Polymerase chain reaction (abbreviated PCR), a laboratory technique for rapidly producing (amplifying) millions to billions of copies of a specific DNA or RNA sequence is brought to light.

1. PCR
Polymerase Chain Reaction
A presen ta ti o n by Orisia Parto re dj o

2. Introductie
PCR is een techniek die in de moleculaire
biologie wordt gebruikt om een enkele kopie
of enkele kopieën van een DNA-segment te
ontwikkelen, waardoor duizenden tot
miljoenen kopieën van een bepaalde DNA-
sequentie worden gegenereerd. PCR is
hedendaags een veel toepaste techniek die
wordt gebruikt in klinische en
onderzoekslaboratoria voor een breed scala
aan toepassingen.

3. Agenda
• Principe van de PCR
• Essentiële componenten
• PCR procedure
• Verschil tussen PCR en DNA-replicatie
• De COVID-19 PCR test
• Toepassingen van PCR

4. Principe van de PCR
PCR maakt het mogelijk om door in vitro replicatie meerdere
kopieën van een DNA-fragment uit een extract te verkrijgen om
vervolgens nader te bestuderen.
Het is een techniek om grote hoeveelheden van een specifieke
DNA-sequentie uit een DNA-monster te halen.
Omdat aanzienlijke hoeveelheden van een DNA-monster nodig
zijn voor moleculaire en genetische analyses, zijn studies van
geïsoleerde stukjes DNA bijna onmogelijk zonder PCR-
amplificatie.

5. Essentiële componenten
• DNA template: het monster-DNA dat de
doelsequentie bevat.
• DNA polymerase: enzym met het vermogen om
een ​​nieuwe DNA-streng te synthetiseren die
complementair is aan de aangeboden template-
streng.
• Primers: korte stukjes enkelstrengen DNA die
zodanig ontworpen zijn dat ze het doelgebied aan
één kant aanvullen.
• Nucleotiden: 4 basisnucleotiden; dATP, dCTP,
dGTP en dTTP, dienen als bouwstenen van nieuwe
DNA-strengen.
• Magnesium: verbetert de enzymatische activiteit,
waardoor de DNA-amplificatie wordt gestimuleerd.

6. PCR Procedure
• Denaturatie:- uitgevoerd bij een temperatuur van 94˚C voor 1min.
- waterbruggen gaan kapot
- hierdoor treedt er scheiding van de twee DNA-
strengen op, wat resulteert in 2 enkele strengen DNA.
• Hybridisatie:- uitgevoerd bij een temperatuur tussen 40-60˚C
(primerhybridisatietemperatuur)
- waterbruggen worden hervormd
- hierdoor hybridiseren de complementaire strengen
• Verlenging :- uitgevoerd bij een temperatuur van 72˚C
- DNA polymerase bindt en synthetiseert nieuwe DNA
strengen
Allereerste stap ->

7. De 3 fasen worden 35-40 keren herhaald, waardoor er miljoenen kopieën van een DNA-
segment ontstaan. Dit gebeurt op een geautomatiseerde thermische cycler die de buizen
met het reactiemengsel in zeer korte tijd kan verwarmen en afkoelen.

8. PCR
• Gericht op het repliceren van
een segment van DNA
• Maakt gebruik van DNA
primers
• Vereist verwarming en
afkoeling die niet beschikbaar
is in het menselijk lichaam
• In vitro proces
DNA-REPLICATIE
• Repliceert een hele streng
DNA
• Maakt gebruik van RNA
primers
• Gebeurd in het lichaam
• In vivo proces
Verschil tussen PCR en DNA-replicatie

9. De Covid-19 PCR test

10. Toepassingen van PCR
• Toegepast in de moleculaire biologie en genetische
ziekteonderzoek om verandering in genen te identificeren.
• Persoonlijke DNA testen
• Forensisch onderzoek

11. Referenties
• https://www.genome.gov/about-genomics /fact-sheets /Polymerase-
Chain-Reaction-Fact-Sheet
• https://www.intechopen.com /chapters /67558
• https://edepot.wur.nl /413685