1. TẠO DÒNG GENE MÃ HÓA INTERLEUKIN-2
CỦA NGƯỜI TRONG Escherichia coli
ĐƠN VỊ THỰC TẬP: BỘ MÔN CHSH PHÂN TỬ VÀ MÔI TRƯỜNG
VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM
BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP
GVHD: Th.S Lê Trầm Nghĩa Thư.
CBHD: Nguyễn Thị Mỹ Trinh.
SVTH: Nguyễn Ngọc Quy.
Lớp: ĐHSH4.
MSSV: 08264921.

2. • NỘI DUNG
ĐẶT VẤN ĐỀ
TỔNG QUAN
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ

3. • ĐẶT VẤN ĐỀ
• Interleukin-2 kích thích tố dòng tế bào T
• Vai trò quan trọng với dòng tế bào khác như B, tế bào
giết tự nhiên (NK)
• Đã được chứng minh có hiệu quả trong điều trị bệnh
ung thư phổi, bạch cầu, buồng trứng…
• Sử dụng trong việc chữa trị người nhiễm virus HIV
• Năm 1992, FDA đã cho phép sử dụng IL-2 tái tổ hợp
trong việc chữa trị ung thư, bệnh lây nhiễm do virus…

4. • ĐẶT VẤN ĐỀ
 Với tình hình thực tiễn như trên, chúng tôi bước đầu tạo
dòng gene mã hóa interleukin-2 của người trong E.coli
 Nội dung thực tập bao gồm:
• Cấu trúc vector tái tổ hợp pBluescript/il-2
• Tạo dòng tế bào E.coli DH5α pBluescript/il-2

5. • TỔNG QUAN
Protein interleukin-2 (IL-2)
• Gene IL-2
• Cấu trúc protein IL-2
Kỹ thuật tạo dòng ở E.coli
• Giới thiệu về tạo dòng
• Các bước cơ bản của kỹ thuật tạo dòng

6. • IL-2 được Morgan phát hiện lần đầu tiên năm 1975 ở
dòng tế bào tủy xương người.
• Năm 1981, các đặc điểm về sự glycosyl hóa mới được
phát hiện.
• IL-2 được tách chiết và được tạo dòng gene cho protein
năm 1983 và cấu trúc tinh thể được xác định năm 1992.
Protein interleukin-2

7. • Gene mã hóa IL-2 nằm trên cánh dài nhiễm sắc thể số 4 giữa vị trí
26-27
• Chứa ba intron, mà hai trong ba intron này có độ dài lớn
Gene IL-2

8. Cấu trúc protein IL-2
• Protein IL-2 gồm có 153 amino acid
• Trải qua quá trình biến đổi sau dịch mã, protein IL-2 bị
cắt 20 amino acid và tạo thành IL-2 hoàn chỉnh, có hoạt
tính, chứa 133 amino acid
• Trọng lượng phân tử khoảng 15 kDa

9. Cấu trúc protein IL-2
• IL-2 có dạng hình cầu với 4 chuỗi xoắn α và không có
cấu trúc dạng phiến β
Cấu trúc ba chiều phân tử interleukin-2 ở người

10. Giới thiệu về tạo dòng
 Tạo dòng là quá trình hình thành một dòng tế bào chủ, gồm
những tế bào giống nhau, chứa một hay nhiều bản sao của DNA mục
tiêu, ở dạng tái tổ hợp với một phương tiện mang gene (gọi là vector)
 Mục đích:
• Số lượng lớn và tinh sạch các đoạn DNA mục tiêu
• Thu nhận dòng tế bào có khả năng biểu hiện gene mục tiêu

11. Bước cơ bản trong tạo dòng
1
• Chọn và xử lý vector
• Cắt bằng một RE
2
• Chuẩn bị DNA mục tiêu
• Xử lý DNA cho phù hợp với hai đầu mối cắt của vector
3
• Tạo vector tái tổ hợp
• Trộn chung vector và DNA mục tiêu đã xử lý với enzyme ligase
4
• Chuyển vector tái tổ hợp vào tế bào chủ
5
• Phát hiện và chọn lọc dòng tế bào mang vector tái tổ hợp

12. • VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
 Chủng vi sinh vật
Chủng Escherichia coli DH5α {F-, 80lacZM15, recA1, endA1,
hsdR17(rk-, mk+), phoA, supE44, -, thi-1, gyrA96, relA1} dùng để dòng hóa.
 DNA và hệ vector
Plasmid pIDT-il2 chứa gene mã hóa interleukin-2 dùng làm khuôn để
nhân gene.
Plasmid pBluescript KS II được sử dụng làm vector dòng hóa.

13. • VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
• Plasmid pBluescript KS II mang gene kháng kháng sinh Amp, gene
lacZ’ mã hóa cho enzyme β-galactosidase. Vùng MCS được chèn vào giữa
gene lacZ’.

14. Quy trình tạo dòng gene il-2 vào plasmid pBluescript SK II (+)

15. • KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
 Chuẩn bị nguồn gene il-2
Giếng 1, Thang chuẩn 1kb plus
Giếng 2, Sản phẩm PCR đoạn gene il-2 với
cặp mồi IL2R và IL2F

16. • KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
 Chuẩn bị plasmid vector pBluescript KS II (+)
Giếng 1, Thang chuẩn 1kb plus;
Giếng 2, Sản phẩm cắt kiểm tra bằng
enzyme EcoRV;
Giếng 3, Plasmid pBluescript KS II (+) tách
chiết

17. • KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
 Tạo dòng tế bào E.coli DH5α mang vector tái tổ hợp pBluescript/il-2
Kết quả biến nạp sản phẩm nối pBluescript/il-2 vào tế bào khả nạp E.coli
DH5α
1, Đĩa thí nghiệm
2, Đĩa đối chứng

18. • KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
 Kết luận
Với các kết quả thí nghiệm đã được trình bày trong phần kết
quả - biện luận. Có thể đưa ra các kết luận sau:
• Khuếch đại được đoạn gene mã hóa cho protein IL-2 từ
plasmid pIDT-il2.
• Cấu trúc vector tái tổ hợp pBluescript/il-2 và bước đầu sàng lọc
được những plasmid tái tổ hợp trên môi trường LB-Amp-Xgal.

19. • KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
 Đề nghị
• Tiếp tục kiểm tra dòng tế bào tái tổ hợp mang gene il-2
bằng phương pháp PCR khuẩn lạc để nâng cao mức độ sàng
lọc.
• Kiểm tra dòng tế bào tái tổ hợp mang gene il-2 bằng
phương pháp giải trình tự để đảm bảo mức độ chính xác.
• Biến nạp vector tái tổ hợp pBluescript/il-2 vào chủng biểu
hiện E.coli BL21 (DE3).