rincipi i mjerenje likvidnom kromatografijom i masenom spektrometrijom

1. 1
Načelo i performanse tekuće kromatografije-spektrometrije mase
(LC-MS)
Ljubica Glavaš-Obrovac
Uvod
Kromatografija je tehnika separacije koriste za odvajanje samog spoja iz pojedinačne smjese pomoću
stacionarne i mobilnu fazu. Kromatografsko razdvajanje se temelji na načelima kiralnosti, ionskom izmjenom,
afinitetom, molekulske isključenja, adsorpcije i podijeli. Prema stanju mobilne faze, kromatografijom može se
podijeliti u plinskom kromatografijom, tekućinskom kromatografijom, i superkritičnu tekuću kromatografiju.
Prema geometrijskim oblicima stacionarne faze, kromatografijom može se podijeliti na koloni i ravne
kromatografijom (papir kromatografije i tankoslojna kromatografija).
Kombinacija kromatografijom sa spektrometrijom najprije je prikazana u 1967. i prvom tekućinskom
kromatografijom-masenom spektrometrijom (LC-MS) sustav uveden je u 1980-ima. LC-MS je analitička kemijakromatografijom-masenom spektrometrijom (LC-MS) sustav uveden je u 1980-ima. LC-MS je analitička kemija
tehnika koja kombinira fizičke sposobnosti separacija tekuće kromatografije s masenom analizom i spektrometrije
mase. LC-MS je sada rutinu tehnika pruža jednostavan i robustan sučelje za određivanje široku paletu spojeva u
biološkim uzorcima u okruženju istraživanja i klinička laboratorijska 1. Velike brzine skeniranja omogućuju visokbiološkim uzorcima u okruženju istraživanja i klinička laboratorijska 1. Velike brzine skeniranja omogućuju visokbiološkim uzorcima u okruženju istraživanja i klinička laboratorijska 1. Velike brzine skeniranja omogućuju visok
stupanj multipleksiranja i mnogi spojevi mogu se mjeriti u jednom analitičkom vožnji ( Slide 2 ).stupanj multipleksiranja i mnogi spojevi mogu se mjeriti u jednom analitičkom vožnji ( Slide 2 ).stupanj multipleksiranja i mnogi spojevi mogu se mjeriti u jednom analitičkom vožnji ( Slide 2 ).
Tekućinska kromatografija-masena spektrometrija (LC-MS) sustava
Komponente LC-MS su tekući kromatograf (LC) i maseni spektrometar (MS) koji su međusobno povezani
sučelja, koji ima višestruku ulogu: tekući otpuštanje, neutralizaciju neutralnih molekula i uvođenje analita u
analizator ( Slide 3 ). prijelazi cross-flow pojavljuju u intermedijer se isparavanje i desorpcija 2.analizator ( Slide 3 ). prijelazi cross-flow pojavljuju u intermedijer se isparavanje i desorpcija 2.analizator ( Slide 3 ). prijelazi cross-flow pojavljuju u intermedijer se isparavanje i desorpcija 2.analizator ( Slide 3 ). prijelazi cross-flow pojavljuju u intermedijer se isparavanje i desorpcija 2.analizator ( Slide 3 ). prijelazi cross-flow pojavljuju u intermedijer se isparavanje i desorpcija 2.
Tekuća kromatografija ( LC)Tekuća kromatografija ( LC)
Najčešće koristi tekućinska kromatografija (LC) metoda je kromatografija na koloni koja se tiče tekućina
kao mobilne faze. Osnovni LC sustav sastoji se od (a) otapalo ulazni filtar, (b) pumpe, (c) inline filter otapalo, (d)
ubrizgavanje ventil (e) prije kolone filtar, (f) kolonu, (g) detektor, (h) za snimanje, (i) regulator protutlak, i (j)
spremnik za otpatke. Kao što je prikazano ( Slide 4 ), ulazni otapalo dovodi u mobilnom fazom koja se zatimspremnik za otpatke. Kao što je prikazano ( Slide 4 ), ulazni otapalo dovodi u mobilnom fazom koja se zatimspremnik za otpatke. Kao što je prikazano ( Slide 4 ), ulazni otapalo dovodi u mobilnom fazom koja se zatimspremnik za otpatke. Kao što je prikazano ( Slide 4 ), ulazni otapalo dovodi u mobilnom fazom koja se zatim
pumpa kroz filtar otapala inline i propušta kroz ventil za ubrizgavanje. Ovo je mjesto gdje se uzorak uvodi u putu
protoka mobilne faze. To onda dobiva prošao kroz još jedan filter, a zatim propusti kroz kolonu u kojoj je uzorak
će biti podijeljen u dijelove. Detektor otkriva odvajanje analita i rekordera, obično računalo će zabilježiti tu
informaciju. Uzorak se zatim ide

2. 2
preko povratnog tlaka filtra i otpad. LC ima veliku prednost na sposobnost odvajanja složenih uzoraka, tako da
je najučinkovitija opcija kada je potrebna odvajanje smjese, ali nije prikladan za dobivanje strukturne informacije
o materijalu 3. Tekuća kromatografija visokog učinka (HPLC) je modificirana na osnovi klasičnog LC. To je obliko materijalu 3. Tekuća kromatografija visokog učinka (HPLC) je modificirana na osnovi klasičnog LC. To je obliko materijalu 3. Tekuća kromatografija visokog učinka (HPLC) je modificirana na osnovi klasičnog LC. To je oblik
koloni koja pumpa analita u mobilnoj fazi pod visokim tlakom kroz kolonu sa kromatografskog materijala za
pakiranje (stacionarne faze). HPLC ima sposobnost razdvajanja i identifikaciju spojeva, koji su prisutni u bilo
kojem uzorku koja se može otopiti u tekućini u koncentracijama koje su niže od tragova dijelova na bilijun. Ove
razdvajanja su korisni u području proteomici gdje su potrebne visoke osjetljivosti i razlučivosti prepoznati što
više komponenti moguće 1-3.više komponenti moguće 1-3.
Masena spektrometrija (MS)
Masena spektrometrija je analitička tehnika široko korištena za kvantifikaciju poznatih materijala, za
identifikaciju spojeva nepoznatih u uzorku, te se razjasniti strukturu i kemijska svojstva različitih molekula. MS jeidentifikaciju spojeva nepoznatih u uzorku, te se razjasniti strukturu i kemijska svojstva različitih molekula. MS je
naširoko koristi zbog svoje visoke selektivnosti, visoka osjetljivost i sposobnost pružanja informacija, uključujući
relativne molekulske mase i strukturnih karakteristika. Ova tehnika u osnovi proučava učinak ionizirajućeg energije
na molekule 4.na molekule 4.
