partir dun xenoma completo e facer unha biblioteca xénica.

12. Localización de fragmentos de ADN mediante unha sonda para hibridación

13. Construción dunha biblioteca xénica

14. ¿Hai outras maneiras de obter o fragmento de ADN que contén o xene? Hainas: A partir de ADN sintético Sintetizando ADNc a partir dun ARNm extraído da célula

15. ¿Cómo se pode obter ADN a partir do ARN mensaxeiro? Mediante unha encima presente nos retrovirus: A transcriptasa inversa.

16. ¿Que nome recibe o ADN obtido? ADN complementario (ADNc)

17. ¿Como debe ser o ADN no que se inserta o xene? Este ADN transportador, chamado VECTOR debe cumprir os seguintes requisitos: - Posuír unha orixe de replicación Levar xenes marcadores

18. ¿Que ADNs se usan como vectores? - Plásmidos (de orixe bacteriana) - ADN vírico - Cromosomas artificiais (eucariotas)

19. ¿Qué células serven de hospedadoras? Bacterias Lévedos Células animais Células vexetais

20. ¿E como se introduce o vector na célula hospedadora? Por transformación Por transdución Por electroporación Por inxección Mediante liposomas Mediante “pistola de xenes”

21. ¿Como comprobamos que o ADN recombinante entrou? Grazas os xenes marcadores: Por exemplo xenes de resistencia a antibióticos ou xenes de bioluminiscencia .

22. Selección de células hospedadoras que ñevan o xene clonado

23. A secuenciación do ADN Permítenos saber a orde ou secuencia dos nucleótidos que forman parte dun xene.

24. Protocolo inventado por Frederick Sanger para secuenciar ADN

25. Secuenciación do ADN

26. A reacción en cadea da polimerasa (PCR)(Kary Mullis, 1985) Permite duplicar un fragmento de ADN, un número ilimitado de veces, nun tubo de ensaio

27. ¿E iso para que serve? Para conseguir, a partir dunha mínima cantidade de mostra de ADN, toda a que se necesite para un determinado estudo.

28. ¿Cómo é a reacción? Un proceso cíclico que pode resumirse nestes pasos: Quentar Copiar Quentar Copiar Asi os ciclos que sexan necesarios

29. 1) Quentar a molécula de ADN para desnaturalizalo

30. 2) Cada febra será copiada pola Taq polimerasa (ADN polimerasa da bacteria Thermus aquaticus)

31. Resume da técnica de PCR

32. ¿Qué necesita a Taq para realizar a súa función? Cadea molde de ADN Mestura de desoxirribonucleótidos trifosfato Cebador (primer): pequeno fragmento de ADN complementario dun dos extremos da cadea molde