khong co gi

1. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
HPL l ì chævã tt õ cua0 chæcai â ö bà ng tã ng A cuaphæng phap
C a î i ú à t í 4 î ï á u ò i ú nh í å ï
sà c kyï l í hiã u nà ca (High Per ma L Chr t a ,t æïc kiagoü l ì
õ ong û ng o for nce iquid omaogr phy) r å ia
phæng phap sà c kyï l í ca ap (High Pr e L Chr t a
å ï õ ong o ï essur iquid omaogr phy)
Phæng phap nayr â ìi t ì nà 1967- tã cåså phattiã n v ì cai tã n t ì
å ï ì aå æ m 1968 r n í ï r ø a í i ú æ
phæng phap sà c kyï cä tcä i ø . Hiã n na phængphap HPL ngaycang phat
å ï õ ü øâã n û y å ï C ì ì ï
tiã n v ì hiã n âû hoa ca nhå sæ phattiã n nha chongcuanganh chã t û may
r ø a û ai ï o ì û ï r ø nh ï í ì ú ao ï
phá t ch .Hiã n na noï ap duû r ú l ïn tong nhiã u nghanh kiã m nghiã m â û biã t
nê û y ï ng á t å r ö ì ø û àc û
l ìæng duû cho nghanh kiã m nghiã m T ä c . V ì noï hiã n l ì cä cuûâ õ l û
a ï ng ì ø û hu ú a û a ng à c æc
tong phá t ch cac t ä c â t ì phá n cho phep â nh t nh v ìâ nh l å ng .
r n ê ï hu ú a hanh ö ï ë ê a ë æü

2. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
1 - Khaïi niãûm : Sàõckyï long hiãûu nàngca la mäütphængphap chiatach trongâï pha
í o ì å ï ï o
â ü l ì chátl í v ì phat nh chæatong cä tl ì chá t r õ âîâ å cphá chiadæïi dang tã u
ä ng a ï ong a é ï r ü a ú à n a æü n å û iø
phá hoà c mä tchá tl í phuí l n mä tchá tma r õ ,ha mä tchá tma âîâ å c biã n â ø
n û ü ú ong ã ü ú ng à n y ü ú ng a æü ú ä i
bà ng lã kã thoa hoü v ïi cacnhom chæ hæu cå.Qua tç sà c kyï l í dæatã cåchã há p
ò in ú ï cå ï ï ïc î ï rnh õ ong û r n ú ú
phuû á bä ,ta â ø Ion ha phá l û t kê cå (R yphá t í ).
,ph n ú r o ä i y n oai heo ch î á n æ
2- Nguyãn tàõc cuía quaï trçnh s àõc kyï trong cäüt :
Phat nh l ì mä tyã u t úqua toü quyã tâ nh ban chá tcuaqua tç sà ckyï v ì l ü i sà ckyï .
é a ü ú ä n r ng ú ë í ú í ï rnh õ a oa õ
Nã u phat nh l ì chá thá p phuût çt coï Sà c kyï há p phuûphat á n hoà c phaâí .
ú é a ú ú h a õ ú hu û û ao
Nã u phat nh l ì chá tt a â ø Ion t çt coï Sà ckyï ta â ø ion .
ú é a ú ro äi h a õ ro äi
Nã u phat nh l ì chá tL í t çt coï Sà ckyï phá bä ha sà c kyï chiã t.
ú é a ú ong h a õ n ú y õ ú

3. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
Nã u phat nh l ì G t çt coï Sà c kyï G ha R yphá t í .
ú é a el h a õ el y á n æ
Cung v ïi phat nh â ør íar í chá tphá t ch r khoi cä t,chung t cá n coï mä tphaâ ü ng .
ì å é ã æ ai ú n ê a í ü ï a ö ü äü
Nhæv û nã u chung t nap má u phá t ch gä m hä n hå p chá tphá t ch A .. V ì cä t
á y ú ï a û ù n ê ö ù ü ú n ê ,B,C ao ü
phá t ch ,kã tqua cac chá tA Seîâ å ct ï r khoi nha sa khi â quacä t.Quyã tâ nh hiã u
n ê ú í ï ú ,B,C.. æü ach a í u u i ü ú ë û
qua cuasæ t ï sà c kyïå á l ì t ø hå p cac t å t ï .
í í û ach õ íâ y a ä ng ü ï æng ac
Chá tphá t ch A+ B+ C
ú nê
F1 F2
F3 Phaâ ü
ä ng
é
Phat nh

4. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
T ø cua0 t å t ï nayseî quyã tâ nh chá tnao â å c r íar í r khoi
ä ng í 3 æng ac ì ú ë ú ì æü æ ai a í
cä ttæïc tã khi l û l u giæt ã cä tl ì nhoí nhá t (F .v ì ngæü l û .
ü r å i n æc æ î r n ü a ú 1) a å c ai
 ú v ïi mä i chá t,sæ l u giæ æü qui â nh båi 0 l û F 2,F .Tong
ä i å ù ú û æ îâ å c ë í 3 æc 1,F 3 r
âï F v ì F giæv i toì quyã tâ nh .con F l ì yã u t úanh hæíngkhä l ïn .
o 1 a 2 îar ú ë ì 3a ú ä í å ng å
Å â yF l ì l û giæchá tphá t ch t ã cä t.F l ì l û keo cuaphaâ ü
Í á 1 a æc î ú n ê r n ü 2 a æc ï í ä ng
â ú v ïi chá tphá t ch r khoi cä t.
äi å ú n ê a í ü
Nhæ á yv ïi cac chá tkhac nha t çF v ì F l ì khac nha ,Kã tqua l ì cac
vû å ï ú ï u h 1 a 2 a ï u ú í a ï
chá tkhac nha seî di chuyã n t ong cä tv ïi t ú â ükhac nha v ì t ï r khoi nha
ú ï u ø r ü å ä c ä ï u a ach a í u
khi r khoi cä t. (nhæ ç dæïi â y)
a í ü h nh å á

5. Phá n I : Cåså l ï t ã t:
ö í y huy ú
Phá n minh hoa qua tç t ï cacchá tAv ì Btongcä tt ï sà c kyï
ö û ï rnh ach ï ú a r ü ach õ
Phaâ ü
ä ng
T åi gia
hì n A B

6. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
3 - Phán loaûi sàõc kyï :
T cåchã t ï sà ckyï ngæìi t phá l ü nhæsa :
heo ú ach õ å a n oai u
3 Sà c kyï há p phuû:
.1 õ ú
Qua tç sà c kyï dæatã sæ há p phuûmanh ,yã u khac nha cuaphat nh â ú v ïi cacchá tt n
ï rnh õ û rn û ú û ú ï u í é äi å ï ú a
v ì sæ r íagiai (phan há p phuû)cuaphaâ ü â økeo chá tt n r khoi cä t.Sæ t ï mä thä n
a ûæ í í ú í ä ng ã ï ú a a í ü û ach ü ù
hå p phuût ä cv ì t nh chá tâ ü hoü cuachá thá p phuû. Tong tæìng l û naycoï 0 l û
ü hu ü ao ê ú ä ng c í ú ú r r å oai ì 2 oai
há p phuû:
ú
+ Sà ckyï há p phuûphat á n (NP-HPL : Phat nh phá cæc ,phaâ ü khä phá cæc .
õ ú hu û C) é n û ä ng ng n û
+ Sà ckyï há p phuûphaâí (R -HPL : Phat nh khä phá cæc ,phaâ ü phá cæc .
õ ú ao P C) é ng n û ä ng n û
L û sà ckyï nayâ å cap duû r ú t ì cä â øt ï cachä n hå p cacchá tcoï t nh chá t
oai õ ì æü ï ng á t hanh ng ã ach ï ù ü ï ú ê ú
gá n t å t ûnha v ì t ä c l û khä phá cæc,phá cæc yã u ha t ung bç nhæcac
ö æng æ u a hu ü oai ng n û n û ú y r nh ï
V a huä c ha nhiã tgiam â u ....
it min,t ú û û í a
Hiã n na chung t â ng sæduû chècoï l û sà ckyï nayma t ä
û y ï a a í ng oai õ ì ì h i.

7. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
Chuí yã u hiã n na chung t sæduû l ü i sà c kyï há p phuûphaâí (R )
ú û y ï a í ng o a õ ú ao P
Tong dæü âã n USPkhi chung t tacæu cä tcoï gia t ët å æng nhæ u
r åc i ø ï ar ï ü ï r æng ï sa
:
L : R 18 Kê t æïc hatt å æng t ì 5 -10µm
1 P ch h å û æng ï æ
L : R 8 Kê t æïc hatt å æng t ì 5 -10µm
7 P ch h å û æng ï æ
L : Si 60 Kê t æïc hatt å æ t ì 5 -10µm
3 ch h å û æng ïng æ
V ì con mä tsä l û cä tkhac nhæä tDiol, Cä tNH2,CN. . v
a ì ü ú oai ü ï cü ü v

8. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
4 - Caïc âaûi læ åüng âàûc træ ng cuía s àõc kyï âäö
Kã tqua cuaqua tinh t ï cac chá tâ å c Det orphathiã n ghi t ì sà c kyï
ú í í ï r ach ï ú æü ect ï û hanh õ
â ö nhæhç tã
ä nh r n

9. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
T : T åi gia l u chã t
o hì næ ú
tr2
t’r1 : T åi gia l u t æc chá tA
hì næ h û ú
tr1 t’r2 : T åi gia l u t æc chá tB
hì næ h û ú
tr1 : T åi gia l u chá tA
hì næ ú
tr2 : T åi gia l u chá tB
hì næ ú
t’r1
to t’r2

10. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
T ì cac t ä sä cuacac pea tã â y,nhiã u âû l å ng â û tæ v öl ï t ã tâ å c
æ ï h ng ú í ï k r n á ö ai æü à c r ng ã y huy ú æü
â ar â øđanh gia mä tqua tç sà c kyï .Dæïi â yl ì mä tsä ai l å ngt æìng
æ aã ï ï ü ï rnh õ å á a ü úâû æü h å
dungtongt æc t úv ì cach t yâ ø cac âû l å ngnaycoï l i cho qua tç phá t ch
ì r h û ã a ï ha ä i ï ai æü ì åü ï rnh n ê
sà c ky.
õ ï
4.1 Thåìi gian læ u thæ ûc t’r : Retention time
Thåìi gian læu cuía mäüt cháút laì thåìi gian tênh tæì khi båm máùu
vaìo cäüt cho âãún khi cháút âoï ra khoíi cäüt âaût giaï trë cæûc
âaûi.
Thåìi gian læu cuía mäùi cháút laì hàòng âënh vaì caïc cháút khaïc nhau
thç thåìi gian læu seî khaïc nhau trãn cuìng mäüt âiãöu kiãûn sàõc
kyï âaî choün .Vç váûy thåìi gian læu laì âaûi læåüng âãø phaït hiãûn
âënh tênh caïc cháút.
Thåìi gian læu phuû thuäüc vaìo caïc yãúu täú :
+ Baín cháút sàõc kyï cuía pha ténh.
+ Baín cháút ,thaình pháön,täúc âäü cuía pha âäüng
+ Cáúu taûo vaì baín cháút phán tæí cuía cháút tan
+ Trong mäüt säú træåìng håüp thåìi gian læu coìn phuû thuộc vaìo
pH cuía pha âäüng .

11. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
Tong mä tphep phá t ch nã u tnhoí qua t çsæ t ï kem ,con nã u t qua l ïn t çpea bëdoang
r ü ï nê ú r ï h û ach ï ì ú r ï å h k î
v ìâ ül û l û cuaPea r ú kem ,t åi gia phá t ch r ú dai â ö t åi keo t nhiã u v ú â ö
a ä à p ai í k á t ï h ì n n ê á t ì ä ng h ì ï heo ö á n ã
khac nhæha t ú dung mä ï chá t â üchê xac cuaphep phá t ch kem.
ï o än i,hoa ú, ä nh ï í ï n ê ï
 øt yâ ø t åi gia l u chung t dæav ì cac yã u t útã âî tç bay.
ã ha ä i h ì n æ ï a û ao ï ú ä r n a rnh ì
4.2 Hãû s äú dung læ åüng K’ : Capacity F actor
Hã sä dung l å ng cuamä tchá tcho biã tkha nà phá bä cuachá tâï t ong ha phacä ng v ïi
û ú æü í ü ú ú í ng n ú í ú o r i ü å
sæc chæacä tt ïc l ì t í sä giæal å ng chá tt n tong phat nh v ì l å ng chá tt n tong phaâ ü
ï ï ü æ a y ú î æü úa r é a æü úa r ä ng
å tong t åi âã m cá bà ng .
í r hì i ø n ò
K’ = (t -t)/t
R 0 0
Nã u K’ nhoí t çt cung nhoí v ì sæ t ï kem . Nã u K’ l ïn t çPea bëdoang . Tong
ú h R î a û ach ï ú å h k î r
t æc t úK’ t ì 1-5 l ì t ú æ .
h û ã æ a äi u

12. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
4.3 - Âäü choün loüc α :
 üchoü l ü α cho biã thiã u qua t ï cuahã t ä ngsà c kyï ,khi 0 chá tA,Bcoï
ä noc ú û í ach í û h ú õ 2 ú
K’A v ì K’Bkhac nha t çmåi coï kha nà t ï .,mæ â üt ï biã u t ëå ä
a ï uh ï í ng ach ïc ä ach ø h í ü
choü l ü α .
noc
α = K’B /K’A V ïi âã u kiã n K’B > K’A
å iö û
v ïi α cang khac 1 t çkha nà t ï cang r î r ì
å ì ï h í ng ach ì o ang
α= 1.02 α= 1.16 α= 1.20

13. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
4.2 S äú âéa lyï thuyãút N:
Sä é l ï t ã tl ìâû l å ng biã u t ëhiã u nà cuacä ttong mä tâã u kiã n sà ckyï nhá t
úâ a y huy ú a ai æü ø h û ng í ü r ü iö û õ ú
â nh .M ù â al ï t ã ttong cä tsà kyï giä ng nhæl ì mä tl ïp phat nh coï chiã u ca l ì H,T ú
ë ä i é y huy ú r ü c ú a üå é ö o a át
nhiã l ïp naycoï t nh chá tâ ü t ïc l ì mä tkhu v û cuahã phá t ï ma tong âï mä tcá
nå ì ê ú ä ng æ a ü æc í û n ach ì r o ü n
bà ng nhiã tâ ü hoü â å ct ã tl û giæanä ìng â ütung bç cuachá tt n tong phat nh v ì
ò û ä ng c æü hi ú á p î ö ä r nh í ú a r é a
phaâ ü .
ä ng
Bã dayHphuût ä c v ì nhiã u yã u t ú:
ö ì hu ü ao ö ú ä
+ Â ång kê v ìâ ühá p phuûcuahatphat nh
æì nh a ä ú í û é
+ T ú â üv ìâ ünhåt(â üphá cæc)cuaphaâ ü
äc ä a ä ï ä n û í ä ng
+ Hã sä khuyã ch t ï cuacac chá t tong cä t.
û ú ú an í ï ú r ü
V v û v ïi mä tâã u kiã sà c kyï xac â nh t çchiã u ca Hcung hà ng â nh â ú v ïi mä t
ç áy å ü i ö n õ ï ë h ö o î ò ë äi å ü
chá tphá t ch v ì sä é l ï t ã tcuacä tcung â å cxac â nh.
ú n ê a úâ a y huy ú í ü î æü ï ë

14. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
4.2 S äú âéa lyï thuyãút N:
Sä é l ï t ã tNâ å c t nh t cä t æcsa :
úâ a y huy ú æü ê heo ng h ï u
N= 5,54(t /W,5)2
R 0
Tong âï : t
r o R : T åi gia l u cuachá tphá t ch .
hì næ í ú nê
W,5 : Â ür ü t û âã m 1/ cuaPea .
0 ä ä ng ai i ø 2 í k
Tong t æct úNnà m tong khoang 250 â ú 550 l ì v ìaâí .
r hû ã ò r í 0 ãn 0 a æ u

15. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
4.3 Âäü phán giaíi R : ( Res olution )
 üphá giai l ìâû l å ng biã u t ëâ üt ï cuacac chá tr khoi nha tã mä tâã u kiã n sà c
ä n í a ai æü ø h ä ach í ï ú a í u r n ü i ö û õ
kyï âî cho. Â üphá giai cua0 Pea canh nha phai â å ct nh t cä t æc sa :
a ä n í í 2 k û u í æü ê heo ng h ï u
= ’ ’
R 2(tRB -tRA)/(w + w)
a B
Tong t æct únã u cacPea cá â ú (G ss)t çâ üphá giai t ú t ã u â ø0 Pea t ï l ì
r h û ã ú ï k n ä i a h ä n í ä i hi ø ã 2 k ach a
R= 1.0.Tong phep â nh l å ng R 1,5 l ì phuì hå p
r ï ë æü = a ü
+ Nã u Rnhoí t çcac Pea chæ t ï hà n ,vã ct nh t ï diã n t ch Pea seî khä chê xac ,l ï
ú h ï k a ach ó i û ê oan û ê k ng nh ï uc
ì í ç ï à heo 3 ï u:
nayphai tm cach t ng Rt 0 cach sa
* L ì t yâ ø K’ bà ng cach t yâ ø l û r íagiai cuaphaâ ü (T yâ ø â üphá
am ha ä i ò ï ha ä i æc æ í í ä ng ha ä i ä n
cæc nã u l ì R - HPL ,t yâ íi cæìng â üion nã u l ì IE- HPL ....)
û ú a P C ha ä å ä ú a C
* L ì t ng sä é l ï t ã tcuacä tbà ng cach dung cä tdai hå hoà ccä tcoï kê t æïc
am à úâ a y huy ú í ü ò ï ì ü ì n û ü ch h å
nhoí hå .
n

16. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
4.3 Âäü phán giaíi R : ( Res olution )
* L ì t ng â üchoü l ü α bà ng cach dung cä tkhac phuì hå p hå v ïi qua tç t ï
am à ä noc ò ï ì ü ï ü n å ï rnh ach
hoà c t yâ ø t ì phá n phaâ ü .
û ha ä i hanh ö ä ng
+ Nã u Rl ïn qua t çt åi gia phá t ch seî l u,t ú nhiã u phaâ ü ,â ünhayseî kem. Â økhà c
ú å ï h hì n nê á än ö ä ng ä û ï ã õ
phuû t coï t ã t yâ ø hã phaâ ü ha dung chæng tç Ga dung mä . T nhiã tong qua
c a h ø ha ä i û ä ng y ì å rnh r dient i uy n r ï
tç chaysà c kyï dung chæng tç dung mä t çmä tsä phaâ ü coï t í l ût yâ ø seî keo t
rnh û õ ì å rnh i h ü ú ä ng y ã ha ä i ï heo
sæ t yâ øâ ång nã n l ì anh hæíng r ú l ïn â ú t åi gia l u v ì diã n t ch cuacacPea t
û ha ä i æì ö am í å át å ãn h ì n æ a û ê í ï k a
phá t ch .
nê
Tong t æct únã han chã sæduû chæng tç Ga dung mä ma chuí yã u l ì chung
r h û ã n û ú í ng å rnh r dient i ì ú a ï
t phai tm â å c hã phaâ ü r íagiai phuì hå p, âï æng cacyã cá u tong qua tç phá t ch .
a í ç æü û ä ng æ í ü ap ï ï u ö r ï rnh n ê

17. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
4.4 Hãû s äú khäng âäúi xæ ïng T : ( Tailing factor)
Hã sä khä â ú xæng Tcho biã tmæcâ ükhä â ú xæng cuaPea tã sà ckyïâ öt â å c .
û ú ng ä i ï ú ï ä ng ä i ï í k r n õ ä hu æü
Tâ å ct nh bà ng t í sä ä r ü cua0 næaPea t û âã m 1/ chiã u ca Pea :
æü ê ò y úâ ü ä ng í 2 í k ai i ø 10 ö o k
T = a/b
a b
Pea dang â ïi xæng hç G uss tã t æc t úkhoïâû â å cv v û phai qua t m â ú hã sä khä
k û ä ï nh a r n h û ã at æü ç á y í n á ã n û ú ng
â ú xæng T
äi ï ,

18. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
4.4Hãû s äú khäng âäúi xæ ïng T : ( Tailing factor)
* Khi T ≤ 2.5 t çphep â nh l å ng â å c chá p nhá n
h ï ë æü æü ú û
* Khi T > 2.5 t ç âã m cuä i cuaPea r ú khoï xac â nh ,v v û phep
h i ø ú í k át ï ë ç áy ï
â nh l å ng cá n phai t yâ ø cac âã u kiã n sà c kyïâ øl ì cho Pea cá â ú
ë æü ö í ha ä i ï i ö û õ ã am ck n ä i
hå t cac cach sa :
n heo ï ï u
+ L ì giam t ã t ch chã tt ïc l ìâ ü nä i t ì cä tâ ïn Det or.
am í h øê ú æ a oan ú æ ü ã ect
+ T yâ ø t ì phá n phaâ ü sa cho kha nà r íagiai tà l n
ha ä i hanh ö ä ng o í ng æ í ng ã
+ G í båtl å ngmá u â av ì cä t bà ngcach phal î má u ha giam
iam ï æü ù æ ao ü ò ï oang ù y í
t ã t ch tã má u .
h øê i m ù

19. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
5 Phán loaûi s àõc kyï vaì æ ïng duûng :
+ T cåchã chiat ï cuasà c kyï ,ngæìi t phá r cac l û sa â y:
heo ú ach í õ å a n a ï oai u á
Sà c kyï há p phuû(NP- HPL v ì R - HPL sà c kyï phá bä - sà c kyï chiã t(L C); sà c kyï ta â ø ion
õ ú Ca P C); õ n ú õ ú L õ ro äi
(IE - HPL ; sà ckyï r yphá t í - sà ckyï gel(IG - HPL .Nhæ t æct úhiã na chung t hiã n
C) õ á n æ õ C) ng h û ã n y ï a û
chèâ ng æng duû sà c kyï há p phuûv ì phá t ch má u .
a ï ng õ ú ao n ê ù
5.1 S àõc kyï háúp phuû :
* Qua tç sà c kyï dæatã sæ há p phuûmanh yã u khac nha cuaphat nh â ú v ïi cac chá tt n
ï rnh õ û rn û ú û ú ï u í é äi å ï ú a
v ì sæ r íagiai (phan há p phuû cua phaâ ü â økeo chá tt n r khoi cä t.Sæ t ï mä thä n
a ûæ í í ú ) í ä ng ã ï ú a a í ü û ach ü ù
hå p phuût ä cv ì t nh chá tâ ü hoü cuachá thá p phuû.Tong l û naycoï 0 kiã u há p
ü hu ü ao ê ú ä ng c í ú ú r oai ì 2 ø ú
phuû:

20. Phá n I : Cåså l ï t ã t
ö í y huy ú
+ Sàõc kyï háúp phuû pha thuáûn (NP-HPLC): Pha
ténh phán cæûc ,pha âäüng khäng phán cæûc .
+ Sàõc kyï háúp phuû pha âaío ( RP - HPLC): Pha
ténh khäng phán cæûc pha âäüng phán cæûc .
Loaûi sàõc kyï naìy âæåüc aïp duûng ráút räüng raîi
,thaình cäng âãø taïch caïc häùn håüp caïc cháút coï tênh
cháút gáön tæång tæû nhau vaì thuäüc loaûi khäng phán
cæûc ,phán cæûc yãúu hay trung bçnh nhæ caïc Vitamin,
caïc thuäúc haû hiãût giaím âau .......

21. Phá n II : Hệ thống HPLC
ö
I-M ï HP:Cgä m cac bä phá n cåban â å ct ï t õ tã såâ sa :
ay ö ï ü û í æü om à t r n ồ u
Column
Degasse Pump
Tiêm
mẫu
Detector

22. Phần II: Hệ thống HPLC
Tong âï :
r o
1-Bnh chæadung mä phaâ ü ng
ç ï i äü
2-Bä phá n khækhê
ü û í
3 Bå ca ap
- m oï
4Bä phá n tã má u (bà ng t yha A osa e)
- ü û i m ù ò a y ut mpl
5- ä tsà ckyï (Phat nh )(â øngoa mä tæìng ha tong bä i ö nhiã t)
Cü õ é ã ìi i r å yr üâã u û
6-Det or(nhá n t n hiã u )
ect û ê û
7- ã t ä ng mayt nh gà n phá n mã m nhá n,t n hiã u v ì sæl ï dælã u v ìâã u khiã n hã t ä ng
Hûh ú ï ê õ ö ö û ê û a í y î i û a i ö ø ûh ú
HPL C.
8 In dælã u .
- îiû

23. Phần II: Hệ thống HPLC
II.1 - Bçnh âæ ûng dung mäi
-Hiã n t û mayHPL t æìng coï 0 â ång dung mä v ì â ö bå ca ap
û ai ï C h å 4 æì i ao á u m o ï
.Cho phep chung t sæduû 0 bç chæ dung mä cung 1 l ö â ør a giai t t í
ï ï a í ng 4 nh ïa i ì á n ã æó í heo y
l ûmong muä n v ì tä ng t í l ûdung mä cua0 â ång l ì 10 % .
ã ú a ø yã i í 4 æì a 0
T nhiã t kinh nghiã m t çchung t ê khi sæduû 0 â ång dungmä
uy n heo û h ï at í ng 4 æì i
cung mä tl ï ma chungt chi sæduû t ú â l ì 0 v ì 0 â ång â øcho hã pha
ì ü uc ì ï a í ng ä i a a 3 a 2 æì ã û
â ü l ä â å c phatä n â ö nhá thå ã phaâ ü ng â n gian hå â øqua tç
ä ng u n æü r ü ä ng ú n,h û ä ü å í n ã ï rnh
r íagiai ä n â nh .
æ í ø ë
Hiã n 0 â ång dung mä phuû v ûchuí yã u cho vã c r íagiai Ga ldung
û 4 æì i cu ú i û æ í r dia
mä t t åi gia v ì cä t ï xá dæng tã chuá n .
i heo h ì n a ng ac y û i u ø

24. Phần II: Hệ thống HPLC
Læu yï : - Táútcaí caïc dung mäi duìng cho HPLC
âãöu phaíi l dung mäi t khiãútvaì coï ghi r t ãn
aì inh oî r
nhaîn l duìng cho HPLC Hay dung mäi t khiãút
aì inh
phán t .êch
- Táútcaí caïc hoïa cháútduìng âãø pha máùu
vaì pha hãû âãûm phaíi âæåüc sæí duûng l hoïa aì
cháúttinh khiãút phán têch .
Nhà m muû â ch tanh hong cä tsà c kyï ha nhiã u â ång
ò c ê rï í ü õ y ù æì
nã n,t û r cac Pea t û tong qua t ç phá t ch .
ö ao a ï k ap r ï rnh n ê

25. Phần II: Hệ thống HPLC
II.2 Bä khækhê Dega :
ü í sse
M û â ch cuabä khækhênhà m l û tæcac boü nhoí con sotl û tong
uc ê í ü í ò oai r ì ï t ì ï ai r
dung mä phaâ ü .
i ä ng
Nãu nhætong qua tç phá t ch ma dung mä phaâ ü con sotcac boü
ï r ï rnh n ê ì i ä ng ì ï ï t
khêt çmä tsä hiã n t å ng sa â yseî sayr -T í l ûphaâ ü cuacac â ång
h ü ú û æü u á í a yã ä ng í ï æì
dung mä l ú khä âï seî l ì cho t åi gia l u cuaPea t yâ ø .
i á y ng ung am h ì n æ í k ha ä i
-Tong t æìng hå p boü qua nhiã u Bä khækhêkhä t ã l û t æhã t
r rå ü t ï ö ü í ng h ø oai r ì ú
â å c t çcoï t ã Pump seî khä hutâ å c dung mä (Bëe)khi âï ap suá tkhä l n v ì
æü h hø ng ï æü i o ï ú ng ã a
maysà c kyï seî ngæ hoatâ ü .
ï õ ìng û ä ng
Tong bá tcæt æìng hå p nao nã tã cung cho kã tqua phá t ch sa .
r ú ï r å ü ì u rn î ú í nê i

