Science project on chitinase-producing bacteria in mangrove topsoil

3. ผู้จัดทำโครงงานจึงมีความสนใจในการจัดทำโครงงานสำรวจแบคทีเรียที่สร้างเอนไซม์ไคตินเนสในดินป่าชายเลน บริเวณจังหวัดสมุทรปราการ ซึ่งเป็นบริเวณที่ไม่ค่อยมีนักวิจัยเข้าไปทำการศึกษามากนัก เพื่อสำรวจกลุ่มแบคทีเรียที่สร้างเอนไซม์ไคตินเนสตามปัจจัยการเจริญเติบโต โดยผลจากการสำรวจจะสามารถนำไปเป็นฐานข้อมูลสำหรับการพัฒนาระบบนิเวศของป่าชายเลนอย่างยั่งยืนในอนาคต

5. วิธีการทดลอง

13. ผลการทดลอง

14. การสำรวจปัจจัยทางกายภาพบริเวณที่เก็บตัวอย่างดิน เศษใบไม้ และเศษกิ่งไม้ ต่ำ สีดำ เนื้อเป็นดินร่วนปนดินเหนียว ชุ่มน้ำ มีต้นแสมขาวและไม้พุ่มเตี้ย บริเวณ D หินขนาดเล็ก , ใบไม้ ปานกลาง สีดำ เนื้อเป็นดินร่วน ชุ่มน้ำ จับตัวเป็นก้อน มีต้นแสมขาวและไม้พุ่มเตี้ย บริเวณ C เศษใบไม้ ปานกลาง สีน้ำตาลดำ เป็นดินร่วนปนดินเหนียว บางส่วนจับตัวกันเป็นก้อน มีต้นแสมและโกงกางขึ้นหนาแน่น น้ำทะเลท่วมถึง บริเวณ B เศษใบไม้และ กิ่งไม้ ค่อนข้างต่ำ สีน้ำตาลดำ เป็นดินร่วนปนดินเหนียว ค่อนข้างละเอียด ชุ่มน้ำ มีต้นแสมและโกงกางขึ้นหนาแน่น น้ำทะเลท่วมถึง บริเวณ A สิ่งเจือปนที่สังเกตได้ ความร่วนซุย สี เนื้อดิน ลักษณะของดิน สภาพพื้นที่โดยทั่วไป บริเวณ / ปัจจัย

15. การสำรวจปัจจัยทางชีวภาพบริเวณที่เก็บตัวอย่างดิน 27.5±0.50 27.5 28.0 27.0 8.17±0.06 8.15 8.22 8.11 50 บริเวณ D 27.83±0.76 28.5 27.0 28.0 8.06±0.03 8.06 8.08 8.02 50 บริเวณ C 30.2±1.04 30.5 29.0 31.0 7.92±0.04 7.96 7.93 7.88 20 บริเวณ B 29.5±0.50 29.0 30.0 29.5 7.98±0.01 7.98 7.97 7.98 20 บริเวณ A ค่าเฉลี่ย ครั้งที่ 3 ครั้งที่ 2 ครั้งที่ 1 ค่าเฉลี่ย ครั้งที่ 3 ครั้งที่ 2 ครั้งที่ 1 ค่าอุณหภูมิ ( องศาเซลเซียส ) ความเป็นกรดด่างบริเวณดิน ( ค่า pH ) ระยะทางจากระดับน้ำทะเลลงต่ำสุด ( เมตร ) บริเวณ / ปัจจัย

20. ภาพที่ 4.8-4.9 : ภาพโคโลนีของแบคทีเรียจากแหล่งดินตัวอย่าง A ที่เจริญบนอาหารเลี้ยงเชื้อ NA ที่ระดับความเข้มข้น 10 -3 และ 10 -7 g/ml ภาพที่ 4.10 -4.11 : ภาพ โคโลนีของแบคทีเรียจากแหล่งดินตัวอย่าง B ที่เจริญบนอาหารเลี้ยงเชื้อ NA ที่ระดับความเข้มข้น 10 -7 และ 10 -9 g/ml