Masena spektrometrija instrumentacija
Maseni spektrometri djeluju pretvaranjem analita u napunjenom stanju (ioniziranog), uz naknadne analize
iona i bilo koji fragment iona se stvaraju za vrijeme ionizacije na temelju njihove mase za punjenje omjer ( m / z) ( Slideiona i bilo koji fragment iona se stvaraju za vrijeme ionizacije na temelju njihove mase za punjenje omjer ( m / z) ( Slideiona i bilo koji fragment iona se stvaraju za vrijeme ionizacije na temelju njihove mase za punjenje omjer ( m / z) ( Slide
5 ). Nekoliko različitih tehnologija dostupne su i za ionizaciju i iona analize, što je rezultiralo u mnogim različitim5 ). Nekoliko različitih tehnologija dostupne su i za ionizaciju i iona analize, što je rezultiralo u mnogim različitim5 ). Nekoliko različitih tehnologija dostupne su i za ionizaciju i iona analize, što je rezultiralo u mnogim različitim
vrstama masovnih spektrometra s različitim kombinacijama tih dvaju procesa. Shematski prikaz osnovnih
komponenti masenog spektrometra je prikazano na Slide 6 ,komponenti masenog spektrometra je prikazano na Slide 6 ,komponenti masenog spektrometra je prikazano na Slide 6 ,
Maseni spektrometar se sastoji od:
1. Uzorak Jedinica za ubrizgavanje: Uvesti uzorke treba proučavati na izvor iona1. Uzorak Jedinica za ubrizgavanje: Uvesti uzorke treba proučavati na izvor iona
2. Ion proizvodna jedinica ili ionizacije Izvor: Za proizvodnju iona iz ispitivanog analita.2. Ion proizvodna jedinica ili ionizacije Izvor: Za proizvodnju iona iz ispitivanog analita.
3. Misa Analyzer: Za rješavanje iona u njihovim karakteristikama masa komponente3. Misa Analyzer: Za rješavanje iona u njihovim karakteristikama masa komponente
prema njihovom omjeru mase za naboja.
4. Detektor sustav: Za otkrivanje ione i snimanje relativnu zastupljenost svakog od4. Detektor sustav: Za otkrivanje ione i snimanje relativnu zastupljenost svakog od
Razdvojene ionskih vrsta.
5. Data System: Za kontrolu instrumenta, stjecanje i upravljanje podacima, i usporedite5. Data System: Za kontrolu instrumenta, stjecanje i upravljanje podacima, i usporedite
spektri referenca knjižnice.
MS za ispravnu funkciju, u masenom analizatoru, te detektorom moraju biti pod visokim vakuumom uvjet 3 × 10- 4 doMS za ispravnu funkciju, u masenom analizatoru, te detektorom moraju biti pod visokim vakuumom uvjet 3 × 10- 4 doMS za ispravnu funkciju, u masenom analizatoru, te detektorom moraju biti pod visokim vakuumom uvjet 3 × 10- 4 do
1.3 × 10 5 Pa. Ovaj visoki vakuum u spektrometar zahtijeva dvije faze crpne. Prva faza je mehanička pumpa koja1.3 × 10 5 Pa. Ovaj visoki vakuum u spektrometar zahtijeva dvije faze crpne. Prva faza je mehanička pumpa koja1.3 × 10 5 Pa. Ovaj visoki vakuum u spektrometar zahtijeva dvije faze crpne. Prva faza je mehanička pumpa koja
osigurava grubi vakuum do 1x10- 1 Godišnje, a druga faza koristi turbomolekularne pumpe ili difuziju pumpe kako biosigurava grubi vakuum do 1x10- 1 Godišnje, a druga faza koristi turbomolekularne pumpe ili difuziju pumpe kako biosigurava grubi vakuum do 1x10- 1 Godišnje, a druga faza koristi turbomolekularne pumpe ili difuziju pumpe kako bi
se dobilo željeni visoki vakuum.

3. 3
ionski izvori
Trenutni izvori iona su sposobni za rukovanje širok raspon protoka i mobilni sastava faza kako postojeći LC
razdvajanja često može biti izravno povezano s masenom spektrometru. Najkorišteniji izvor iona ( Slide 7 ) su:razdvajanja često može biti izravno povezano s masenom spektrometru. Najkorišteniji izvor iona ( Slide 7 ) su:razdvajanja često može biti izravno povezano s masenom spektrometru. Najkorišteniji izvor iona ( Slide 7 ) su:razdvajanja često može biti izravno povezano s masenom spektrometru. Najkorišteniji izvor iona ( Slide 7 ) su:
a. Elektrosprej ionizacije (ESI)a. Elektrosprej ionizacije (ESI)
b. Atmosferski tlak kemijska ionizacija Izvor (APCI)b. Atmosferski tlak kemijska ionizacija Izvor (APCI)
c. Atmosferski tlak Foto-ionizacije (APPI)c. Atmosferski tlak Foto-ionizacije (APPI)
d. Termosprej ionizacije (TSI)d. Termosprej ionizacije (TSI)
e. Širina čestica ionizacije (PBI)e. Širina čestica ionizacije (PBI)
a. Elektrosprej ionizacije (ESI) je jedan od najčešće korištenih metoda ionizacije u LC-MS sustav koji je ua. Elektrosprej ionizacije (ESI) je jedan od najčešće korištenih metoda ionizacije u LC-MS sustav koji je u
cijelosti kompatibilan s analizatorom 5 ( Slide 8 ). Dok standardne elektro izvora ionizacije u masenomcijelosti kompatibilan s analizatorom 5 ( Slide 8 ). Dok standardne elektro izvora ionizacije u masenomcijelosti kompatibilan s analizatorom 5 ( Slide 8 ). Dok standardne elektro izvora ionizacije u masenomcijelosti kompatibilan s analizatorom 5 ( Slide 8 ). Dok standardne elektro izvora ionizacije u masenomcijelosti kompatibilan s analizatorom 5 ( Slide 8 ). Dok standardne elektro izvora ionizacije u masenom
spektrometru općenito nositi protoke do 1 ml / min niže stope protoka rezultirati poboljšanom osjetljivošću. ESIspektrometru općenito nositi protoke do 1 ml / min niže stope protoka rezultirati poboljšanom osjetljivošću. ESI
smatra „soft” izvora ionizacije, što znači da relativno malo energije prenosi na analit, a time i malo fragmentacija
dogodi. ESI koristi električnu energiju kako bi se pomoglo prijenos iona iz otopine u plinovitu fazu prije nego što