26. Phần II: Hệ thống HPLC
oï
II.3 Pump Ca ap :
-
-M û â ch â øbå phaâ ü v ì cä tt æc hiã n qua tç chiat ï sà c kyï
uc ê ã m ä ng ao ü h û û ï rnh ach õ
.Pump phai t û â å c ap suá tca khoang 3 0 - 0 PSI hoà c 250a â ú -50 a
í ao æü ï ú o í 0 060 0 û t ãn 0 t
(1a = 0 Ba)v ì pump phai t û dong lã t û .L u l å ng bå t ì 0 â ú
t .98 r a í ao ì i n u c æ æü m æ .1 ã n
9.999mlphut.(hiã n na âî coï nhiã u l û Pump coï ap suá tr ú ca l n â ú 120
/ ï û ya ö oai ï ú át o ã ãn 0
ba)r
-M ï sà c kyï l í cuachung t hiã n na t æìng coï ap suá tt ïi â 4 Ba. T ú
ay õ ong í ï a û y h å ï ú ä a 12 r ä c
â üdong 0 9.999mlphut.
ä ì .1- / ï
-T ú â übå l ì hà ng â nh t t ä sä a æü cai â û . Hiã n t û bå coï 2
ä c ä m a ò ë heo h ng úâîâ å c ì à t û ai m
Pistone â øt yphiã nha â ø dung mä lã t û .
ã ha n u á y i i nuc

27. Phần II: Hệ thống HPLC
II.4 Bäü pháûn t máùu ( inj ion):
iãm ect
 Øâ amá u v ì cä tphá t ch t phæng phap khä ngæ dong
ã æ ù ao ü n ê heo å ï ng ìng ì
chay . V ïi dung t ch cual l ì 5 - 10 µl.
í å ê í oop a 0
Coï 0 cach l ú má u v ì t ong cä t: Bà ng tã má u t í cä tã bà ng
2 ï á y ù ao r ü ò i m ù hu ng( i m ò
t y)v ì tã má u t ûâ ü A osa e).
a a i m ù æ ä ng( ut mpl
II.5 Cäütsàõc kyï :
Cä tchæ phat nh â å c coi l ì t ai t cuahã t ä ng sà c kyï l í hiã u
ü ïa é æü a r ï im í û h ú õ ong û
nà ca .
ng o
-Cä tphat nh t ä t æìng l ì bà ng t ï khä r ,chiã u dai cä tkhoang 10
ü é h ng h å am ò hep ng è ö ì ü í
- 0 ,â ång kê tong 1- mm ,hatchá tnhä i cå = 5- µm.(ngoai r con coï
3 cm æì nh r 10 û ú ö îφ 10 ì a ì
mä tsä tæìng hå p â û biã tv ökê t æïc v ì kê cå hat
ü ú r å ü à c û ã ch h å a ch î û....)

28. Phần II: Hệ thống HPLC
- åi chá tnhä i cä tcå = 1.8- µm coï t ã dung cä tngà n (310cm )
V ï ú ö ü îφ 5 hø ì ü õ -
v ì nhoí (â ång kê t ong 1- .6mm)l û cä tna ì coï hiã u nà t ï ca
a æì nh r 4 oai ü y û ng ach o.
-Chá tnhä i cä tt ì t l ü i cä t v ì kiã u sà c kyï (tong cac dæü âã n
ú ö ü uy heo o a ü a ø õ r ï åc i ø
USP23,24coï tã chuá n hoacac l ü i cä t)
i u ø ï ï oa ü
-T ä t æìng chá tnhä i cä tl ì Sil gel(phat á n)
h ng h å ú ö ü a ica hu û
hoà c l ì Sil gelâîâ å c Sil n hoahoà c â å c ba mä tl ïp mong hæu cå(pha
û a ica a æü a ï û æü o ü å í î
âí ),ngoai r ngæìi t cong dung cac l û hatkhac nhæ ä Oxit yme
ao ì a å a ì ì ï oai û ï :Nh m ,Pol
xä p ,chá tt a â ø ion.
ú ú ro äi
* Â ú v ïi mä tsä phæng phap phá t ch âì hoi phai coï nhiã tâ üca hoà c t á p
äi å ü ú å ï n ê oi í í û ä o û hú
hå nhiã tâ üphong t çcä tâ å c â û tong bä phá n âã u nhiã t (Ov col
n û ä ì h ü æü à t r ü û i ö û en umn)

29. Phần II: Hệ thống HPLC
II.6 - Detector :
-L ì bä phá n Phathiã n cac chá tkhi chung r khoi cä tv ì cho cac t n
a ü û ï û ï ú ï a í ü a ï ê
hiã u ghi tã sà kyïâ öâ øcoï t ã ë t nh v ìâ nh l å ng .T ì t t nh chá t
û r n c ä ã h øâ nh ê a ë æü uy heo ê ú
cuacac chá tcá n phá t ch ma ngæìi t sæduû l ü Det ort ê hå p v ì
í ï ú ö n ê ì å a í ng oai ect h ch ü a
phai t í man âã u kiã n t ong mä tv ì nä ng â ünhá tâ nh cuachá tphá t ch
í hoa î i ö û r ü ung ö ä ú ë í ú n ê
A k.C
=
Tong : Al ì t n hiã u â â å c
r a ê û o æü
CNä ng â üchá tphá t ch
ö ä ú nê
k l ì hà ngsä t æc nghiã m cuaDet orâî choü
a ò úh û û í ect a n
Tn hiã u naycoï t ã l ì : â ühá p t ûqua ; Cæìng â üphatxa ,cæìngâ üâã n
ê û ì h ø a ä ú hu ng å ä ï û å ä i û
t ã ,â üdá n âã n ;â üdá n nhiã t;chiã tsuá t..
hú ä ù i û ä ù û ú ú

30. Phần II: Hệ thống HPLC
Tã cåså o ngæìi t chã t û cac l ü i Det orsa :
r n íâï å a ú ao ï o a ect u
+ Det orqua phä t í ngoai 20 -3 0nm â øphathiã n UV
ect ng øæ û 0 8 ã ï û
+ Det orqua phä t í ngoai kha kiã n (UV- V 190-90 nm â øphathiã n
ect ng øæ û í ú IS): 0 ã ï û
cac chá thá p t ûqua .â yl ì l û t ä duû nhá t
ï ú ú hu ng á a oai h ng ng ú
+ Det orhuynh qua â í phathiã n cac chá thæu cåphathuynh qua t ûnhiã
ect ì ng ã ï û ï ú î ï ì ng æ n
cung nhæ ï dá n chá tcoï huynh qua .L ì l û Det orcoïâ üchoü l ü ca
î cac ù ú ì ng a oai ect ä noc o
nhá t.
ú
+ L û hiã n âû âû hå coï Det orDiod Ar y ,E SD (Det ort ï xa ba hå )cac
oai û ai ai n ect ra L ect an û y i ï
Det ornaycoï kha nà quetchä ng phä ã ë t nh cac chá tt â ühá p t
ect ì í ng ï ö øâ øâ nh ê ï ú heo ä ú hu
cæc âû cuacac chá t.
û ai í ï ú

