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[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],METODI PER STUDIARE I MICRORGANISMI
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],METODI PER STUDIARE I MICRORGANISMI
I microrganismi ad occhi nudo: crescita in substrati liquidi Provette con e senza batteri
I microrganismi ad occhi nudo:  crescita in substrati solidi (piastre Petri) Coltura mista
Terreni di coltura  ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Terreni di coltura
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Terreni selettivi :  favoriscono la crescita di un particolare gruppo a scapito di altri. es.: terreno con antibiotico
Il terreno  agar-sangue  differenzia gli streptococchi emolitici dagli altri batteri. Terreni differenziali
MacConkey-Agar   differenzia i batteri  fermentanti il lattosio (es. coliformi) da quelli non fermentanti (es.  Citrobacter)  e patogeni enterici ( Salmonella  e  Shigella ). E’ un terreno  selettivo  e  differenziale : la presenza di sali biliari e cristal violetto inibisce la crescita dei gram-positivi. La presenza di lattosio e rosso fenolo (indicatore di pH) differenzia i gram-negativi fermentanti da quelli non fermentanti Enterobacter cloacae  :  lattosio fermentante.. colonie rosa Salmonella typhimurium Lattosio non fermentante Colonie senza colore Staphylococcus aureus non cresce
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],METODI PER STUDIARE I MICRORGANISMI
Sterilizzazione ,[object Object],Trattamento Temperatura Efficacia Incinerimento >500°C Tutto è “bruciato”…materiale patogeno ospedaliero e di laboratorio Bollitura 100°C 30 minuti di bollitura uccide le cellule vegetative, ma non le spore Tindalizzazione 100°C Per eliminare le spore si fanno cicli intermittenti di T, permettendo alle spore di germinare. A pressione in autoclave 121°C/20 minuti Si eliminano anche le spore. Per sterilizzare terreni e tamponi non termolabili. Calore a secco 160°C/2ore Per la vetreria Filtrazione mediante filtri. Utilizzata per sostanze termolabili (glucosio, vitamine). Non elimina i virus. Pastorizzazione 63°C/30 minuti Uccide: streptococci, staphylococci e  Mycobacterium tuberculosis Pastorizzazione 72°C/15 secondi Sterilizza e mantiene inalterate la qualità del latte
Autoclave Termostato  a secco
Filtrazione   ,[object Object]
filtrazione Pori del filtro Filtrazione
Terreni da autoclavare  (200 ml per banco): LB solido    1, 2, 8, 9, 10   E’ un terreno ricco avente tutti i fattori nutrizionali necessari per la crescita. Triptone 10 g Estratto di lievito  5 g NaCl 10 g H 2 O fino a 1l Agar  18 g  Sabouraud    6, 7 E’ u n terreno adatto per l’isolamento dei funghi. Peptone 10 g Glucosio  40 g H 2 O fino a 1l Agar  18 g  YEPD    3, 4 E’ un terreno adatto per la crescita dei lieviti. Peptone 20 g Estratto di lievito   10 g Glucosio  20 g H 2 O fino a 1l Agar  18 g  Skin Milk    5, 11 E’ un terreno che mette in evidenza l’attività proteolitica di alcuni batteri. Triptone   10 g Estratto di lievito  5 g NaCl   10 g H 2 O   fino a 1l Agar    18 g Latte magro 10%   1% (dopo sterilizzazione)
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],METODI PER STUDIARE I MICRORGANISMI
Unità di misura m   = 10 -6  m Nanometro   =  10 -9  m Angstrom (A°)   = 10 -10  m Picometro   = 10 -12  m ,[object Object],[object Object],[object Object]
Anatomia di un microscopio stativo fonte di illuminazione fotocamera o telecamera oculari diaframma di campo revolver con obiettivi tavolino traslatore vite macrometrica e micrometrica condensatore
Preparazione del campione per la colorazione Le cellule vive e non colorate si vedono male...
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Un  colorante  è una molecola in grado di legarsi ad una struttura cellulare, colorandola.
