Dins del Projecte Argó, hem treballat durant dos setmanes a l'IBB (UAB) fent diferents experiments utilitzant nanopartícules i cèl·lules Hela. Ha estat una gran experiència endinsant-nos en la nanobiologia, un món fascinant i que encara amaga moltes incògnites

1. Aida Giol Castro, Ignasi Solé Clua, Manel Queral Martínez
Tutors: Julia Lorenzo i Javier García
IBB: Departament d’enginyeria de proteïnes i proteòmica
Programa Argó 2016

2.  1. Introducció
 2. Cèl·lules Hela
 3. Preparació de portaobjectes per comprovar la internalització de
NPs en cèl·lules Hela
 4. Observació de la incorporació de les NPs en microscopi confocal
 5. Proves de citotoxicitat en NPs amb cisplatí i/o doxorrubicina
◦ 5.1 Gràfiques IC50

3.  Càncer: Conjunt de patologies relacionades amb la divisió
descontrolada de cèl·lules d’un teixit.
 Tumor: Massa amorfa de cèl·lules , símptoma del càncer.
◦ Benigne
◦ Maligne (Metàstasi)

4.  Una nanopartícula càpsula amb fàrmacs
a l’interior d’un tamany que oscil·la entre
80-120nm de diàmetre.
 Ddiàmetre més gran que les partícules de fàrmac + elevada
electronegativitat  Aconsegueix superar les defenses i els filtres del
cos
 NPs contra
el càncer
 Venes i capil·lars defectuosos en un tumors  Coàguls,
major concentració de NPs en cèl·lules cancerígenes
(menys danys a les cèl·lules no tumorals)

5.  Cisplatí i doxorrubicina  fàrmacs per combatre les cèl·lules
tumorals.
 Objectiu  Veure si encapsulant aquests fàrmacs, s’augmenta
l’eficiència en vers els fàrmacs lliures.
Doxorrubicina
Cisplatí

6.  Cèl·lules de cultiu cel·lular utilitzades en investigació científica
 Pertanyen a Henrietta Lacks (HeLa)
pacient de càncer cèrvix-uterí
 Línia de cèl·lules tumorals molt
duradora i prolífera

8. Nivell 2 de seguretat biològica

9. Bany tèrmic 37ºC Netejar en PBS i
tripsinitzar
Centrifugar a 1400 rpm
Preparar les
càpsules de Petri
amb cobreobjectes
1,5 ml dissolució /
càpsula

10. Tota la nit incubadora 20 μl NPs doxo+cis 2 plaquetes
1 plaqueta control
2 h incubadora
Aspirar medi
Posem 1ml PBS, agitem i aspirem
Posem 500 μl
metanol/càpsula  fixar les
cèl·lules al cobreobjectes

11. 15min. congelador
Traiem metanol
Posem 0,5ml PBS Dissolució 1:500
Dapi+PBS (1,5 ml total)
Aspirem PBS i
afegim 0,5ml
dissolució Dapi+PBS
15min. agitador Traiem Dapi+PBS, netejem
amb PBS i ho aspirem
Posar els cobreobjectes del fons de
les plaquetes en un portaobjectes

12. MICROSCOPI DE FLUORESCÈNCIA

15. •NPs cis (50 μg/ml)
•NPs cis + doxo (50μg/ml)
(10 μg/ml)
3h incubadora
Raigs ultraviolats
 esterilitzar

16. Posar el marcador Hoescht
MICROSCOPI CONFOCAL

24. Cèl·lules sobrants
del dia anterior
Netejar en PBS i
tripsinitzar Centrifugar a
1400 rpm
Preparem una
dissolució 1:13
Pipeta
multicanal
sembrem les
cèl·lules
96 pouets  (200μl)
60medi+cèl·lules+fàrmac
36 medi

25. 150 μg/ml24 h

26. 0,5 μg/ml 30 μg/ml

27. 0,5 μg/ml 30 μg/ml

28. 125 μg/ml 250 μg/ml

29. 0,5 μg/ml 125 μg/ml

30. N e u ro b la s to m a c e lls
0 1
1
1
2
7
5
4
1
0
8
1
8
8
2
6
9
5
3
8
0
2 0
4 0
6 0
8 0
1 0 0
1 2 0
D O X O -C P P s C o n c e n tra tio n (P t  M )
Cellviability(%)
N e u ro b la s to m a c e lls
0
1
1
1
2
7
5
4
1
0
8
1
8
8
2
6
9
5
3
8
0
2 0
4 0
6 0
8 0
1 0 0
1 2 0
P tIV C o n c e n tra tio n (P t  M )
Cellviability(%)
IC50 > 500 µMIC50 ~ 7 µM Pt- 175 ng/ml
Doxo