31. Phần II: Hệ thống HPLC
-Ngoai r con coï mä tsä l û Det orkhac l ì :
ì a ì ü ú oai ect ï a
+ Det orâã n hoa : Â dong ,cæc phä , ä dá n ,âã n l å ng ..)
ect i û ï o ì û øâ ü ù i û æü
+ Det or ã tsuá tv sa : Det orkhuc xa (t ä t æìngdung cho â
ect Chi ú ú i i ect ï û h ng h å ì o
cac chá tâ ång )
ï ú æì
+ Det orâ â üdá n nhiã t,hiã u æng nhiã t..
ect o ä ù û û ï û
II.6 - Bäü pháûn ghi t hiãûu
ên
-Â øghi tê hiã u phathiã n do Det ort uyã n sa .
ã n û ï û ect r ö ng
+ Tongcac mayt ã hã cuî t çsæduû mayghi â n gian coï t ã v î sà c
r ï ï h ú û h í ng ï å í høe õ
kyïâ ö håi gia l u,diã n t ch cuaPea ,chiã u ca ..
ä ,t ì n æ û ê í k ö o

32. Phần II: Hệ thống HPLC
+ Cac mayt ã hã måi â ö dung phá n mã m chaytã mayt nh noï coï
ï ï h ú û ï ãu ì ö ö û rn ï ê
t ã l u t ú ca cac t ä sä ,phä ä v ì cac t ä sä cuaPea nhæê â ú
h øæ á t í ï h ng ú øâ ö a ï h ng ú í k t nh ä i
xæng,hã sä phá giai .... tong qua t ç phá t ch â ö t åi sæl ï ,tê t ï cac
ï û ú n í r ï rnh n ê ä ng h ì í y nh oan ï
t ä sä t yã cá u cuangæìi sæduû nhæ: Nä ng â ü SD, ...
h ng ú heo u ö í å í ng ö ä ,R
II.7 In kãútquaí :
+ Sa khi âî phá t ch xong cac má u t seî in kã tqua do phá n mã m tê
u a nê ï ù a ú í ö ö nh
t ï r giá yâ øhoan t ã n hä så.
oan a ú ã ì hi û ö

33. Phá n III : CHOÜN ÂIÃÖU KIÃÛN SÀÕC KYÏ
ö
M ä n coï mä tkã tqua t ï t ú nhá tt phai tm â å c cac âã u kiã n sà c kyï t ú
uú ü ú í ah ä t ú a í ç æü ï i ö û õ ä t
nhá tcho mä thä n hå p má u ; Cac âã u kiã n âï ba gä m :
ú ü ù ü ù ï iö û o o ö
Phat nh : -L û phat nh
é oai é
-Kê t æïc cä t
ch h å ü
Phaâ ü :
ä ng T ì phá n v ì t í l û,pH, t ú â üdong, nhiã tâ ü... Nã u l ì
hanh ö a y ã äc ä ì û ä ú a
chæng tç r íagiai Isocr t
å rnh æ í aic
T ì phá n v ì t í l û,pH, t ú â üdong, nhiã tâ üv ì chæng
hanh ö a y ã äc ä ì û ä a å
tç dung mä ... Nã u l ì chæng t ç r íagiai Ga .
rnh i ú a å rnh æ í r dient

34. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
Hã t ä ng ta bë
û h ú r ng :
û
-Loai Detector:
-V n tã má u,t ã t ch tã
a i m ù h øê i m
-Hã æìng dá n
ûâ å ù
Cac yã u t úkhac: nhiãûtâ ü,âäünhaycuadetectorbæïcsongphán têch
ï ú ä ï ä û í å ï

35. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
III.1 : L û choü phat nh
æa n é
-Dæav ì cac t ì lã u ,Dæü âã n ,t ì phá n v ì t nh chá tcuacac chá t
û ao ï ai i û å c i ø hanh ö a ê ú í ï ú
coï tong má u phá t ch .....t l û choü cä tsà c kyï phuì hå p coï t ã l ì cä tphat á n,
r ù nê a æa n ü õ ü h øa ü hu û
cä tphaâí ha cac l û cä tkhac nha ...
ü ao y ï oai ü ï u
Chung t t ä t æìng dung 0 l û cä tphat á n (NP)v ì cä tphaâí (R
ï a h ng h å ì 2 oai ü hu û a ü ao P)
Ngoai r t coï t ã dung mä tsä l û cä tkhac nhæä tCN,cä tNH2 ,....
ì aa h ø ì ü ú oai ü ï cü ü

36. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
ica r ê
Cäüt pha thuáûn ( NP): Sil geltung t nh
Pha ténh :Cä tnayl ì l û cä tdung â øt ï cac chá tkhä phá cæc ha ê phá
ü ì a oai ü ì ã ach ï ú ng n û y t n
cæc .Tã bã mà thoatâ ü cuanoï coï chæacac nhom OHphá cæcæ næïc .
û r n ö û û ä ng í ï ï ï n û a å
V duûcä tL osor Si 4 ,Si 60 Cá u t û cä tnhæ u :
ê ü ichr b 0 ... ú ao ü sa
OH OH OH
-O-Si -O-Si -O-Si -O-
OH OH OH
Phaâ ü : dung cho l ü nayl ì cac dungmä khä phá cæc ha ê phá cæc nhæ
ä ng ì oai ì a ï i ng n û y t n û :
M ha ,Benzen,A onitil or ...
et nol cet r ,Chl ofoc

37. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
III.1 : L û choü phat nh
æa n é
Cäüt pha âaío ( RP) : ( Silicagel âaî Alkyl hoïa )
Dung â øt ï cac chá tkhä phá cæc ,ê phá cæc ,cac chá tphá cæc coï t ã
ì ã ach ï ú ng n û t n û ï ú n û h ø
t û cà p Ion .Tã bã mà thoatâ ü cac nhom OHâî bëAkylhoat ïc l ì t yt ã
ao û r n ö û û ä ng ï ï a l ï æ a ha h ú
nguyã t í Hbà ng cac mach Cabon t à ng (C8ha C18 t å â å R 8ha R 18
næ ò ï û r hó y æng æng P y P )
ha cac mach Cabon v ì Phenyl t å â å cä tPhenyl)
y ï û r ong( - æng æng ü
v t ã noïê phá cæc ha phá cæc r ú ê .
ç h ú t n û y n û át t
V duûnhæä tL osor- ichr
ê c ü ichr L ospherR 8...... ODS, Cä tNucl C18
P ü eosil ........

38. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
Pha Âäüng : Phaâ ü dung tong l û nayl ì cac dung mä coï phá cæc nhæ
ä ng ì r oai ì a ï i n û
:M ha ,A onitil æïc ha cac l û dung dë â û ,hä n hå p cuacac dung mä
et nol cet r ,,n å y ï oai ch ã m ù ü í ï i-
âû .
ãm
Sæ t ï cuachá tnhä i l û cä tnaycoïâ ül û l û ca v ì noïâ å c æng
û ach í ú ö oai ü ì ä à p ai o a æü ï
duû chuí yã u tong phá t ch Dæü phá m . Hiã n na chung t chèsæduû l û nay
ng ú r n ê åc ø û y ï a í ng oai ì
l ì chuí yã u .
a ú
Hiã n na phat nh t ã nã n Sil gelâî coï hang t à chá tkhac nha t ì
û y é r n ö ica a ì r m ú ï u uy
t ä c v ì nhom t ã cuanguyã t í H,ngoai r con coï cac l ü i phat nh t ã nã n Oxid
hu ü ao ï h ú í næ ì a ì ï o a é rn ö
Nhä r n nã n chá thæu cåca phá t í,t ã nã n mach cac bon......
m,tã ö ú î o n æ rn ö û ï

39. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
III.2 : L û choü phaâ ü
æa n ä ng
-Dæav ì cac t ì lã u ,Dæü âã n ,t ì phá n v ì t nh chá tcuacac chá t
û ao ï ai i û å c i ø hanh ö a ê ú í ï ú
coï tong má u phá t ch .....t l û choü phaâ ü phuì hå p â øcho qua tç r íagiai
r ù nê a æa n ä ng ü ã ï rnh æ í
t ï hoan t ì cac chá tcoï t ong má u âï ængâ ö âí cac tã chuá n cuapea âî
ach ì oan ï ú r ù ap ï á y u ï i u ø í k a
tç bayâ ö t åi phai coï t åi gia phá tïch phuì hå p nhà m tã tkiã m â å c dung
rnh ì ä ng h ì í h ì n n i ü ò i ú û æü
mä ï chá t håi gia phá t ch má u, giam t ã u sæ hoatâ ü cuat ã tbë.
i,hoa ú,t ì n n ê ù í hi ø û û ä ng í hi ú
-Phaâ ü coï t ã l ì t yâ ø :
ä ng h ø am ha ä i
+ Â üchoü l ü α
ä noc
+ T åi gia l u
hì næ

40. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
-Phaâ ü coï t ã l ì t yâ ø :
ä ng h ø am ha ä i
+ Hiã u nà t ï cuacä t
û ng ach í ü
+ Â üphá giai
ä n í
+ Tnh â ú xæng cuaPea
ê äi ï í k
Do âï ,Tong mä tphat nh âî choü nã u t choü â å c phaâ ü coï t ì
o r ü é a n ú a n æü ä ng hanh
phá n phuì hå p t çt seî coï hiã u suá tt ï sà c kyï t ú nhá tâ ú v ïi hä n hå p cac
ö ü h a û ú ach õ ä t ú ä i å ù ü ï
chá tcá n phá t ch . Chê v v û phaâ ü cá n coï cá u yã cá u sa :
ú ö nê nh ç á y ä ng ö ö u ö u
+ Phaâ ü phai tåv ïi phat nh âî coï .Khä â å c l ì cho phat nh bëbiã n
ä ng í r å é a ng æü am é ú
â ø hoahoü . (v gia tëpH: 2.5< pH< 8
äi ï c d ï r .5)

41. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
+ Phaâ ü phai hoat n â å c cac chá tphá t ch t çmåi r íagiai â å c
ä ng í ì a æü ï ú n ê h ï æ í æü
chung.(â û biã tphai chuï yï khi t yâ ø phaâ ü phai r íacä tbà ng dung mä phuì
ï àc û í ha ä i ä ng í æ ü ò i
hå p â økhä l ì t í cac chá tcoï tong cä t,ha phaâ ü coï sà n t ong cä t v : â û
ü ã ng am ua ï ú r ü y ä ng ô r ü d ãm
phospha r a nga bà ng A ha M seî bëkã tt í t ã col
t æí y ò CN y eOH ú ua r n umn)
+ Phaâ ü phai bã n v îngt t åi gia : cang bã n l u cang t ú nhæ ê
ä ng í ö æ heo h ì n ì ö á ì ä t ng t
nhá tl ì chung l ì phaâ ü khä bëphá huytong suä tt åi giaphá t ch má u ).
úa ï a ä ng ng n í r ú hì nê ù
+ Phai coïâ üt khiã tca : dung mä cho HPL hoa chá tt khiã tphá t ch
í ä inh ú o i C, ï ú inh ú n ê
.
+ Phai nha âû cá bà ng t ong qua tç sà c kyï
í nh at n ò r ï rnh õ

42. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
+ Phai phuì hå p v ïi l û Det or: v UV-V t çdung mä khä â å c há p
í ü å oai ect d IS h i ng æü ú
t ûqua (vd acid aceticåí bæåïcsangtháúp < 220nm). Det orhuynh qua t çdung mä khä â å c phat
hu ng ï ect ì ng h i ng æü ï
quang.
+ Phai kinh t ú,khä qua hiã m v ìâ õ
í ã ng ï ú a à t
Tong hã sà c kyï há p phuûphaâí (R -HPL phaâ ü l ì dung mä phá cæc l ì :
r û õ ú ao P C) ä ng a i n û a
Næïc,A eOH,a ha Ba hæu cåv ì mä tv ì A ha A cid ..
å CN,M cid y se î a ü ai min y minoa
+ Do sæ t ã næïc v ì dung mä hæ cåt û t ì mä tphaâ ü phá cæc
û h m å ao i îu ao hanh ü ä ng n û
hå chá thæu cånguyã mä tmç noï .V t ã næïc v ì A ha M .. Seî t û â å c
n ú î n ü nh d h m å ao CN y eOH ao æü
phaâ ü phá cæc hå noï . T ú nhiã â üphá cæc phuût ä c v ì t í l ûnæïc â å c
ä ng n û n át n ä n û hu ü ao y ã å æü
tã vì
h m ao.

43. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
+ Ngoa cac dung mä chê t çt ong t ì phá n phaâ ü t ong r ú nhiã u
ìi ï i nh h r hanh ö ä ng r á t ö
tæìng hå p t ï R HPL con coï t ã hä n hå p â û pHâ øä n â nh pH.Chá tt û
r å ü ach P- C ì h m ù ü ãm ã ø ë ú ao
phæ ao cà p ion â øt û r sæ r íagiai t ú nhá t.
ïc,t û û ã ao a û æ í ä t ú
+ Khi choü dung mä t t æìng dæav ì l û r íar í Ecuadung mä t
n i ah å û ao æc æ ai í i heo
í u:
bang sa
BANGÂ ÜPHÁ CÆCCUAM Ü SÄ DUNGM I
Í Ä N Û Í ÄT Ú Ä
01- n Hexan 0.1 04 - Methanol
5.11
02-Tetra Chloro Carbon 1.6 05- Actenitril 5.8
03- Toluen 2.4 06- Næåïc cáút
10.20