su podvrgnuti masovno analize spektrometrije. Upotreba plina za raspršivanje (npr dušika), koji je po škare
eluirane otopine uzorka pojačava veću brzinu protoka uzorka. U ESI analit se uvodi izvor pri brzini protoka koje
su niže od 1 ul min- 1. Kao što je prikazano u Slide 8 protok analit otopina prolazi kroz elektrosprej iglu koja imasu niže od 1 ul min- 1. Kao što je prikazano u Slide 8 protok analit otopina prolazi kroz elektrosprej iglu koja imasu niže od 1 ul min- 1. Kao što je prikazano u Slide 8 protok analit otopina prolazi kroz elektrosprej iglu koja imasu niže od 1 ul min- 1. Kao što je prikazano u Slide 8 protok analit otopina prolazi kroz elektrosprej iglu koja imasu niže od 1 ul min- 1. Kao što je prikazano u Slide 8 protok analit otopina prolazi kroz elektrosprej iglu koja ima
visoki potencijal razlika s obzirom na protu elektroda, tipično u rasponu od 1 do 6 kV. Pomoću povišene
temperature ESI-izvora i / ili drugi tok plina za sušenje dušika, nabijene kapljice kontinuirano smanjuje u veličini
isparavanjem otapala, što dovodi do povećanja gustoće površine naboja i smanjenja radijusa kapljica. Kao
kapljice poprijeko prostor između vrha igle i konus, uparavanje otapala nastaje a kapljice se skuplja dok ne dođe
do točke da je površinska napetost više ne mogu održati na naboj (u Rayleigh granica) u tom trenutku pojave
coulombovu eksplozije i kapljica je rastrgana. Konačno, električna snaga polja unutar nabijene kapljice dosegne
kritičnu točku u kojoj je kinetički i energično moguće za iona na površini kapljica da se izbaci u plinovitu fazu.
Emitirana ioni se analiziraju pomoću gliser uzorkovanje stošca i zatim se ubrzava u masenom analizatoru za
kasniju analizu molekulske mase i mjerenje intenzitet iona.
Sa ESI-MS moguće je analizirati umjereno i polarne molekule koji je dobro prilagođen za analizu mnogih
metabolite, ksenobiotika i peptida. Iako neutralne molekule i niske polarnosti kao lipidi također se mogu pretvoriti u
ionskom obliku u otopini ili u plinskoj fazi pomoću protonacije ili cationization metal (npr cationization) može se proučavati
pomoću ESI-MS, to se ne može učinkovito ionizirane ovim postupkom 1-3.pomoću ESI-MS, to se ne može učinkovito ionizirane ovim postupkom 1-3.
b. Atmosferski tlak kemijska ionizacija Izvor (APCI). U APCI, kao i sa ESI, tekućina pumpa kroz kapilare ib. Atmosferski tlak kemijska ionizacija Izvor (APCI). U APCI, kao i sa ESI, tekućina pumpa kroz kapilare i
maglice na vrhu ( Slide 9 ). Koronarnim izbojem odvija blizu vrha kapilare, inicijalno ionizirajućeg plina i molekulemaglice na vrhu ( Slide 9 ). Koronarnim izbojem odvija blizu vrha kapilare, inicijalno ionizirajućeg plina i molekulemaglice na vrhu ( Slide 9 ). Koronarnim izbojem odvija blizu vrha kapilare, inicijalno ionizirajućeg plina i molekulemaglice na vrhu ( Slide 9 ). Koronarnim izbojem odvija blizu vrha kapilare, inicijalno ionizirajućeg plina i molekule
otapala prisutna u izvoru iona 1-3. Ti ioni tada reagiraju s analita i ionizirati ga putem prijenosa naboja. Ovaotapala prisutna u izvoru iona 1-3. Ti ioni tada reagiraju s analita i ionizirati ga putem prijenosa naboja. Ovaotapala prisutna u izvoru iona 1-3. Ti ioni tada reagiraju s analita i ionizirati ga putem prijenosa naboja. Ova
tehnika

4. 4
Korisno je za male, termički stabilne molekule koje nisu dobro ioniziran ESI takvim slobodnog steroida, lipida i masti topljivih
vitamina 6, 7,vitamina 6, 7,
c. Atmosferski tlak Foto-ionizacije (APPI) koristi fotone uzbuđuju i ionizirati molekule nakon stvaranje maglice ( Slidec. Atmosferski tlak Foto-ionizacije (APPI) koristi fotone uzbuđuju i ionizirati molekule nakon stvaranje maglice ( Slidec. Atmosferski tlak Foto-ionizacije (APPI) koristi fotone uzbuđuju i ionizirati molekule nakon stvaranje maglice ( Slide
9 ). Energija fotona je izabran kako bi se smanjila istovremeno ionizaciju otapala i izvora iona plinova. Tehnika9 ). Energija fotona je izabran kako bi se smanjila istovremeno ionizaciju otapala i izvora iona plinova. Tehnika9 ). Energija fotona je izabran kako bi se smanjila istovremeno ionizaciju otapala i izvora iona plinova. Tehnika
daje pretežno singlycharged ione, te je korištena za analizu neutralni spojevi, kao što su steroidi 6,8.daje pretežno singlycharged ione, te je korištena za analizu neutralni spojevi, kao što su steroidi 6,8.
d. Termosprej ionizacije (TSI) je brz, osjetljiv i visoko specifična kombinirani visokotlačna tekućinska LC-MSd. Termosprej ionizacije (TSI) je brz, osjetljiv i visoko specifična kombinirani visokotlačna tekućinska LC-MS
metoda u kojoj je tekućina teče kroz zagrijani kapilare za proizvodnju mlaz kapljica i para otapala ( Slide 10 ). Ionimetoda u kojoj je tekućina teče kroz zagrijani kapilare za proizvodnju mlaz kapljica i para otapala ( Slide 10 ). Ionimetoda u kojoj je tekućina teče kroz zagrijani kapilare za proizvodnju mlaz kapljica i para otapala ( Slide 10 ). Ionimetoda u kojoj je tekućina teče kroz zagrijani kapilare za proizvodnju mlaz kapljica i para otapala ( Slide 10 ). Ionimetoda u kojoj je tekućina teče kroz zagrijani kapilare za proizvodnju mlaz kapljica i para otapala ( Slide 10 ). Ioni
nastaju zbog neravnoteže naboja u kapljicama ili grijanim niti 1-4.nastaju zbog neravnoteže naboja u kapljicama ili grijanim niti 1-4.
