1. Круглый стол : «Стандартизация
технологии иммунофенотипирования
лимфоцитов методом проточной
цитометрии »
Ведущие: Хайдуков Сергей Валерьевич
Тотолян Арег Артемович
Пушкинские горы, 2013
Хайдуков С.В.,IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.

2. Что может привести к не
качественному анализу?
1. Отсутствие правильной настройки проточного
цитометра
Калибровка, разрешение, линейность, чувствительность
1. Отсутствие правильной настройки протоколов
анализа
Установки светорассеяния;
Дискриминатор;
Установки напряжения на фотоэлектронных умножителях (PMT)
Компенсация
• Некачественные или просроченные регенты
• Ошибки при подготовке образца для анализа
Взятие
Доставка и регистрация
Контроль образца перед началом работы
Изотипический контроль
Контроль методологии и процесса анализа
Хайдуков С.В.,IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.

3. Хайдуков С.В.,IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.

4. Хайдуков С.В.,IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.

5. «предпочтительным является исследование венозной
крови. Для скрининговых исследований у детей
допустимо использование капиллярной крови при условии
ее правильного взятия. Выявленные в капиллярной крови
диагностически значимые изменения должны быть
подтверждены исследованием венозной крови».
П.4.1 правила взятия образцов.
2 абзац. «Кровь для клинического анализа берут у
пациента из вены, у новорожденных — из пятки.»
П 4.2 Венозная кровь
Как быть со взятием крови для иммунофенотипа вместе с
проведением активационных тестов или фагоцитоза или кислородного
взрыва, или пролиферации, для которых ЭДТА не годится?
Для иммунофенотипирования клеток крови также возможно применение
гепарина. Это относится к тем случаям, когда помимо субпопуляционного
анализа в дальнейшем планируются исследования функциональной
активности клеток крови. Для подобных исследований именно гепарин, как
антикоагулянт, необходимо использовать для забора образцов крови.
… для гепарина 20 МЕ на мл.
Хайдуков С.В.,IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.

6. П.4.6. Проводить исследование образцов крови с К3-
ЭДТА рекомендуется не позднее 6 часов...
П.4.7. Исследование не проводится в случаях.....
«если кровь имеет любые видимые признаки
повреждения» или что-нибудь такое.»
П 4.9.1. Настройка цитометров.
В случаях, когда в технологией используемого
анализатора предусматривается возможность
автоматической настройки прибора, оператор
вправе выбирать предпочтительный для него
способ.
Иммунофенотипирование лимфоцитов рекомендуется проводить
не позднее 48 часов после взятия крови при условии правильного
хранения образца и выделения зоны лимфоцитов по экспрессии
CD45. В тех случаях, когда в лаборатории используют
двухцветную комбинацию флюорохромов и выделение зоны
лимфоцитов по морфологическим признакам, анализа образцов
следует провести в течении 8 часов. Если же планируется
отложенный подсчет лимфоцитов необходимо провести
окрашивание и фиксацию образцов сразу же после получения и
после этого сохранять их в холодильнике до анализа при 4оС не
более 24 часов.
Хайдуков С.В.,IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.

7. п.4.8 Методику с выделением на градиенте
плотности для данной процедуры предлагаем
совсем запретить
Вопрос — о методике определения
субпопуляционного состава лимфоцитов
костного мозга, ликвора, суставной жидкости,
плевральной жидкости и прочих биологических
жидкостей, включая взвеси клеток селезенки и
лимфоузлов не рассматривался, т.к. не входил
в условия написания данной
стандартизованной технологии
Хайдуков С.В.,IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.

8. СПАСИБО ЗА
ВНИМАНИЕ
Хайдуков С.В.,IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.