Analize farmaceutike

1. Testimi i flokeve te njeriut per abuzimin me
kokainen dhe indentifikimi i metaboliteve te saj
Punoi :
Arjeta Demushi
Farmaci viti 5
UMT

2. Permbajtja :
– Hyrja
– Mostrat e flokeve
– Pergatitja e flokeve dhe procedura e larjes
– Ekstraktimi acid i flokeve
– Procedura e derivatizimit
– Analiza GC/MS
– Perfundime
– Referenca

3. Hyrje
 Dy jane metabolitet
unike të kokainës,
kokaetileni dhe
norkokaina te cilet janë
identifikuar nga GC / MS
në flokët e përdoruesve
te kokaines. Prania e tyre
ne floke vjen vetem pas
administrimit te
kokaines.
 Testimi i flokëve për abuzimin
me droga ofron mundesine për
zbulimin e ekspozimit të drogës
gjatë një periudhe të zgjatur
kohore sepse flokët rriten me
një normë mesatare prej 1-1,5
cm / muaj, mund të jetë të jetë
e mundur për të testuar
gjatësinë e flokëve qe paraqet
ekspozimin ndaj perdorimit te
drogave.

4. – Zbulimi i një metaboliti
të veçantë të kokainës
në flokë, prania e të cilit
nuk mund të shpjegohet
me ekspozim mjedisor,
verteton në mënyrë të
qartë se ekspozimi i
brendshëm i kokainës
vjen te një individ nga
perdorimi i vet individit.
– Qëllimi i këtij studimi
eshte zhvillimi dhe
zbatimi i analizës së GC /
MS për kokainën dhe
metabolitëve të
kokainës në mostrat e
flokëve të përfituara nga
përdoruesit aktivë.

5. Mostrat e flokeve
– Mostrat e flokeve jane marre ne qendrat ambulatore ku
ndodheshin rreth 180 te shtruar per abuzim ndaj kokaines
dhe pasi rezultatet e analizave te urines se tyre treguan
nivele te larta te kokaines.Prej tyre u zgjodhen 10 paciente
te cilet ishin me perdorues te kokaines dhe prej tyre u
moren mostra flokesh. Prerja e flokëve u be ne gjatesi të
ndryshme nga 3-10 cm duke u marre nga skajet e boshteve
të flokëve.Studimi i flokëve eshte kryer sipas udhëzimeve
për mbrojtjen e subjekteve njerëzore dhe çdo vullnetar
dha pëlqimin e informuar.

7. Pergatitja e flokeve dhe procedura e larjes
Mostrat e flokeve te marra priten me gershere kirurgjikale
ne segmente rreth 1mm dhe peshohen sakte.Mostra e
flokut lahet para analizës për të hequr lipidet, vajrat dhe
produktet kozmetike te perdorura ne to.Megjithatë,
efikasiteti i procedurave të larjes në heqjen e kokainës të
depozituar në flokë nga burime të jashtme është e
diskutueshme.Ne shumicën e rasteve larja e mostrës së
flokëve (5 deri në 10 mg) behet me 1 mL metanol ne banjo
mari per 15 minuta në 37°C dhe me pas behen tre larje me
tampon fosfat (pH 6) në 37°C . Larja me metanol dhe
tamponin fosfat behen te ndara nga njera tjetra.

8. Ekstraktimi acid I flokeve
– Pas procedurës së larjes mostrat e flokëve thahen
tërësisht dhe ne to shtojme 1 ml 0,05M acid sulfurik dhe e
vendosim enen ne banjë me ujë të ngrohtë të pajisur me
fushe magnetike. Mostrat lihen gjate gjithe nates ne banjo
mari ne 37°C.Pas ftohjes ekstrakti i acidit mblidhet ne nje
gyp qelqi.

