3. www.themegallery.com
KHÁI NIỆM
Là quá trình tách dựa trên sự phân bố liên tục các cấu tử chất
phân tử trên hai pha:
- Pha tĩnh: Đứng yên có khả năng hấp thụ chất phân tích.
- Pha động: Di chuyển qua pha tĩnh
Các chất phân tích có ái lực khác nhau với pha tĩnh, chúng di
chuyển với tốc độ khác nhau và tách ra khỏi nhau.
4. www.themegallery.com
PHÂN LOẠI
Phương pháp sắc ký
Sắc ký khí (GC)
SK khí - rắn SK khí - lỏng
Sắc ký lỏng (LC)
HPLC SK Phẳng
SK lớp mỏng SK giấy
SK điện di
mao quản
SK phân bố
lỏng - lỏng
SK
rắn - lỏng
SK hấp phụ SK phân bố SK ion SK rây phân tử
Hệ
pha
Cơ
chế
5. www.themegallery.com
HỆ PHA
Pha động có thể là một chất lỏng hay chất khí
Pha tĩnh có thể là một chất rắn (hạt xốp hay
bột mắn) hay một chất lỏng (được giữ trên
một chất mang rắn).
PHÂN LOẠI
6. www.themegallery.com
3. Sắc ký trao đổi ion: pha tĩnh là chất nhựa trao đổi ion,
cao phân tử có mang những ion có khả năng trao đổi với
các ion cùng dấu của dung dịch hỗn hợp sắc ký.
1. Sắc ký hấp phụ: pha tĩnh là một chất rắn có khả năng
hấp phụ, đó là các phương pháp sắc ký lỏng - rắn và khí -
rắn.
2. Sắc ký phân bố: pha tĩnh là chất lỏng được bao trên bề
mặt của một chất rắn là chất mang trơ, không hoà lẫn
được với pha động
- Bao gồm sắc ký lỏng - lỏng và sắc ký khí - lỏng.
CƠ CHẾ
4. Sắc ký theo loại cỡ (rây phân tử): còn gọi là sắc ký trên
gel. Các phân tử cỡ lớn sẽ được loạt các phân tử nhỏ hơn
sẽ được tách theo kích thước do các phân tử nhỏ di
chuyển chậm hơn.
PHÂN LOẠI
7. www.themegallery.com
- Tách dung dịch dựa trên
tính phân cực của các
thành phần trong dung
dịch
Là chất hấp phụ được trải
thành lớp mỏng, mịn, đồng
nhất trên phiến kính hoặc
kim loại
- Là một hay hỗn hợp nhiều
dung môi phối hợp theo tỷ lệ
nhất định
- Hút lên bản sắc bởi mao dẫn
PHA TĨNH
BẢN SẮC
KÝ
PHA ĐỘNG
PHÂN TÁCH KHÁI NIỆM
SẮC KÝ BẢN MỎNG
Trộn chất hấp phụ (silicagel)
với chất trơ (calcium sulfate)
và nước để tạo kết dính sau đó
được trải trên bề mặt chất trơ
(thủy tinh).
8. www.themegallery.com
SẮC KÝ BẢN MỎNG
Nguyên tắc hoạt động
- Giọt dịch mẫu được nhỏ trên
đường xuất, rìa bản được nhúng
vào dung môi.
- Pha động di chuyển qua pha
tĩnh trên đó đã được đặt chất
cần phân tách.
- Dưới lực mao quản dung môi
chuyển động theo lớp hấp phụ
mang theo cấu tử di chuyển với
tốc độ khác nhau làm tách cấu tử
10. www.themegallery.com
Ứng dụng của sắc ký bản mỏng
- Xét nghiệm độ tinh khiết của các hóa chất phóng xạ trong dược khoa
- Xác định các sắc tố trong tế bào thực vật
- Phát hiện thuốc trừ sâu, thuốc diệt côn trùng trong thức ăn
- Nhận biết những hóa chất trong một chất cho sẵn
- Giám sát các phản ứng hữu cơ
SẮC KÝ BẢN MỎNG
11. www.themegallery.com
SẮC KÝ GIẤY
Nguyên tắc hoạt động
- Tác động của mao dẫn - sự chuyển dịch
của chất lỏng trong những lỗ hổng vật
liệu xốp gây ra bởi lực bám, lực liên kết
và sức căng bề mặt.
- Các chất tan tan trong dung môi nhất
định. Nên các chất tan khác nhau sẽ bị
tách ra khi kết hợp nhiều dung môi khác
nhau
- Việc tách các chất dựa vào tính tan của
nó trong pha động và ái lực khác nhau
của chúng mới pha động và pha tĩnh.
Khái niệm
- Là loại sắc ký lỏng - lỏng.
- Pha động là chất lỏng, là hỗn
hợp của hai hay nhiều dung môi
khác nhau.
- Pha tĩnh lỏng được tẩm vào
chất mang là giấy sắc ký
13. www.themegallery.com
SẮC KÝ TRAO ĐỔI ION
Khái niệm
- Dựa trên cơ sở trao đổi ion giữa protein
tan trong nước hoặc dung dịch đệm loãng
và các tác nhân trao đổi ion.
- Các chất giá trơ có bản chất cellulose
hoặc sephadex kết hợp với nhóm ion hóa.
+ Cellulose-O-CH2-COOH: Phân ly cho ra
COO- là chất trao đổi cation
+ Cellulose-O-C2H4-N-(C2H5)2 nhận ion H+
của nước tích điện dương
15. www.themegallery.com
SẮC KÝ LỌC GEL
Khái niệm
- Là phương pháp phổ biến dùng để tách chiết và tinh sạch protein.
- Dựa vào sự khác nhau về kích thước, hình dạng và phân tử lượng của protein có
trong hỗn hợp cần phân tách.
Tính chất các loại gel
- Phải là chất trơ, không phản ứng với enzyme.
- Không hòa tan, tương đối bền với các yếu tố cơ học và sinh học
- Không có tính đàn hồi (không co), ưa nước
Gel Sephadex
16. www.themegallery.com
SẮC KÝ LỌC GEL
Các bước tiến hành
- Cho sephadex vào cột thủy tinh dài
và cân bằng bằng dung dịch đệm có
pH nhất định.
- Cho enzyme vào cột
- Các hạt nhỏ sẽ khuyết tán qua hạt
sephadex bị trương phồng
- Các hạt lớn không có khả năng đi vào
mà lách nhanh qua các hạt sephadex
và được chiết nhanh ra khỏi cột.
17. www.themegallery.com
Ứng dụng
- Tách các chất có trọng lượng khác nhau có trong hỗn hợp
- Loại muối thay cho quá trình thẩm tích
- Sử dụng để cô đặc protein enzyme
- Xác định khối lượng phân tử
SẮC KÝ LỌC GEL
