Dna fingerprinting

1. DNA FINGERPRINTING
Zoghlami Omar 5^D 13/11/2018

2. IN COSA CONSISTE IL DNA
FINGERPRINTING
• Confrontare sequenze di DNA provenienti da due
campioni diversi
• Diverse applicazioni, sia in campo forense, sia nello studio
di malattie genetiche e di eventuali parentele
• La probabilità che due persone in un dato istante abbiano
lo stesso materiale genetico è praticamente nulla.

3. LE PRINCIPALI FASI DEL DNA
FINGERPRINTING
•Digestione con enzimi di restrizione
•Elettroforesi
•Marcatura ed analisi

5. DIGESTIONE
• Trattazione con enzimi,
detti di restrizione
• Scissioni in specifici
punti lungo il filamento,
detti «siti di restrizione»

6. L’enzima può separare il
materiale con un taglio netto
(estremità «blunt ends») o
trasversale al filamento stesso
(estremità «sticky ends»)

7. ELETTROFORESI
• I vari frammenti possiedono una
carica negativa (gruppi fosfato nel
DNA)
• Dimensioni diverse tra i vari
frammenti
• Vaschetta con gel d’agarosio ,
campo elettrico e il bromuro di
etidio,
• I frammenti percorrono distanze
diverse

9. MARCATURA
• Processo di blotting : nitrocellulosa
(+)
• Materiale genetico risale dalla vasca
• Vengono introdotte delle piccole
sequenze di DNA, dette sonde,
marcate con fosforo radioattivo o
sostanze fluorescenti

11. ANALISI
• Come mai le bande differiscono?
Esiste il polimorfismo, che è
caratterizzato da:
1. RFLP
2. SNP
3. STR/VNTR

12. POLIMORFISMO
• Il polimorfismo di una particolare sequenza genetica è tale se
incide almeno sull’1% della popolazione
• Le sequenze polimorfiche possono essere osservate prima
del confronto con altri campioni o possono essere rilevate
nel processo.
• I caratteri polimorfici vengono trasmessi su due alleli
secondo le leggi di Mendel

13. RFLP
• Sequenze diverse, gli enzimi riconosceranno siti diversi su cui
effettuare la scissione del materiale genetico
• Questo fenomeno è detto RSP (restriction site polymorphism,
polimorfismo dei siti di restrizione)
• Vengono generati frammenti di lunghezza diversa, detti RFLP
(restriction fragment length polymorphism, polimorfismo da
lunghezza dei frammenti di restrizione).

15. SNP
• Polimorfismo SNP (single nucleotide
polymorphism, polimorfismo da singolo
nucleotide)
• Un singolo nucleotide differisce più volte lungo il
materiale genetico.
• Se il corrispondente nucleotide è diverso da tutti
gli altri campioni allora si può escludere il
campione dal confronto
• Utile per creare sonde complementari specifiche
per il processo di marcatura.

16. STR/VNTR
• STR o micro-satelliti (short tandem repeat, brevi ripetizioni consecutive) e le
VNTR o mini-satelliti (variable number tandem repeat, ripetizioni a numero
variabile)
• Sequenze di basi di diversa lunghezza che sono ripetute consecutivamente
• Diversi individui potrebbero condividere la stessa sequenza, ma ripetuta un
numero diverso di volte
• La probabilità che due persone abbiano lo stesso profilo STR è di circa una su
10^13.

17. • Viene sfruttata la PCR (polymerase chain reaction)
• DNA polimerasi e primer, marcati
• Duplicazione rapida di materiale genetico
• Grande quantità di materiale => individuare rapidamente il numero di ripetizioni e
la sequenza che viene ripetuta
• Alcuni STR sono specifici del cromosoma Y => Y-STR