e. Širina čestica ionizacije (PBI) je LC-MS metoda u kojoj se efluent propusti kroz zagrijani kapilare da formirajue. Širina čestica ionizacije (PBI) je LC-MS metoda u kojoj se efluent propusti kroz zagrijani kapilare da formirajue. Širina čestica ionizacije (PBI) je LC-MS metoda u kojoj se efluent propusti kroz zagrijani kapilare da formiraju
širi mlaza pare i čestica aerosola. Nakon prolaska kroz gliser koja djeluje kao separator gibanja, snop udara na
grijanoj površini kako bi se dobilo iona kroz kemijsku ionizaciju na površini ili ionizacije rezultirajuće pare u
kemijske ionizacije ili elektrona (ionizacijskim izvorom Slide 11 ). Elektronski udar ionizacije slijedi plinskakemijske ionizacije ili elektrona (ionizacijskim izvorom Slide 11 ). Elektronski udar ionizacije slijedi plinskakemijske ionizacije ili elektrona (ionizacijskim izvorom Slide 11 ). Elektronski udar ionizacije slijedi plinskakemijske ionizacije ili elektrona (ionizacijskim izvorom Slide 11 ). Elektronski udar ionizacije slijedi plinska
kromatografija ili uvođenjem snopom čestice obično se vrlo ponovljiv, librarysearchable maseni spektri 1-4.kromatografija ili uvođenjem snopom čestice obično se vrlo ponovljiv, librarysearchable maseni spektri 1-4.
masovni Analizatori 1-7masovni Analizatori 1-7
Najčešće korišteni masovne analizatori ( Slide 12 ) su:Najčešće korišteni masovne analizatori ( Slide 12 ) su:Najčešće korišteni masovne analizatori ( Slide 12 ) su:Najčešće korišteni masovne analizatori ( Slide 12 ) su:
a. četveropolno analizatora. četveropolno analizator
b. Vrijeme-of-flight (TOF) analizatorb. Vrijeme-of-flight (TOF) analizator
c. Ion trap analizatoric. Ion trap analizatori
d. hibridni analizatorid. hibridni analizatori
četveropolno analizator Sastoji se od niza četiri paralelna metalne šipke. Kombinacija stalnom i promjenjivomčetveropolno analizator Sastoji se od niza četiri paralelna metalne šipke. Kombinacija stalnom i promjenjivom
(radijske frekvencije) naponi omogućuje prijenos uskom rasponu od m / z vrijednosti na osi štapova ( Slide 13 ). Variranjem(radijske frekvencije) naponi omogućuje prijenos uskom rasponu od m / z vrijednosti na osi štapova ( Slide 13 ). Variranjem(radijske frekvencije) naponi omogućuje prijenos uskom rasponu od m / z vrijednosti na osi štapova ( Slide 13 ). Variranjem(radijske frekvencije) naponi omogućuje prijenos uskom rasponu od m / z vrijednosti na osi štapova ( Slide 13 ). Variranjem(radijske frekvencije) naponi omogućuje prijenos uskom rasponu od m / z vrijednosti na osi štapova ( Slide 13 ). Variranjem(radijske frekvencije) naponi omogućuje prijenos uskom rasponu od m / z vrijednosti na osi štapova ( Slide 13 ). Variranjem
napona s vremenom moguće je skenirati u nizu m / z vrijednosti, što je rezultiralo maseni spektar. Većinanapona s vremenom moguće je skenirati u nizu m / z vrijednosti, što je rezultiralo maseni spektar. Većinanapona s vremenom moguće je skenirati u nizu m / z vrijednosti, što je rezultiralo maseni spektar. Većina
četveropolno analizatori rade na više od 4000 m / z i skeniranje brzine do 1000 m / z u sekundi ili više. Oni običnočetveropolno analizatori rade na više od 4000 m / z i skeniranje brzine do 1000 m / z u sekundi ili više. Oni običnočetveropolno analizatori rade na više od 4000 m / z i skeniranje brzine do 1000 m / z u sekundi ili više. Oni običnočetveropolno analizatori rade na više od 4000 m / z i skeniranje brzine do 1000 m / z u sekundi ili više. Oni običnočetveropolno analizatori rade na više od 4000 m / z i skeniranje brzine do 1000 m / z u sekundi ili više. Oni obično
rade na masovne rezoluciji jedinici što znači da je točnost masa je rijetko bolje od 0.1 m / z. Kao alternativarade na masovne rezoluciji jedinici što znači da je točnost masa je rijetko bolje od 0.1 m / z. Kao alternativarade na masovne rezoluciji jedinici što znači da je točnost masa je rijetko bolje od 0.1 m / z. Kao alternativa
skeniranjem, kvadrupoli može se postaviti za praćenje specifičan m / z vrijednost. Ova tehnika je korisna uskeniranjem, kvadrupoli može se postaviti za praćenje specifičan m / z vrijednost. Ova tehnika je korisna uskeniranjem, kvadrupoli može se postaviti za praćenje specifičan m / z vrijednost. Ova tehnika je korisna u
poboljšanju granice detekcije ciljanih analita, jer više detektor vrijeme može biti posvećena otkrivanju specifičnih
iona umjesto skeniranja preko iona koji se ne proizvode od analita. Stajanje može se provesti u nekoliko
milisekundi i panel m / z vrijednosti mogu se prošli kroz za otkrivanje nekoliko analita. Ioni mogu biti inducirane proćimilisekundi i panel m / z vrijednosti mogu se prošli kroz za otkrivanje nekoliko analita. Ioni mogu biti inducirane proćimilisekundi i panel m / z vrijednosti mogu se prošli kroz za otkrivanje nekoliko analita. Ioni mogu biti inducirane proćimilisekundi i panel m / z vrijednosti mogu se prošli kroz za otkrivanje nekoliko analita. Ioni mogu biti inducirane proći
cjepkanje

5. 5
sudari s inertnim plinom kao što su dušik ili argon, kolizijom disocijacije inducirane procesom koji se naziva.
