Aplikimi dhe krahasimi mes tyre

1. TEMA
“Aplikimi i markerave RFLP dhe RAPD ne
vleresimin e diversitetit gjenetik”
Master Profesional Bioteknologji
Lenda: Metoda analitike te vleresimit te
gjendjes ne mjedis
Punoi : Klea Medini

2.  Nje marker i mire per studimet me fingerprinting
duhet te jetë me kosto te ulet, te jape shumë
informacion për cdo run, te jete shumë e
përsëritshme midis analizave, te kete shkallë
shumë të ulët gabimi dhe te përmbajnë shumë
alele. Teknikat e meposhtme jane shume te
perdorura ne studimin e diversitetit gjenetik.

3. RESTRICTION FRAGMENT LENGTH
POLYMORPHISM (RFLP)
 Polimorfizmi i gjatësisë së fragmentit të kufizimit (RFLP)
ka fuqi shumë më të madhe sesa çdo gjë më parë e
disponueshme dhe u zhvilluan fillimisht për hartografimin
e gjeneve njerëzore. Kjo teknikë shpejt dëshmoi dobinë e
saj në pothuajse të gjitha speciet.
 Markerat gjenetikë grupohen në dy tipa: markerat Tipit I
janë të lidhur me një gjen i funksionit të njohur dhe
markerat e Tipit II janë të lidhur me gjenin anonim,
segmente të nje lloji ose tjetri. Tani për tani, RFLP mbetet
markeri më i zakonshëm, Tipi i I aktualisht përdoret në
shumë organizma eukariotikë.
 RFLP u përdor për identifikimin e varieteteve, per
identifikimin e rekombinantëve dhe identifikimin e krahut
homolog kromozomal, ajo është përdorur për
hartografimin e vendndodhjeve të ndryshme të proteinave
loci etj.

4.  Ndryshimet në modelin karakteristik të një tretje RFLP
mund të shkaktohen nga fshirjet e çiftit bazë,
mutacione, përmbysje, translokime dhe zhvendosje të
cilat rezultojnë në humbjen ose fitimin e një site njohjeje
që rezulton në një fragment me gjatesi per
polimorlifizim te ndryshem.
 Nëse mutacioni i çiftit bazë është i pranishëm në një
kromozom, por jo në tjetrin, të dy bandat e fragmentit
do të jenë të pranishme në xhel, dhe kampioni thuhet
se është heterozigues për markerin.
 Vetëm markerat codominant shfaqin këtë sjellje e cila
është shumë e dëshirueshme, shënuesit dominues
shfaqin një sjellje absence e cila mund të kufizojë të
dhënat në dispozicion për analiza.
 RFLP ka disa kufizime pasi kërkon kohë.

5. Me fillimin e studimeve që çuan në zhvillimin e teknologjisë së reaksionit
të zinxhirit polimerazë (PCR) pati përparime të mahnitshme në përsosjen
e teknikave për të marrë fragmente specifike ose jo specifike të ADN-së,
të rëndësishme kryesisht për kërkimet në diversitetin gjenetik.

6. RANDOMLY AMPLIFIED POLYMORPHIC DNA
(RAPD)
 RAPD ishte teknika e parë e zhvilluar e markerit
molekular të bazuar në PCR, dhe deri tani eshte me e
thjeshta.
 Primerët e shkurtër të PCR (afërsisht 10 baza)
zgjidhen rastësisht për të forcuar segmentet e
rastësishme të ADN-së në të gjithë gjenomin.
 Produktet RAPD zakonisht vizualizohen në xhel
agarozë me bromid ethediumi.
 Markerat RAPD zhvillohen lehtësisht sepse bazohen
në amplifikimin e PCR e ndjekur nga elektroforeza me
xhel agaroz, ato detektohen shpejt dhe me shpejtësi.

7. o Teknika RAPD është
përdorur gjerësisht në
studimin e diversitetit
gjenetik midis specieve
bimore.
o Për shembull, u
përdor për të studiuar
strukturën gjenetike dhe
diversitetin ndermjet
dhe midis gjashtë
popullatave të Capparis
deciduas në Arabinë
Saudite.
o Si rezultat, RAPD
mund të lejojë
përdorimin më të gjerë
të hartave molekulare
në shkencën e bimëve.

8.  Krahasimi : Shumica e markerave RAPD janë dominante
dhe për këtë arsye, individët heterozigotë nuk mund të
dallohen nga homozigotët.
 Kjo ne kontrast me shënuesit RFLP të cilët janë
kodominante dhe për këtë arsye dallohen midis heterozigotit
dhe homozigotëve.
 Kështu, në raport me markerat standard RFLP, markerat
RAPD gjenerojne më pak informacion për lokusin e
ekzaminuar.
 Megjithate disa studime tregojnë se RAPD-të sigurojnë një
nivel rezolucioni të barabartë me RFLP për përcaktimin e
marrëdhënieve gjenetike midis gjenotipeve.
Referencat : file:///C:/Users/User/Downloads/28889.pdf ,
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24190524-comparison-of-rapd-and-
rflp-genetic-markers-in-determining-genetic-similarity-among-brassica-
oleracea-l-genotypes/ .