Dokumen ini membahas tentang pemeriksaan kadar urea dalam darah, termasuk metabolisme, metabolisme, dan berbagai metode pengukurannya. Kadar urea berfungsi sebagai indikator kesehatan renal, dengan pengukuran yang bergantung pada berbagai faktor seperti diet dan fungsi ginjal. Terdapat beberapa metode pengukuran urea, seperti metode enzimatik, kimia, dan konduktimetri, dengan nilai rujukan yang bervariasi tergantung metoda dan kondisi individu.

1. PEMERIKSAAN
BUN
( BLOOD UREA NITROGEN )
Robiul Fuadi / Dra. Soehartini B. S., MS, Apt
1

2. Pendahuluan
• Urea adalah senyawa nitrogen non protein
terbesar dalam darah
• Sebelumnya, pengukuran urea berdasarkan
penghitungan nitrogen balance, dan dinyatakan
dalam Blood Urea Nitrogen
• Istilah ini berlanjut,walaupun urea diukur
langsung dengan spesimen menggunakan serum
• Urea (mg/dl) = 2,14 x BUN (mg/dl)
BUN (mg/dl) = 0,466 x urea (mg/dl)
2

3. Struktur Urea
O
C
H2N NH2
3

4. Metabolisme
• Urea disintesis dalam hepar
• 90% urea diekskresi lewat urine
• kurang dari 10% sisanya diekskresikan lewat
saluran gastrointestinal dan kulit
• Konsentrasi urea plasma tergantung perfusi
dan fungsi renal, jumlah diet protein, dan
tingkat katabolisme protein dalam tubuh
4

5. Manfaat klinis
• Meningkatnya konsentrasi Non Protein Nitrogen dalam
darah disebut azotemia
• Uremia adalah gejala-gejala yang terjadi akibat
meningkatnya urea plasma
• Penyebab azotemia dapat prerenal, renal, atau post
renal
• Shock, perdarahan, dehidrasi, gagal jantung,
menyebabkan penurunan aliran darah ke ginjal,
mengakibatkan prerenal azotemia
• Diet protein dan metabolisme protein berpengaruh
terhadap konsentrasi urea dalam darah
5

6. • Gagal ginjal akut dan kronik, glomerular
nefritis, tubular nekrosis, dan penyakit instrinsik
renal yang lain menyebabkan Renal azotemia.
• Obstruksi traktus urinarius oleh batu ginjal, tumor
kandung kemih atau prostat, atau karena infeksi
berat dapat menyebabkan Postrenal azotemia
• Nilai normal rasio kadar BUN/kreatinin adalah
10:1 – 20:1
• Nilai rasio naik:
- kadar kreatinin normal prerenal
- kadar kreatinin naik postrenal
• Rasio yang rendah terdapat pada kondisi yang
berhubungan dengan menurunnya produksi urea
6

7. Metode Pemeriksaan
Ada tiga metode dalam pengukuran urea, antara lain:
• Metode isotope-dilution mass spectrometry
• Metode enzimatik,meliputi:
GLDH Coupled enzymatic
Berthelot
konduktimetri
Ion Selective Electrode
Dengan menggunakan indikator warna (dye
indicator)
• Metode Kimia, meliputi:
Diacetyl Monoxime
o-Phthaldehyde
7

8. Prinsip Reaksi Enzimatik
Urea + 2H2O Urease 2 NH4+ + CO32-
Metode enzimatik disebut metode indirek
karena menggunakan enzim urease
Jumlah ion ammonium yang dihasilkan
diukur dengan berbagai metode
8

9. Metode GLDH Coupled Enzymatic
Urea + 2H2O Urease 2 NH4+ + CO32-
NH4+ + 2-oxoglutarate glutamat dehidrogenase Glutamat + H2O
NADH NAD+
+ H+
• Serapan NAD+ diukur pada panjang
gelombang 340 nm dan 365 nm.
• Suhu pengukuran pada 25oC, 30
oC, atau 37 oC
9