Jedna vrsta stanica je sudara quadrupole koji je dizajniran za održavanje niskog tlaka plina potrebnog za
disocijaciju sudara i prenosi većinu fragmentirane ione koji se proizvode. Posebno koristan oblik maseni
spektrometar je dobiven postavljanjem stanice sudara između dva kvadrupolnim masenim analizatora. Ova
kombinacija naziva se maseni spektrometar i primjer tandem MS u kojem su neovisno primjenjuju dva ili više
stadija masenom analizom. Četveropolno analizatori, bilo u jednom ili trostruki konfiguraciji četveropolno, su
naširoko koristi u kliničkim LC-MS aplikacijama zahvaljujući lakoći skeniranje i kvalitetnih kvantitativnih podataka
dobivenih.
b. Vrijeme-of-flight (TOF) analizator djeluje na ubrzavanje iona kroz visoki napon ( Slide 14 ). Brzina iona, a time ib. Vrijeme-of-flight (TOF) analizator djeluje na ubrzavanje iona kroz visoki napon ( Slide 14 ). Brzina iona, a time ib. Vrijeme-of-flight (TOF) analizator djeluje na ubrzavanje iona kroz visoki napon ( Slide 14 ). Brzina iona, a time ib. Vrijeme-of-flight (TOF) analizator djeluje na ubrzavanje iona kroz visoki napon ( Slide 14 ). Brzina iona, a time ib. Vrijeme-of-flight (TOF) analizator djeluje na ubrzavanje iona kroz visoki napon ( Slide 14 ). Brzina iona, a time i
vrijeme potrebno za putovanje dolje cijev let do detektora, ovisi o njihovoj m / z vrijednosti. Ako je početnivrijeme potrebno za putovanje dolje cijev let do detektora, ovisi o njihovoj m / z vrijednosti. Ako je početnivrijeme potrebno za putovanje dolje cijev let do detektora, ovisi o njihovoj m / z vrijednosti. Ako je početni
ubrzavajući napon je pulsirala, izlaz iz detektora kao funkcija vremena može se pretvoriti u masenom spektru.
TOF analizator može steći spektar izuzetno brzo s visokom osjetljivošću. Ona također ima veliku masovnu
točnost, što omogućuje molekulske formule treba utvrditi za male molekule.
c. Ion trap analizatori hiperbolički koristiti tri elektrode na trap iona u trodimenzionalnom prostoru pomoću statičkih ic. Ion trap analizatori hiperbolički koristiti tri elektrode na trap iona u trodimenzionalnom prostoru pomoću statičkih i
radio frekvencija napona ( Slide 14 ). Ioni su tada redom izbačen iz zamke na temelju njihove m / z Vrijednosti zaradio frekvencija napona ( Slide 14 ). Ioni su tada redom izbačen iz zamke na temelju njihove m / z Vrijednosti zaradio frekvencija napona ( Slide 14 ). Ioni su tada redom izbačen iz zamke na temelju njihove m / z Vrijednosti zaradio frekvencija napona ( Slide 14 ). Ioni su tada redom izbačen iz zamke na temelju njihove m / z Vrijednosti zaradio frekvencija napona ( Slide 14 ). Ioni su tada redom izbačen iz zamke na temelju njihove m / z Vrijednosti zaradio frekvencija napona ( Slide 14 ). Ioni su tada redom izbačen iz zamke na temelju njihove m / z Vrijednosti za
stvaranje spektar masa. Alternativno, specifični ion može se izolirati u zamku primjenom uzbudljive napona, dok se
drugi ioni izbacuju. Inertni plin se također može uvesti u zamku za induciranje fragmentacije. Zanimljiva značajka
tih iona trap analizatora je sposobnost fragment i izolirati ioni više puta za redom prije dobije konačni maseni
spektar, što je rezultiralo u tzv MS n sposobnosti.spektar, što je rezultiralo u tzv MS n sposobnosti.spektar, što je rezultiralo u tzv MS n sposobnosti.
d. Hibridni analizatori. Masenom spektrometri koji koriste kombinacije različitih mase analizatora su korisni zad. Hibridni analizatori. Masenom spektrometri koji koriste kombinacije različitih mase analizatora su korisni za
LC-MS. Treći kvadrupol od trostrukim kvadrupolnim MS može biti zamijenjen TOF analizatora za proizvodnju
hibridnog kvadripolnog time-of-flight (QTOF) masenog spektrometra. QTOF instrumenti su opsežno koriste u
području proteomici ali su više ograničeni u svojim skeniranja funkcija nego trostruko četveropolno instrumenata.
Također je moguće dizajnirati instrumente u kojem treća četveropolno od trostrukog četveropolno MS radi u nekom
drugom načinu na koji se ioni zarobljeni, a zatim redom izbačeni na temelju njihove m / z vrijednosti. To je poznatodrugom načinu na koji se ioni zarobljeni, a zatim redom izbačeni na temelju njihove m / z vrijednosti. To je poznatodrugom načinu na koji se ioni zarobljeni, a zatim redom izbačeni na temelju njihove m / z vrijednosti. To je poznato
kao linearni ion trap, a ukupna konfiguracija se često naziva kao QTrap instrument. Kraj četveropolno može sekao linearni ion trap, a ukupna konfiguracija se često naziva kao QTrap instrument. Kraj četveropolno može se
prebacivati ​​između ion trap modu i konvencionalne četveropolno način tako instrument kombinira korisne značajke
oba triple četveropolno i ion trap analizatora. Kada se koristi u ion trap način, osjetljivost na maseni skeniranja
znatno je poboljšana, a dodatni fragmentacija se mogu inducirati u ion trap omogućuje dodatnu fazu fragmentacije i
masenom analizom.

6. 6
detektori 1-7detektori 1-7
Kada se ioni razdvojeni masovne analizator je potrebno da ih kvalitativno i kvantitativno odrediti.
