Fonament Activitat

1. Electroforesi sobre paper o acetat de cel.lulosa
En què consisteix?
És un mètode analític molt senzill utilitzat per a separar tant aminoàcids com
proteïnes. Les mostres a analitzar es col·loquen sobre un suport d'acetat de
cel·lulosa humitejat amb tampó a un determinat pH, aplicant sobre aquest suport
una diferència de potencial determinada entre el càtode i l'ànode ubicats en ambdós
extrems de la tira de paper, les mostres amb aminoàcids o proteïnes a separar
migraran cap a un pol o un altre del suport en funció de la seva càrrega, forma i
tamany. El procés, un cop acabat, es fa visible utilitzant colorants.
Per què se separen?
Tots els aminoàcids amb grup α- amino i grup carboxil, a més dels que tenen el
grup R ionitzable es comporten com àcids i bases en funció del pH del medi on es
trobin.
Així doncs, un aminoàcid com l'alanina dissolt en aigua el trobem com a àcid i com a
base:
Àcid
Base

2. Les substàncies que presenten aquesta propietat són amfotèriques. Un α-
aminoàcid com l'alanina, quan està totalment protonat, en realitat és un àcid
dipròtic; és a dir el seu grup amino i el seu grup carboxil han acceptat tots dos un
protó:
I com a àcid diprótic podrà ionitzar-se per a donar dos protons.
Per tant ja podeu començar a intuir què en funció del pH del tampó utilitzat, els
aminoàcids presentaran una càrrega elèctrica o una altra i que en aplicar un camp
elèctric aquests migraran cap a un pol elèctric o cap a un altre. Així doncs, a pH àcid,
el grup carboxil de l'alanina (àcid dipròtic) s'ionitzarà perdent un prtotó i a pH bàsic
el seu grup amino perdrà un segon protó.
La figura següent mostra la corba de valoració de la forma dipròtica de l'alanina:
La representació mostra les dues fases de valoració existents, la primera per el grup

3. COOH i la segona per el grup NH3+ de l'alanina partint de la seva valoració a pH 1.0
amb una dissolució de NaOH i fins a pH 14.
Al començament de la valoració, a pH 1, l'alanina es presenta totalment protonada
NH3+CHRCOOH ( R= CH3). En el punt mig de la primera fase de la valoració en la que
el grup carboxil de l'alanina perd el seu protó, les espècies presents que es troben en
el medi a parts iguals són el protó donador i el protó acceptor ( NH3+CHRCOOH i
NH3+CHRCOO-). Com que el pH del punt mig és 2,34, el grup carboxil de l'alanina té
un pK' de 2,34.
Quan la valoració amb NaOH continua s'arriba a un altre punt important a pH 6,02
on s'ha completat l'eliminació del primer protó i comença a separar-se el segon
protó, en aquest pH l'alanina es troba present en forma del su ió dipolar
NH3+CHRCOO-, forma de l'alanina que presenta una càrrega neta zero i que per tant
a un tampó de pH 6,02 encara que se li apliqués un camp elèctric no s'aconseguiria
moure-la cap a cap dels dos pols elèctrics. Aquest valor de pH característic és el punt
isoelèctric de l'alanina.El punt isoelèctric equival a la mitjana aritmètica dels dos pK '.
La segona fase de la corba de valoració correspon a l'eliminació del protó del grup
NH3+. En el punt mig existeixen a igual concentració les formes NH3+CHRCOO- i
NH2CHRCOO- a un pH de 9,69 que equival al pK' del grup -NH 3+ de l'alanina. La
valoració es completa a pH 12 on la forma predominant de l'alanina és NH2CHRCOO-
Activitat:
Sabent els punts isoelèctrics de l'albúmina (pH I 4.9) i el de les gamma globulines
( pH I 7,4) interpreta els resultats de l'electroforesi sobre actetat de cel.lulosa de les
diferents proteïnes sèriques.
Proteïna Composició en sèrum
Albúmina 54-62%
α- Globulina 9-15%
β- Globulina 8-13 %
γ- Globulina 14-19%
Quin és el diagnòstic clínic del teu pacient? És normal? Presenta cap anomalia?
Quina?

5. Bibliografia
Aminoàcids i proteïnes . Electroforesi
Lehninger
Patrons proteïnes plasmàtiques en acetat de cel.lulosa
Proteïnes plasmàtiques
http://www.uv.es/jcastell/Proteinas_plasmaticas.pdf
Simulador d'electroforesi en acetat de cel.lulosa
http://www.biorom.uma.es/contenido/biomodel/lab/acetato/sericas.htm