10. Metode GLDH Coupled Enzymatic
Reagen
Ada 2 reagen:
o Reagen I (R1): Tris buffer (pH 7,8), ADP, Urease, GLDH
o Reagen II (R2): 2-oxoglutarate dan NADH
Dapat disiapkan dengan 2 cara :
Secara terpisah
Working reagent, R1 : R2 = 4 : 1
10

11. Metode GLDH Coupled Enzymatic
Cara Kerja
• Ada 2 prosedur berdasarkan reagen yang
telah disiapkan :
Prosedur dengan R1-R2 secara terpisah (tabel 1)
Prosedur dengan working reagent (tabel 2)
11

12. Metode GLDH Coupled Enzymatic
Tabel 1.Prosedur dengan R1-R2 terpisah
Reagen Blanko Sampel atau standar
Sampel / standar --------- 10 µl
R1 1000 µl 1000 µl
Campur, inkubasi sekitar 1 menit
R2 250 µl 250 µl
Campur, baca nilai absorben sampel/standar setelah 30 detik (A1), dan baca lagi
setelah tepat I menit (A2). Hitung perbedaan absorben dengan:
A sampel/standar = (A2-A1) - A Rb
12

13. Metode GLDH Coupled Enzymatic
Tabel 2.Prosedur dengan Working Reagent.
Reagen blanko Sampel atau standar
Sampel / standar ------- 10 µl
Working reagent 1000 µl 1000 µl
Campur, baca nilai absorben sampel/standar setelah 30 detik (A1), dan baca lagi
setelah tepat I menit (A2). Hitung perbedaan absorben dengan:
A sampel/standar = (A2-A1) - A Rb
13

14. Metode GLDH Coupled Enzymatic
Menghitung Konsentrasi Urea
Konsentrasi urea (mg/dl) = Ks x A sampel/ A standar
Ks = konsentrasi standar
14

15. Metode GLDH Coupled Enzymatic
Linieritas
• Metode ini linier pada kadar 5 - 400 mg/dl
urea atau 2-186 mg/dl BUN.
15

16. Metode GLDH Coupled Enzymatic
Interferen
• Ammonia endogen, tetapi dapat dieliminasi
dengan metode analisis kinetik
• Tidak dipengaruhi oleh hemoglobin hingga
500 mg/dl, trigliserid hingga 2000
mg/dl, glukosa hingga 500 mg/dl, dan asam
askorbat hingga 30 mg/dl
16

17. Metode Berthelot
Urea + 2H2O Urease 2 NH4+ + CO32-
NH4+ + 5 NaOCL + 2phenol Nitroprusside/OH- indophenols + 5NaCl + 5H2O
• Absorben dari indophenols yang berwarna biru, diukur
pada panjang gelombang 560 nm
• Metode ini kurang spesifik, karena sangat sensitif
terhadap interferen, terutama dari ammonia endogen.
17

18. Metode Konduktimetri
Urea + 2H2O Urease 2 NH4+ + CO32-
• Ion amonium yang dihasilkan akan
meningkatkan konduktifitas suatu larutan
• Besarnya perubahan konduktifitas sebanding
dengan jumlah urea yang dipecah
18

19. Metode Ion Selektif Elektrode
Urea + 2H2O Urease 2 NH4+ + CO32-
• Urea sampel berdifusi melalui membran yang
mengandung urease sehingga mengalami
hidrolisis menjadi NH 4+.
• Selanjutnya yang diukur:
- NH4+ dengan ammonium ion selective electrode
- Peningkatan pNH3, diukur dengan elektrode gas NH3
- Peningkatan pH, diukur dengan elektrode gelas pH
19

20. Metode dengan Menggunakan Indikator Warna
(Dye Indicator)
Urea + 2H2O Urease 2 NH4+ + CO32-
NH4+ + OH- NH3 + H20
NH3 + indikator pH perubahan warna
• Perubahan warna yang terjadi, diukur dengan
fotometer refleksi
20