Detekcija se najčešće električki, uzimajući obilje - ukupan ionske struje, a često se koriste neke vrste
elektronskog multiplikatora ( Slide 15 ). Faradayev čaša je više nego ion kolektor detektor ( Slide 16 ). Onaelektronskog multiplikatora ( Slide 15 ). Faradayev čaša je više nego ion kolektor detektor ( Slide 16 ). Onaelektronskog multiplikatora ( Slide 15 ). Faradayev čaša je više nego ion kolektor detektor ( Slide 16 ). Onaelektronskog multiplikatora ( Slide 15 ). Faradayev čaša je više nego ion kolektor detektor ( Slide 16 ). Onaelektronskog multiplikatora ( Slide 15 ). Faradayev čaša je više nego ion kolektor detektor ( Slide 16 ). Onaelektronskog multiplikatora ( Slide 15 ). Faradayev čaša je više nego ion kolektor detektor ( Slide 16 ). Onaelektronskog multiplikatora ( Slide 15 ). Faradayev čaša je više nego ion kolektor detektor ( Slide 16 ). Ona
prikuplja unesene ione i prenosi svoj naboj na čašu. Punjenje se obično prenosi na elektronici izvan vakuum
sustav. Vrsta elektronike određuje da li se mjeri kao naboj, struje ili napona. Faradayev čaša izgleda
jednostavno, ali u praksi postaje vrlo komplicirano. Prva i glavna komplikacija je da su ioni ulaze imaju energije
znatno veći od radnog funkciji kupa materijala (nehrđajući čelik, ugljika, grafit) što uzrokuje stvaranje slobodnih
elektrona, poznat kao sekundarne elektrone.
Kada male snage brojnost (10 9- 10 6 A) su potrebne, razni električni single-stanicaKada male snage brojnost (10 9- 10 6 A) su potrebne, razni električni single-stanicaKada male snage brojnost (10 9- 10 6 A) su potrebne, razni električni single-stanicaKada male snage brojnost (10 9- 10 6 A) su potrebne, razni električni single-stanicaKada male snage brojnost (10 9- 10 6 A) su potrebne, razni električni single-stanica
upotrebljavaju pojačala (DC-pojačala), fotomultiplikator pretvorbu dynodes, elektrona multiplikator i vibrira trska
elektrometar.
Princip funkcije elektrona multiplikator se temelji na upotrebi nekoliko uzastopnih dynodes s rastućim
potencijalom ( Slide 17 ). Jonski zrak iz masovne analizatoru pada na množitelj elektroda i iskre elektrona, običnopotencijalom ( Slide 17 ). Jonski zrak iz masovne analizatoru pada na množitelj elektroda i iskre elektrona, običnopotencijalom ( Slide 17 ). Jonski zrak iz masovne analizatoru pada na množitelj elektroda i iskre elektrona, običnopotencijalom ( Slide 17 ). Jonski zrak iz masovne analizatoru pada na množitelj elektroda i iskre elektrona, obično
jedan do dva elektrona po iona. Oni su ubrzane na putu do sljedećeg Faraday čašu koja ima veći potencijal od
prethodne, tako da su čak i više elektrona emitira i tako u redoslijedu od 8 do 20 puta. Na taj način, ulazni signal
jača do 10 12 puta, što je razlog zašto ima visoku osjetljivost. Najveća osjetljivost se postiže pri naponu od okojača do 10 12 puta, što je razlog zašto ima visoku osjetljivost. Najveća osjetljivost se postiže pri naponu od okojača do 10 12 puta, što je razlog zašto ima visoku osjetljivost. Najveća osjetljivost se postiže pri naponu od oko
3.000 V, ali tako visok napon skraćuje vijek trajanja detektora.
U fotomultiplajer ( Slide 18 ), ioni emitira iz masenom analizatoru, prevedena u fotona i detektirati. Ovaj uređajU fotomultiplajer ( Slide 18 ), ioni emitira iz masenom analizatoru, prevedena u fotona i detektirati. Ovaj uređajU fotomultiplajer ( Slide 18 ), ioni emitira iz masenom analizatoru, prevedena u fotona i detektirati. Ovaj uređajU fotomultiplajer ( Slide 18 ), ioni emitira iz masenom analizatoru, prevedena u fotona i detektirati. Ovaj uređaj
ima nižu osjetljivost, ali je mnogo duže traje.
Snimanje podataka 1-7Snimanje podataka 1-7
Višestruki reakcije praćenje od strane računala obično koristi u LC-MS analize. prikupljanje podataka za MS analize
( Slide 19 ) mogu obavljati:( Slide 19 ) mogu obavljati:( Slide 19 ) mogu obavljati:( Slide 19 ) mogu obavljati:
1. Snimanje kompletan spektar masa - SCAN tehnika
2. Odabrani praćenje iona - SIM tehnika
3. Vjerojatnost temelju podudaranja sistem3. Vjerojatnost temelju podudaranja sistem
1. SCAN tehnika
SCAN tehnika podrazumijeva masovno skeniranje u određenom rasponu, dok istovremeno praćenje
vremena zadržavanja koja omogućuje identifikaciju analita. Raspon zadani volumen i kromatografske brzina
skeniranja odrediti trajanje vremena zadržavanja. Tijekom svakog ciklusa, svaki mase od zadanog raspona je
zabilježena samo jednom, a ciklusi se ponavljaju tijekom kromatografije. Ukupna Kromatogram iona predstavlja
graf ovisnosti od

7. 7
ukupna brojnost prikupljeni tijekom analize, s vremena na vrijeme. Podaci su dobiveni na kvalitetu (vrijeme
zadržavanja) i količinu (vršno područje), te stalnom duljinom kromatografije, kao dobro. Na temelju tih podataka,
može se prikazati ionske kromatograma. Po njegovu uporabu, selektivnost vrhova koji preklapa u velikoj mjeri
povećava, ako su karakteristične osobine preklopa komponenti su različiti. Skeniranje se obično izvodi pri brzini od
0,5 do 1 skeniranja / s. SCAN tehnika više koristi u kvalitativne analize.
2. SIM tehnika2. SIM tehnika
To se koristi u kvantitativnoj analizi. Prije upotrebe, kako bi se postigli optimalni uvjeti, analiza mora biti
izvedena od strane SCAN metodi. SIM tehnika prepoznaje vrijednosti m / zizvedena od strane SCAN metodi. SIM tehnika prepoznaje vrijednosti m / z
samo od reprezentativnih iona promatranog molekule. Praćenje vrijeme je veća, tako da povećava osjetljivost
čak 100 do 1000 puta. Karakteristični čvorišta vrijeme početka i živjet puta biraju i na temelju podataka
dobivenih tehnikom SCAN. Kromatogram se dobije kao ovisnost o ukupnoj brojnosti prikupljenih tijekom
vremena analize, i daje podatke o kvaliteti (vrijeme zadržavanja) i količina (točka površine) od promatranih
spojeva. Svaka točka u kromatogramu predstavlja zbroj abundancijama promatranih iona. SIM tehnike se
također može koristiti za kvalitativno određivanje komponenti u tragovima.