[object Object],[object Object],Colorazione semplice:  Utilizza un solo colorante; Aggiunta di un mordenzante che trattiene il colore   Colorazione differenziale:   Utilizza due o più coloranti
Colorazione  semplice: Procedura
E’ una colorazione differenziale Colorazione GRAM
Gram-positivo Es.  Bacillus, Streptococcus, Staphylococcus Lactobacillus Gram-negativo Es.  Escherichia Cianobatteri, Pseudomonas , Salmonella                                  
Staphylococcus aureus Escherichia coli Borrelia burgdorferi Malattia di Lyme   Spirillum
Micrococcus luteus Neisseria gonorrhoeae Streptococcus pyogenes Bacillus megaterium
Procedura della Colorazione Gram ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],METODI PER STUDIARE I MICRORGANISMI
Coltura pura ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],METODI PER STUDIARE I MICRORGANISMI
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Isolamento di microrganismi dall’ambiente
Isolamento di microrganismi da campioni ambientali ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Processamento per l’isolamento:  diluizioni dei campioni ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Processamento per l’isolamento:  diluizioni seriali ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],10 -2  10 -4  10 -5  10 -6 0.2 ml 1.98 ml di SF 0.02 ml 0.02 ml Diluizione Campione ambientale 0.2 ml 1.8 ml di SF
Processamento per l’isolamento:  Piastramento delle diluizioni ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Tentativo di isolamento di attinomiceti produttori di antibiotici dal campione di terra ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Colorazione Gram da campioni ambientali ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
MIC in liquido MIC  =  M inima  C oncentrazione  I nibente la crescita batterica ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],CT+ 2ml di LB liquido  + Kanamicina 50   g/ml 1ml LB + 1ml della diluizione precedente 25  12.5  6.25     3.125     1.5     0.75 Controllo positivo senza antibiotico Controllo negativo senza inoculo
MIC in liquido: determinazione MIC
Antibiogramma ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],*   1    coltura di  E. coli ; 4    coltura di  S. typhimurium ; 7    coltura di  B. subtilis .

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  • 3. I microrganismi ad occhi nudo: crescita in substrati liquidi Provette con e senza batteri
  • 4. I microrganismi ad occhi nudo: crescita in substrati solidi (piastre Petri) Coltura mista
  • 5.
  • 6.
  • 7.
  • 8. Terreni selettivi : favoriscono la crescita di un particolare gruppo a scapito di altri. es.: terreno con antibiotico
  • 9. Il terreno agar-sangue differenzia gli streptococchi emolitici dagli altri batteri. Terreni differenziali
  • 10. MacConkey-Agar differenzia i batteri fermentanti il lattosio (es. coliformi) da quelli non fermentanti (es. Citrobacter) e patogeni enterici ( Salmonella e Shigella ). E’ un terreno selettivo e differenziale : la presenza di sali biliari e cristal violetto inibisce la crescita dei gram-positivi. La presenza di lattosio e rosso fenolo (indicatore di pH) differenzia i gram-negativi fermentanti da quelli non fermentanti Enterobacter cloacae : lattosio fermentante.. colonie rosa Salmonella typhimurium Lattosio non fermentante Colonie senza colore Staphylococcus aureus non cresce
  • 11.
  • 12.
  • 14.
  • 15. filtrazione Pori del filtro Filtrazione
  • 16. Terreni da autoclavare (200 ml per banco): LB solido  1, 2, 8, 9, 10 E’ un terreno ricco avente tutti i fattori nutrizionali necessari per la crescita. Triptone 10 g Estratto di lievito 5 g NaCl 10 g H 2 O fino a 1l Agar 18 g Sabouraud  6, 7 E’ u n terreno adatto per l’isolamento dei funghi. Peptone 10 g Glucosio 40 g H 2 O fino a 1l Agar 18 g YEPD  3, 4 E’ un terreno adatto per la crescita dei lieviti. Peptone 20 g Estratto di lievito 10 g Glucosio 20 g H 2 O fino a 1l Agar 18 g Skin Milk  5, 11 E’ un terreno che mette in evidenza l’attività proteolitica di alcuni batteri. Triptone 10 g Estratto di lievito 5 g NaCl 10 g H 2 O fino a 1l Agar 18 g Latte magro 10% 1% (dopo sterilizzazione)
  • 17.
  • 18.
  • 19. Anatomia di un microscopio stativo fonte di illuminazione fotocamera o telecamera oculari diaframma di campo revolver con obiettivi tavolino traslatore vite macrometrica e micrometrica condensatore
  • 20. Preparazione del campione per la colorazione Le cellule vive e non colorate si vedono male...
  • 21.
  • 22.
  • 24. E’ una colorazione differenziale Colorazione GRAM
  • 25. Gram-positivo Es. Bacillus, Streptococcus, Staphylococcus Lactobacillus Gram-negativo Es. Escherichia Cianobatteri, Pseudomonas , Salmonella                                  
  • 26. Staphylococcus aureus Escherichia coli Borrelia burgdorferi Malattia di Lyme Spirillum
  • 27. Micrococcus luteus Neisseria gonorrhoeae Streptococcus pyogenes Bacillus megaterium
  • 28.
  • 29.
  • 30.
  • 31.
  • 32.
  • 33.
  • 34.
  • 35.
  • 36.
  • 37.
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  • 39.
  • 40. MIC in liquido: determinazione MIC
  • 41.