1. PRÁCTICA – EXTRACCIÓN DO ADN
OBXECTIVOS
• Aprender técnicas sinxelas de extracción de moléculas de ADN
dun tecido.
• Identificar a estrutura fibrilar do ADN.
MATERIAIS E REACTIVOS
• Vasos de precipitados.
• Pipeta.
• Probeta.
• Tubo de ensaio.
• Pinzas.
• Culler.
• Varilla de vidro.
• Anaco de tea.
• Batedora.
• Microscopio.
• Portaobxectos.
• Cubreobxectos.
• Fígado.
• Líquido lavalouza.
• Cloruro sódico 2M.
• Auga destilada.
• Alcohol de 96º.
2. PROCEDEMENTO
1. Mesturar no frasco da batedora 50 g de fígado con 50 ml de auga
destilada.
2. Bater durante 20 segundos.
3. Filtrar varias veces sobre unha tea para separar os restos de tecidos
que quedan sen rachar.
4. Medir o volume do filtrado cunha probeta.
5. Engadir ao filtrado un volume igual de cloruro sódico 2 M. Deste
xeito conséguese estalar os núcleos para que queden libres as fibras
de cromatina.
6. Pasar o filtrado ao vaso de precipitados.
3. 7. Engade unha cullerada de líquido lavalouza. A súa acción é formar
un complexo coas proteínas e separalas do ADN. Deste xeito
quedará o ADN libre das proteínas que ten asociadas.
8. Engadir mediante unha pipeta 50 ml de alcohol de 96º. Hai que
facelo de forma que esvare polas paredes do vaso e se formen dúas
capas. Na interfase, precipita o ADN.
9. Deixar repousar durante uns minutos. Ollarás que vai subindo e
mesturándose co alcohol unha maraña de fíos brancos ; trátase do
ADN.
10.Recolle os fíos coa variña de vidro e introdúceos nun tubo de ensaio
con alcohol.
11.Coloca unha fibra no portaobxectos, engade unha pinga de auga e
coloca o cubreobxectos.
12.Coloca a mostra no microscopio óptico e observa o ADN.
13.Lava e recolle o material empregado.