3. Vjerojatnost temelju podudaranja sustav3. Vjerojatnost temelju podudaranja sustav
To je vrlo korisno za identifikaciju spojeva, jer identificira komponente dijeljenjem spektri u postojeće
baze podataka s nepoznatim spektar ispitivanog spoja. McLafferety algoritam temelji temeljen na vjerojatnosti
metoda procjene se koristi za identifikaciju komponentu. Ovaj sustav primjenjuje pronalaženje načina, tako da
cijeli sadržaj knjižnice može se usporediti s nepoznatom spektra. Prilikom odabira najznačajnije vrhove
masenom spektru referentne, i masa i brojnost jednako vrednuju. Obrnuto pretraživanje određuje da li su
prisutni u spektru ispitivane tvari vrhovi u referentnom masenom spektru. Ako višak vrhova pojavljuje u
ispitivanom spektra, oni se ignoriraju, tako da su spektri masa analita mješavine i prisutne nečistoće mogu se
analizirati. U većini drugih sustava,
Većina MS instrumenti imaju sposobnost prikupljanja podataka ovisna, što znači da je moguće prebacivanje
između različitih načina rada unutar vožnji na osnovu rezultata koje su stečene. Računalo također bilježi
spektre, prvenstveno obrađuje ih, prepoznaje i obavlja proračune vezane za primjenu MS. Osim podataka MS,
računalo mora sadržavati podatke iz drugih analitičkih postupaka, od dokumentacije, kao i komercijalne i
vlasnički biblioteke podatkovnih previše.
Prijave 9,10,11, 12, 13, 14Prijave 9,10,11, 12, 13, 14
Masena spektrometrija uz korištenje ionizacije elektrosprejem i druge metode ionizacija, kao, može se
primijeniti na mnogo širok spektar bioloških molekula, a time će se naći veći

8. 8
primjena u laboratorijskoj medicini ( Slide 20 ). Izravne metode ubrizgavanja može odrediti više analita s visokimprimjena u laboratorijskoj medicini ( Slide 20 ). Izravne metode ubrizgavanja može odrediti više analita s visokimprimjena u laboratorijskoj medicini ( Slide 20 ). Izravne metode ubrizgavanja može odrediti više analita s visokimprimjena u laboratorijskoj medicini ( Slide 20 ). Izravne metode ubrizgavanja može odrediti više analita s visokim
kroz-staviti kada vrlo specifičan tandem MS služi za otkrivanje. LC-MS osigurava superiornu specifičnosti i
osjetljivosti, dok je izravnim metodama injekcije. U kombinaciji sa stabilnim razrjeđivanje izotopom, LC-MS može
se koristiti za razvoj visoko precizno i ​​ponovljivi testovima. Moderne maseni spektrometri su vrlo osjetljivi i
LC-MS analiza može se u uporabi za farmaceutsku analizu, bioraspoloživosti, metabolizma lijeka studije
farmakokinetike karakterizacija potencijalnih lijekova, degradacije lijeka analiza proizvoda, skeniranjem
kandidata lijeka, identificiranje ciljanih lijekova, biomolekule karakterizacije proteini, peptidi i oligonukleotide
analize, analize okoliša kao što su određivanje pesticida na hrani, tlu i onečišćenja podzemnih voda i forenzičke
analize, kao dobro.
Reference
1 Watson, JT, Sparkman, OD Uvod u masenom spektrometrijom: instrumentacija, Programi i strategije za1 Watson, JT, Sparkman, OD Uvod u masenom spektrometrijom: instrumentacija, Programi i strategije za
tumačenje podataka, 4 th Izdanje, John Wiley & Sons Ltd, pp173, (2007).tumačenje podataka, 4 th Izdanje, John Wiley & Sons Ltd, pp173, (2007).tumačenje podataka, 4 th Izdanje, John Wiley & Sons Ltd, pp173, (2007).
2 Parasuraman S. Rao, A., Balamurugan, S., Muralidharan, S., Kumar, K., Venugopal, V. Pregled tekućinskom2 Parasuraman S. Rao, A., Balamurugan, S., Muralidharan, S., Kumar, K., Venugopal, V. Pregled tekućinskom
kromatografijom-masenom spektroskopijom instrumentacije. Farmaceutske metode. 5, 47-55 (2014).kromatografijom-masenom spektroskopijom instrumentacije. Farmaceutske metode. 5, 47-55 (2014).kromatografijom-masenom spektroskopijom instrumentacije. Farmaceutske metode. 5, 47-55 (2014).kromatografijom-masenom spektroskopijom instrumentacije. Farmaceutske metode. 5, 47-55 (2014).
3 Pitt, JJ Principi i primjene tekuće kromatografije-spektrometrije mase u kliničke biokemije. Clin Biochem Rev. 303 Pitt, JJ Principi i primjene tekuće kromatografije-spektrometrije mase u kliničke biokemije. Clin Biochem Rev. 303 Pitt, JJ Principi i primjene tekuće kromatografije-spektrometrije mase u kliničke biokemije. Clin Biochem Rev. 303 Pitt, JJ Principi i primjene tekuće kromatografije-spektrometrije mase u kliničke biokemije. Clin Biochem Rev. 30
( 1), 19-34, (2009).( 1), 19-34, (2009).
4 Demartini DR kratak pregled komponenti u masenom spektrometrijom instrumentacije za proteomici analize. U4 Demartini DR kratak pregled komponenti u masenom spektrometrijom instrumentacije za proteomici analize. U
masenom spektrometrijom - Molekularna karakterizacija. (Ed. AV Coelho i C. de Matos Ferraz Franco), ISBN
978-953-51-1136-8, poglavlje 2 (Slobodan pristup) (
2013)
5 Chan, MH, Cheung, RC, zakon, LK, Lit, LC, Ng KF, Suen, MW, Tai, HL elektro ionizacija masena5 Chan, MH, Cheung, RC, zakon, LK, Lit, LC, Ng KF, Suen, MW, Tai, HL elektro ionizacija masena
spektrometrija: načela i kliničke primjene. Clin Biochem Rev. 24, 3-12 (2003).spektrometrija: načela i kliničke primjene. Clin Biochem Rev. 24, 3-12 (2003).spektrometrija: načela i kliničke primjene. Clin Biochem Rev. 24, 3-12 (2003).spektrometrija: načela i kliničke primjene. Clin Biochem Rev. 24, 3-12 (2003).