21. ภาพที่ 4.12 -4.13 : ภาพโคโลนีของแบคทีเรียจากแหล่งดินตัวอย่าง C ที่เจริญบนอาหารเลี้ยงเชื้อ NA ที่ระดับความเข้มข้น 10 -5 และ 10 -7 g/ml ภาพที่ 4.14 -4.15 : ภาพโคโลนีของแบคทีเรียจากแหล่งดินตัวอย่าง D ที่เจริญบนอาหารเลี้ยงเชื้อ NA ที่ระดับความเข้มข้น 10 -5 และ 10 -9 g/ml

22. การตรวจหาเชื้อแบคทีเรียที่สร้างเอนไซม์ไคตินเนส ในดินตัวอย่างโดยการเลี้ยงเชื้อบน Chitin Medium ภาพที่ 4.16 – 4.19 : ภาพโคโลนีของแบคทีเรียที่ได้จากการเลี้ยงเชื้อบนอาหาร chitin medium

24. สรุปผลการศึกษา

27. เมื่อนำตัวอย่างดินจากแต่ละจุดมาทดสอบหาเชื้อแบคทีเรียที่สร้างเอนไซม์ไคตินเนส ด้วยการละลายดิน ( Serial Dilution ) และ การเลี้ยงเชื้อบนอาหารเลี้ยงเชื้อ Nutrient Agar ( NA ) พบว่าในการเลี้ยงเชื้อบน NA สามารถสังเกตเห็นการเจริญของเชื้อบนถาดเพาะเชื้อจำนวนมากในการละลายดินทุกความเข้มข้น ( ความเข้มข้นตั้งแต่ 10 -3 , 10 -5 , 10 -7 และ 10 -9 ) โดยพบว่าเชื้อที่เจริญมีความหลากหลายมาก และเชื้อส่วนใหญ่มีโคโลนีลักษณะกลม เป็นรูปพัดหรือรูปกิ่งไม้ การเลี้ยงเชื้อแบคทีเรียที่ได้จากดินตัวอย่าง

28. เมื่อนำเชื้อที่สามารถสังเกตเห็นการเจริญของโคโลนี อย่างเด่นชัดบน NA ไปเพาะเลี้ยงบน Chitin Medium เพื่อทดสอบการสร้างเอนไซม์ไคตินเนส พบว่า เชื้อตัวอย่างที่นำไปเลี้ยงบน Chitin Medium ส่วนใหญ่สามารถเจริญได้ดี มีการสร้างโคโลนีตามลักษณะเฉพาะของเชื้อแต่ละชนิดที่สามารถสังเกตได้ใน 1-2 วัน แต่เมื่อเลี้ยงเชื้อไปเป็นระยะเวลาประมาณ 1 สัปดาห์พบว่า เชื้อแบคทีเรียที่ได้จากการละลายดินตัวอย่าง ไม่เกิด วงใส ( Clear Zone ) รอบโคโลนีที่สามารถสังเกตได้ตามที่ได้คาดการณ์ไว้จากการศึกษาเอกสารอ้างอิง การติดสีแกรมและลักษณะใต้กล้องจุลทรรศน์ ของแบคทีเรียที่สร้างเอนไซม์ไคตินเนส

29. จากการสำรวจแบคทีเรียที่สร้างเอนไซม์ไคตินเนสในดินตัวอย่างจากป่าชายเลนไม่พบว่า มีแบคทีเรียที่สร้างเอนไซม์ไคตินเนสและทำให้เกิดวงใสที่สังเกตได้บน Chitin Medium จึงไม่สามารถทำการทดสอบการติดสีแกรมและการสังเกตลักษณะใต้กล้องจุลทรรศน์ของแบคทีเรียกลุ่มดังกล่าวได้ ซึ่งจากการศึกษาค้นคว้าพบว่า สาเหตุที่คาดว่าจะทำให้ไม่พบแบคทีเรียที่สร้างเอนไซม์ไคตินเนสและทำให้เกิดวงใสที่สังเกตได้บน Chitin Medium มีดังต่อไปนี้