44. Phần III : Chọn Điều kiện sắc ký
-Vã c l û choü âã u kiã n sà c kyï l ì cä vã c hã tsæc cá n t ã tt ong
i û æa n i ö û õ a ng i û ú ï ö hi ú r
qua t ç xá dæng chæng tç sà c kyï . Chèkhi l û choü âã u kiã sà c kyï t ú,phuì
ï rnh y û å rnh õ æa n i ö n õ ä t
hå p t çchungt måi coï t ã ë t nh,â nh l å ngâ å c cac l ü i t ä c â t ì phá n
ü h ï a ï h øâ nh ê ë æü æü ï o a hu ú a hanh ö
mä tcach nha chong v ì hiã u qua ca .
ü ï nh ï a û í o
-T ú nhiã phá n l ï t ã tnoi r ú nhiã u v öcac phæng phap choü âã u
á t n ö y huy ú ï á t ö ã ï å ï niö
kiã n sà c kyï t nhiã â øchoü â å c chængt ç sà c kyï t ú â ö hoi phai coï t åi
û õ uy n ã n æü å rnh õ ä t ä i í í h ì
gia ,t ì lã u v ì mä tphá n kinh nghiã m cuanhæng ngæìi l ì sà c kyï
n ai i û a ü ö û í î å am õ

45. Phần IV : Tiến hành sắc ký
- IV -1 Chuáøn bë duûng cuû vaì maïy moïc :
+ M ï HPL phai â å c kiã m chæng t â nh kyìâ øbao âí mayhoü t
ay C í æü ø ï heo ë ã í am ï a
â ü t ú cho kã tqua phá t ch coïâ üâï â ül û l û uyã n t nh,t í l ûdung mä
ä ng ä t ú í nê ä ung, ä à p ai,t ú ê y ã i
,t ú â dong,nà l å ng âì ü....âï t yã cá u t ä sä cuamaydo nha san
ä c ä ì ng æü en ung heo u ö h ng ú í ï ì í
xuá tâ û r .
ú àt a
+ Â û biã tcä tsà c kyï phai â å c kiã m t av ösä é l ï t ã tt â nh
àc û ü õ í æü ø r ã úâ a y huy ú heo ë
kyì ha khi coï nghi ngå v ökha nà t ï ,v ì r íaâï qui â nh sa mä i l ö chaysà c
y ì ã í ng ach a æ ung ë u ù á n û õ
kyï :
v : V ïi sà c kyï phat á n NP- C: r bàòng M
d å õ hu û HPL æía eOH Khäng ræàó
bàòng Næåïc
V ïi sà c kyï phaâí R HPL : Khi chayphaâ ü coï cac l û muä i t ç
å õ ao P- C û ä ng ï oai ú h
phai r íanæïc tæïc cho sach muä i ,sa âï r ía
í æ å rå û ú uo æ

46. Phần IV : Tiến hành sắc ký
- yí l ûA ha M : Næïc (50: 50)cho sach hã tcac chá tcon âü l û
T ã CN y eOH å û ú ï ú ì o ng ai
tong cä tâ ö t åi â øbao v ûcä tkhä bëM ú khi â øá . T ã tâ ú tnh t ang
r ü ä ng h ì ã í ã ü ng ä c ã l u uy û ä i ç r û
chèr íabà ng næïc 10 % sa âúâ øcä t mä tt åi gia khä sæduû chà c chà n
æ ò å 0 u o ã ü ü h ì n ng í ng õ õ
cä tseî bëmä c ,hong khä t ã dung â å c . Xin l u yï nã u r à cä tkhä t ú t çkã t
ü ú í ng h ø ì æü æ ú æó ü ng ä t h ú
qua chaysà c kyï seî khä t ã ap æng â å c cac yã cá u phá t ch .
í û õ ng h øâï ï æü ï u ö n ê
4.2 - Chuáøn bë dung mäi pha âäüng :
Cac dung mä dung cho sà c kyï l ì l û t khiã tHPL
ï i ì õ a oai inh ú C
Cac hoachá tdung phai l ì l û i PA
ï ï ú ì í a oa û
Phadung mä âï ,chê xac t âï t í l ûâî nã ,â øä n â nh dung mä
i ung nh ï heo ung y ã a u ã ø ë i
âï t åi gia t chuyã l á n âî yã cá u .L ü dung mä quamang l ü 0 -0 5 µm
ung h ì n heo nuû a u ö oc i ì o c .2 .4
,Siã á âä i boü khê
u m uø t

47. Phần VI : Kỹ Thuật tiến hành sắc ký
-4.3 Chuáøn bë máùu âo HPLC :
+ M ù T æ: Sæl ï má u t æt âï chuyã l á n ,qui tç t nguyã
á u h í í y ù h í heo ung nuû rnh heo n
tõ :
àc
-Dungmä hoat n hoatchá tphai hoat n t ong phaâ ü ,tong nhiã u t æìng
i ì a û ú í ì a r ä ng r ö rå
hå p dung dung mä phaâ ü â øhoat n má u -Phai l û boí cac chá tkhä t n
ü ì i ä ng ã ì a ù í oai ï ú ng a
tong phaâ ü hoà c khä r à giai â å c bà ng cach l ü ha chiã t..
r ä ng û ng æó í æü ò ï o c y ú
- í l ü v ì l t m ,l ü má u quamang l ü 0 -0 5 µm
Phai o c a y á o c ù ì o c .2 .4
-Nä ng â ümá u å mæc v ìaphai,khä v å tqua kha nà t ï cuacä t ï
ö ä ù í ï æ í ng æü ï í ng ach í ü.Co
t ã gá r nghen cä t
h ø y a î ü.

48. Phần VI : Kỹ Thuật tiến hành sắc ký
Máùu chuáøn :
-
Phadung dë chuá n coï t ì phá n giä ng nhæmá u t æt ong cung dung
ch ø hanh ö ú ù h ír ì
mä ,rã v önä ng â ücac t ì phá n giäng nhæ á u t æl ì t ú nhá t,ngoai r coï
i i ng ã ö ä ï hanh ö ï m ù h í a ät ú ì a
t ã dung nä ng â ükhac nhæ phai nà m tong khoang t ã n t nh âî khao satcua
hø ì ö ä ï ng í ò r í uy ú ê a í ï í
t ìng t ì phá n.
æ hanh ö
4 Cach â HPL :
.4 ï o C
M ù maycoï cach v û hanh khac nha t ì t äüv ì hang san xuá t,phá n
äi ï ï án ì ï u uy hu c ao î í ú ö
mã n sà c kyï . T nhiã cach v û hanh l ä phai t nguyã t ïc sa :
ö õ uy n ï á n ì u n í heo nà u
+ chaymayv ïi dung mä phaâ ü â øâ í hã tboü khêcoï t ong hã t ä ng
û ï å i ä ng ã uoi ú t r ûh ú
ä ng dá n tæïc khi cho v ì cä t
ú ù rå ao ü.

49. Phần VI : Kỹ Thuật tiến hành sắc ký
+ Âàût âáöy âuí caïc âiãöu kiãûn sàõc kyï
nhæ :
* Cáúu hçnh maïy
* Tyí lãû caïc dung mäi pha âäüng
* Bæåïc soïng,thaình pháön máùu, caïc
thäng säú cuía quaï trçnh phán têch yãu cáöu .

50. Phần V
Hệ thốngsắc ký Merck - Hitachi
và phần mềm điều khiển
D7000 – Multi HSM manager
(Sẽ bổ sung sau)
Ngæìi vã t
å iú
KSPha Hiã n L å
n ö æng
M il: l
a uonghoa @yma .com
k8 il