6 Woźniak, B., Matraszek-Żuchowska, I., Witek, S., Posyniak, A. Izrada LC-MS / MS potvrdnim postupak za6 Woźniak, B., Matraszek-Żuchowska, I., Witek, S., Posyniak, A. Izrada LC-MS / MS potvrdnim postupak za
određivanje testosterona u goveđeg seruma. J. Vet Res 61, 81-89, (2017).određivanje testosterona u goveđeg seruma. J. Vet Res 61, 81-89, (2017).određivanje testosterona u goveđeg seruma. J. Vet Res 61, 81-89, (2017).određivanje testosterona u goveđeg seruma. J. Vet Res 61, 81-89, (2017).
7 Keevil BG LC-MS / MS analiza steroida u kliničkom laboratoriju. Clin Biochem. 49 (13-7 Keevil BG LC-MS / MS analiza steroida u kliničkom laboratoriju. Clin Biochem. 49 (13-7 Keevil BG LC-MS / MS analiza steroida u kliničkom laboratoriju. Clin Biochem. 49 (13-7 Keevil BG LC-MS / MS analiza steroida u kliničkom laboratoriju. Clin Biochem. 49 (13-
14), 989-97. (2016), doi: 10.1016 / j.clinbiochem.
8 Kauhanen, D., Sysi-Aho M, Koistinen, KM, Laaksonen, R., Sinisalo, J., Ekroos, K. razvoj i vrednovanje visoke8 Kauhanen, D., Sysi-Aho M, Koistinen, KM, Laaksonen, R., Sinisalo, J., Ekroos, K. razvoj i vrednovanje visoke
propusnosti LC-MS / MS testom za rutinsko mjerenje molekulskih ceramidi , Analitička i Bioanalitički kemije. 408propusnosti LC-MS / MS testom za rutinsko mjerenje molekulskih ceramidi , Analitička i Bioanalitički kemije. 408propusnosti LC-MS / MS testom za rutinsko mjerenje molekulskih ceramidi , Analitička i Bioanalitički kemije. 408
( 13), 3475-3483. (2016).( 13), 3475-3483. (2016).
9 Rekhi, H., Rani, S., Sharma, N., Malik, AK Nedavni pregled na Primjena visokodjelotvorne tekućinske9 Rekhi, H., Rani, S., Sharma, N., Malik, AK Nedavni pregled na Primjena visokodjelotvorne tekućinske
kromatografije u Metal Strunjak analiza. Crit Rev Anal Chem. 2, 47, 524-537. (2017) doi: 10,1080 /kromatografije u Metal Strunjak analiza. Crit Rev Anal Chem. 2, 47, 524-537. (2017) doi: 10,1080 /kromatografije u Metal Strunjak analiza. Crit Rev Anal Chem. 2, 47, 524-537. (2017) doi: 10,1080 /
10408347.2017.1343659.

9. 9
10 Kadhi, OA, Melchini, A., Mithen, R,, SahaS. Razvoj LC-MS / MS metode za istovremenu detekciju10 Kadhi, OA, Melchini, A., Mithen, R,, SahaS. Razvoj LC-MS / MS metode za istovremenu detekciju
trikarboksilna kiselina međuproduktima ciklusa u različitim biološkim matricama. J Chem Analyt Meth. ( 2017).trikarboksilna kiselina međuproduktima ciklusa u različitim biološkim matricama. J Chem Analyt Meth. ( 2017).trikarboksilna kiselina međuproduktima ciklusa u različitim biološkim matricama. J Chem Analyt Meth. ( 2017).
https://doi.org/10.1155/2017/5391832
11 Melanson, SE, Ptolomej, AS, Wasan AD Optimiziranje urina testiranje na droge za praćenje11 Melanson, SE, Ptolomej, AS, Wasan AD Optimiziranje urina testiranje na droge za praćenje
usklađenosti lijekova u boli. bol Med 14, 1813-1820 (2013).usklađenosti lijekova u boli. bol Med 14, 1813-1820 (2013).usklađenosti lijekova u boli. bol Med 14, 1813-1820 (2013).usklađenosti lijekova u boli. bol Med 14, 1813-1820 (2013).
12 Shah, PA, Sharma, P., Shah, JV, Sanyal, M., Shrivastav, PS poboljšani LC-MS / MS metode za istovremeno12 Shah, PA, Sharma, P., Shah, JV, Sanyal, M., Shrivastav, PS poboljšani LC-MS / MS metode za istovremeno
određivanje pirazinamid, pyrazinoic kiseline i 5-hidroksi pyrazinoic kiselinom u ljudskoj plazmi za farmakokinetičkih
studija. J Chromatogr B Analit Technol Biomed Life Sci. 1017-1018, 52-61, (2016) doi: 10.1016 /studija. J Chromatogr B Analit Technol Biomed Life Sci. 1017-1018, 52-61, (2016) doi: 10.1016 /studija. J Chromatogr B Analit Technol Biomed Life Sci. 1017-1018, 52-61, (2016) doi: 10.1016 /studija. J Chromatogr B Analit Technol Biomed Life Sci. 1017-1018, 52-61, (2016) doi: 10.1016 /
j.jchromb.2016.02.036.
13 Pohanka, A., Rosenborg, S., Lindh, JD, Beck, O. Iskustva iz LC-MS / MS za analizu imunosupresivnih13 Pohanka, A., Rosenborg, S., Lindh, JD, Beck, O. Iskustva iz LC-MS / MS za analizu imunosupresivnih
lijekova u TDM usluge. Clin Biochem. 49 ( 13-14), 1024-1031, (2016) doi: 10.1016 /lijekova u TDM usluge. Clin Biochem. 49 ( 13-14), 1024-1031, (2016) doi: 10.1016 /lijekova u TDM usluge. Clin Biochem. 49 ( 13-14), 1024-1031, (2016) doi: 10.1016 /lijekova u TDM usluge. Clin Biochem. 49 ( 13-14), 1024-1031, (2016) doi: 10.1016 /
j.clinbiochem.2016.06.013.
14 Wan, D., Yang, J., Barnych, B., Hwang, SH i sur. Novi osjetljiv LC / MS / MS analiza metabolita vitamina D14 Wan, D., Yang, J., Barnych, B., Hwang, SH i sur. Novi osjetljiv LC / MS / MS analiza metabolita vitamina D
pomoću klik derivatizacija reagensa, 2-nitrosopyridine. J Lipid. doi:pomoću klik derivatizacija reagensa, 2-nitrosopyridine. J Lipid. doi:pomoću klik derivatizacija reagensa, 2-nitrosopyridine. J Lipid. doi:
10,1194 / jlr.D073536 (2017)