1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29751
(51) C12N 15/10 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0671.1
(22) 15.05.2014
(45) 15.04.2015, бюл. №4
(72) Сарбаканова Шолпан Таупиковна (KZ); Волков
Александр Анатольевич (RU); Шалгимбаева
Гульмира Мухаметкалиевна (KZ)
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) Ivanova N.V., Dewaard J.R., Hebert P.D.N. An
inexpencive, automation-frendly protocol for recovering
high-quality DNA // Molecular Ecology Notes.
Technical note. Doi:10.1111/j.1471-5-
8286.2006.01428.x (2006), P.1-5
(54) НАБОР БУФЕРОВ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И
ОЧИСТКИ ДНК НА СИЛИКАТНОМ
СОРБЕНТЕ
(57) Изобретение относится к области
молекулярной биологии, в частности к способам
выделения и очистки ДНК, и может быть
использовано при молекулярно-генетических
исследованиях для получения высокоочищенной
ДНК для проведения полимеразной цепной реакции.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в использовании
эффективных буферов при выделении и очистке
ДНК на силикатном сорбенте.
Набор буферов для выделения и очистки ДНК на
силикатном сорбенте, включающий связывающий
буфер, буфер отмывающий белки и промывочный
буфер, связывающий буфер содержит 2М ацетат
натрия, 10% уксусную кислоту, pH 6,0 и 50%
этиловый спирт, при этом буфер отмывающий
белки состоит из 300 мл связывающего буфера,
100 мл 50% этилового спирта и 200 мл 100%
изопропилового спирта, причем буфер
промывочный содержит 70% этиловый спирт,
10 мМ хлористый калий и 10 мМ Трис-HCL буфер с
pH 7,0.
(19)KZ(13)A4(11)29751

2. 29751
2
Изобретение относится к области молекулярной
биологии, в частности к способам выделения и
очистки ДНК, и может быть использовано при
молекулярно-генетических исследованиях для
получения высокоочищенной ДНК для дальнейшего
анализа с помощью полимеразной цепной реакции.
Известен набор буферов для очистки и
выделения ДНК на силикатном сорбенте,
включающий связывающий буфер, буфер
отмывающий белки и промывочный буфер
[N.V. Ivanova, J.R. Dewaard, P.D.N. Hebert. An
inexpencive, automation-frendly protocol for recovering
high-quality DNA // Molecular Ecology
Notes.Technical note. doi: 10. 1111/j .1471-5-
8286.2006.01428.x (2006), Р.1-5].
Недостатком указанного набора буферов
являются затраты большого количества времени при
очистке и выделении ДНК на силикатном сорбенте.
Задачей изобретения является сокращение
времени при выделении и очистке ДНК на
силикатном сорбенте.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в использовании
эффективных буферов при выделении и очистке
ДНК на силикатном сорбенте.
Набор буферов для выделения и очистки ДНК на
силикатном сорбенте, включающий связывающий
буфер, буфер отмывающий белки и промывочный
буфер, связывающий буфер содержит 2М ацетат
натрия, 10% уксусную кислоту, pH 6,0 и 50%
этиловый спирт, при этом буфер отмывающий белки
состоит из 300 мл связывающего буфера, 100 мл
50% этилового спирта и 200 мл 100%
изопропилового спирта, причем буфер
промывочный содержит 70% этиловый спирт,
10 мМ хлористый калий и 10 мМ Трис-HCL буфер с
pH 7,0.
Изобретение осуществляется следующим
образом.
К 0,2 мл лизата добавляют 0,6 мл связывающего
буфера, вносят в пробирки-колонки с силикатным
сорбентом. Не связавшуюся с сорбентом ДНК
удаляют на водоструйном насосе или
центрифугированием при 4000 об/мин, 60 сек при
4°С. Затем промывают 2 раза по 0,6 мл буфером
отмывающим белки и 2 раза по 0,6 мл
промывочным буфером на водоструйном насосе. В
конце проводят центрифугирование при
4000 об/мин, 60 сек при 4°С, подсушивают при
комнатной температуре перевернутые на салфетки
пробирки-колонки. Затем проводят элюирование
ДНК подогретой до 60-80°С деионизованной водой
по 0,1 мл.
Таким образом, предложенный для выделения и
очистки ДНК на силикатном сорбенте набор
буферов обеспечивает ускорение, удешевление и
упрощение процесса получения высокоочищенной
ДНК.
Использование набора буферов для выделения
ДНК позволит сократить время при выделении и
очистке ДНК на силикатных сорбентах для
дальнейшего её анализа в ПЦР.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Набор буферов для выделения и очистки ДНК на
силикатном сорбенте, включающий связывающий
буфер, буфер отмывающий белки и промывочный
буфер, отличающийся тем, что связывающий
буфер содержит 2М ацетат натрия, 10% уксусную
кислоту рН 6,0 и 50% этиловый спирт, при этом
буфер отмывающий белки состоит из 300 мл
связывающего буфера, 100 мл 50% этилового
спирта и 200 мл 100% изопропилового спирта,
причем буфер промывочный содержит 70%
этиловый спирт, 10 мМ хлористый калий и 10 мм
Трис-НСL с рН 7,0.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Сакалова