2. HELBURUA:
Lan honen helburua gibela batetik edota ziazerba batzuetatik DNA ateratzea da.
Txostenahonetangibelarenadibideaazaldukoduguetagibela batetik DNA lortzeko hurrengo
materiala erabili eta prozedura hau jarraitu dugu.
MATERIALA: Praktika hau aurrera eramateko hurrengo material hau erabili genuen:
Gibela (gure kasuan untxiarena) Hauspeatze-ontziak Saiodiak
Iragazkia Area eta morteroa Alkohola (96º C-koa)
Probeta Sodio kloruro (NaCl) 2 M Mistola
PROZEDURA:
3. Eginbeharrekolehengogauza,untxi gibelaerditikebakitzeaeta morteroan jartzea da.
Morteroan dagoen gibelari harea gehitu behar zaio (txikitzean mintzak puskatu ahal izateko
eta nukleoak aske geratzeko) eta gibela txikitu egin behar da.
Ondoren,50 ml ur botabehar da morteroan,gibelarekin eta harearekin nahastuz, eta
biziki astindu behar da pure antzeko zerbait lortzeko. Gero, iragazkia erabiliz nahaste hau
iragazi behar da zenbait alditan, harea nahastearen osagaietatik banatzeko. Banatutako
nahastea probeta batean jaso behar da, neurtu ahal izateko.
+
Lortutako nahasketa hauspeakin-ontzi batean jarri behar da eta, ondoren, bolumen
bera duen sodio kloruro 2 Mgehitu behar dira (honekin nukleoen eztanda lortzen dugu eta
kromatina zuntzak aske geratuko dira).
4. Hau egin eta gero, nahaste horri, 1 ml mistol gehitu behar zaio (garbigarriaria
proteinekin konplexu bat eratuko du eta DNAtik banatuko da, DNA aske uzten lortuz).
Ondoren, 50 ml alkohol 96 gehitubeharzaizkiopipetabatekinnahasteari.Hauegiteko,
alkoholapoliki-polikietahauspeakin-ontziarenparetetatikbotabeharda(honi esker,bi geruza
sortukodiraeta interfaseanDNA hauspeatutageratukoda).Pasuhonetanosogarrantzitsuada
alkohola,aurretikesandugunbezala,poliki-poliki botatzea,bi geruzahoriekahal den hoberen
sor daitezen.
Azkenik, lortutako nahasketa, beira-nahasgarri batekin birarazi egin behar da modu
mantso batean eta horrela geratu behar diren hiru geruzak lortuko ditugu; alegia, alkohol
geruza, iragaziaren geruza eta interfasearen geruza DNArekin.
ONDORIOA:
5. Azkenean lortutako nahaste honetan, proteinak eta koipeak beherantz joango dira,
hau da,ura dagoentokianedourgeruzankokatukodira,etaalkoholagoikaldean beste geruza
bat sortuko du. Bestalde, ADNa uraren eta alkoholaren tartean geldituko da, interfasea
deituriko geruza batean eta, ondorioz, errazago izango da DNA baztertzea eta aztertzea.
GALDERAK:
Nahasketan gatzabotatzenduguproteinakhauspeatuegiteko eta DNAtik banatu ahal
izateko. Gatzak proteinen disolbagarritasuna gutxitu egiten duelako gertatzen da fenomeno
hau.
Ontzi-garbigailua edo detergentea gibelaren ehun zelularrak apurtzeko erabili dugu.
Detergenteakoipeakdisolbatzen ditu eta mintz plasmatikoaren eta nukleo zelularren osagai
nagusia koipea denez mintz edo nukleo horiek apurtuko dira. Zelula mintzak apurtzerakoan
DNA kanporantz ateratzen da. Irabiagailua ere zelula mintza horiek puskatzen ditu.
DNA molekula luze eta konplexu bat da eta elkartzeko joera izaten du, honi esker
nahiko erraza izaten da DNA baztertzea. ADN hori isolatzeko alkoholaz baliatzen gara. DNA
uretandisolbagarriada,baina,alkoholabotatzendugunean,DNA hori interfaseankokatzenda,
ura eta alkoholaren geruzen artean. Honi esker, hau da, alkoholaren eraginari esker, ADNa
begi-bistaz ikusi dezakegu isolatuta. Horrez gain, alkoholak DNA beste osagai zelularretatik
banatzen du, azken hauek ur disoluzioan utziz.
Haragi-leuntzailea edo entzimak erabiliz zelulen proteinei eraso egiten zaie, horrela
puskatu egiten ditugu proteina horiek eta oso erraz banatzen dira DNAtik. Ondorioz,
errazagoa da DNA ikustea.
Nahaste hau egiteko ur hotza erabili genuen. Interneten bilatu ondoren, ur beroa
erabili beharzelaaurkitu genuen. Ur destilatua ere erabili daitekeela aurkitu genuen, ordea,
guk iturriko ura erabili genuen. Seguruenik desberdintasunak egongo dira baino oso txikiak,
beste nahaste batzuekin konparatuta berdin-berdinak baitirudite.