9. Procedura e derivatizimit
– Alikuotat e ekstraktit të acidit neutralizohen me solucion 1.0M NaOH.PH e
ekstraktit rregullohet deri ne pH 4,0 me 1 mL 2M acetate natriumi per
përgatitje për SPE (ekstraktim I fazave te ngurta). Kolonat SPE jane montuar
në një vakuum ekstraktimi të shumëfishtë dhe permbajne 1 ml metanol (x2)
dhe ujë të dejonizuar (x 2). Acetati i natriumit (0.2mL) aspirohet në kolonë e
ndjekur nga mostra. Vakuumi aplikohet për të prodhuar një rrjedhje kolone
prej 1-2 ml / min.Kolonat lahen me 0,5 ml ujë të dejonizuar, 1 ml 0.1M acid
klorhidrik dhe 2 x 1 ml metanol dhe aspirohet në thatësi.Analitet eluojne nga
kolona me 3 x 1 ml solucion metilen dhe klorur-2-propanol (8: 2) që
përmbajnë 2% hidroksid amoni. Eluatet avullohen deri në thatësi me azot dhe
riformohen me 0.02 ml acetonitrile. Mostrat transferohen në shishe
termorezistente,mbyllen dhe ngrohen në 60°C për 30min. Menjëherë pas
derivatizimit mostra e pergatitur analizohet me GC / MS.

10. Analiza GC/MS
– Mostra e pergatitur analizohet me kromatografi te gazte te
lidhur me nje mas spektometer me dedektor FID (
dedektori me jonizim me flake). Gazi transportues eshte
heliumi I cili leviz me shpejtesi 1ml/min. Temperatura
eshte monitoruar 120°C per 1 minute pastaj rritet 220°C
duke u rritur me 35°C per minute dhe ne fund
temperatura cohet ne 250 °C duke u rritur me 10°C per
minute.Kur arrihet kjo temperature behet injektimi i
mostres.Pasi mostra u injektua jane mbahen shenim kohet
e daljes se secilit metabolit.

11. HP 5971 GC/MS with HP 5890 Series II GC

12. 1. Esteri metilik i ekgonines- 271nm, Rt =3.5 min
2. Kokaina -303nm, Rt=6.36 min
3. Benzilekgonina- 361 nm, Rt=6.85 min
4. Norkokaetileni- 361 nm, Rt=7.29 min
5. Norkokaina-240nm, Rt=6.99min
6. Kokaetileni-271nm, Rt=6.7 min

14. Spektri standart i
kokaetilenit

15. Spektri i kokaetilenit ne ekstraktin e
flokeve te njeri prej perdoruesve
Im= papasterti ne ekstrakt

16. Sipas analizes te kryer u arrit ne perfundimet:
1. Kokaina dhe metabolitet e saj grumbullohen ne floke.
2. Analiza e flokeve eshte shume efikase per te zbuluar edhe sasite me
te vogla te kokaines tek perdoruesit duke qene se ajo qendron me
gjate ne floke e grumbulluar se ne pjeset e tjera te trupit te njeriut.
3. Kokaina eshte analiti kryesor qe grumbullohet ne floke ndersa
metabolitet qe u gjenden ne sasite me te medha jane norkokaina
dhe kokaetileni.
4. Keta metabolite nuk ndodhen ne drogat e paligjshme dhe
formohen vetem ne prani te alkoolit gje qe tregon qe keta
perdorues te kokaines pervecse kokaines jane dhe perdorues te
alkoolit.

17. Referencat:
– http://druglibrary.org/schaffer/cocaine/cokehair.htm
– https://www.ncjrs.gov/pdffiles1/nij/grants/225531.pdf
– https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1002/dta.1903
– http://mefanet.upol.cz/BP/2005/2/199.pdf
– file:///C:/Users/German/Desktop/kokaine%20pr.pdf
– https://www.sigmaaldrich.com/analytical-
chromatography/sample-preparation/spe.html
PS : Studimi eshte bere nga Instituti Kombetar I Abuzimit te
Drogave,Baltimore,Maryland, USA