21. Metode Diacetyl monoxime
Diacetyl monoxime + H20 H+ diacetyl +HONH2
Urea +diacetyl H+ diazine (kuning) + 2H2O
• Serapan diukur pada panjang gelombang 540 nm
• Ammonia tidak mengganggu pengukuran
• Fotosensitif, produk warna yang dihasilkan tidak stabil
21

22. Metode o-Phthaldehyde
Urea + o-phthalaldehyde H+ isoindoline
Isoindoline + N-(1-naphthyl)ethylenediamine H+ kompleks yang berwarna
• kromogen diukur pada panjang gelombang 510
nm
• Senyawa amin primer lain mengganggu
pemeriksaan ini
22

23. Spesimen
• Dapat diukur dalam plasma, serum, atau urine
• Jika memakai plasma, ammonium heparine, sodium
citrate dan sodium fluoride harus dihindari
• sampel yang hemolisis, sebaiknya dihindari
• Urine sampel diencerkan (1:20 hingga 1:50)
• Urea dalam serum stabil setidaknya 1 hari dalam
temperature ruangan, beberapa hari di lemari
es, dan stabil selama 6 bulan bila dibekukan
23

24. Nilai Rujukan
• Tergantung pada metode ,umur, dan variasi
konsumsi protein
Metode Nilai rujukan (serum) Urea pada urine (rata-
rata diet)
Urease/GLDH 5-17 mg BUN/dl (10,7-36,5 mg urea/dl) 7-16 g BUN/24 jam
Urease conductivity 6-20 mg BUN/dl (12,9-42,9 mg urea/dl)
Diacetyl monoxime 8-26 mg BUN/dl (17,2-55,8 mg urea/dl)
24

25. TERIMA KASIH
25

26. • Berat atom nitrogen =14 g/mol
• Rumus moleku urea CO (NH2)2 dengan berat
molekul 60 g/mol ( C = 12, O =16, N = 14, H =
1)
• Satu molekul urea dari 2 atom nitrogen
• Urea nitrogen (urea-N)merupakan 46,6%
dari berat urea (28 dibagi 60)
BUN (mg/dl)= 0,466 X urea (mg/dl)
• Maka, 1 mg/d BUN dibagi 0,466 = 2,146
urea atau
Urea (mg/dl) = 2.14 x BUN(mg/dl)
26

27. • Urea mg/dl menjadi mmol/L:
Urea mmol/l = urea mg/dl X 10
berat atom/molekul urea
= mg/dl X 10/60
= 0,167 urea mg/dl
• BUN mg/dl menjadi mmol/L:
BUN mmol/l = BUN mg/dl X 10
28
= 0,357 X BUN mg/dl
27

28. 28

29. TANGGAL HASIL -3SD -2SD MEAN 2SD 3SD
1 Juli- 14 Agt 09 1/6/2009 18.9 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
2/6/2009 19.3 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
3/6/2009 19.2 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
6/6/2009 20.8 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
7/6/2009 18.7 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
9/6/2009 19.3 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
10/6/2009 19.2 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
13/6/2009 20.2 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
14/6/2009 19.4 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
15/6/2009 20.5 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
16/6/2009 18.7 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
17/6/2009 19.3 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
21/6/2009 20.2 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
22/6/2009 19.4 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
23/6/2009 19.1 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
24/6/2009 18.7 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
27/6/2009 19.9 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
28/6/2009 19.7 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
29/6/2009 19.9 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
30/6/2009 20.8 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
31/6/2009 21.7 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
4/8/2009 20.9 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
5/8/2009 20.6 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
6/8/2009 20.6 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
7/8/2009 21.0 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
10/8/2009 22.7 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
11/8/2009 21.9 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
12/8/2009 21.1 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
13/8/2009 21.6 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
14/8/2009 21.3 18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
18.59 19.07 20.03 20.98 21.46
29

30. LEVEY-JENNINGS BUN 1/6-14/8 '09
22,5
21,5
HASIL
-3SD
20,5 -2SD
MEAN
19,5 2SD
3SD
18,5
17,5
30