Allergia al Latex

Diagnostica allergologica molecolare: latex
Filippo Fassio
SOD Immunologia e Terapie Cellulari– AOU Careggi
(Direttore Prof. E. Maggi)

1. Diagnostica allergologica molecolare
2. CRD per allergia al latex

Diagnostica allergologica: l’evoluzione…

Diagnostica allergologica: la CRD…
Nella diagnostica allergologica tradizionale vengono impiegati estratti che contengono molteplici allergeni e sostanze non allergeniche
La composizione è influenzata notevolmente dai processi di estrazione e purificazione, cosicché la composizione finale può essere assai differente da quella originaria
Problemi di sensibilità, specificità, riproducibilità del test
Nella component resolved diagnostics le singole molecole, purificate o ricombinanti, vengono analizzate singolarmente

Nella diagnostica allergologica tradizionale vengono impiegati estratti che contengono molteplici allergeni e sostanze non allergeniche
La composizione è influenzata notevolmente dai processi di estrazione e purificazione, cosicché la composizione finale può essere assai differente da quella originaria
Problemi di sensibilità, specificità, riproducibilità del test
Nella componentresolveddiagnosticsle singole molecole, purificate o ricombinanti, vengono analizzate singolarmente

Diagnostica allergologica: CAP vs ISAC
ImmunoCAP 250
ISAC
Metodiche basate sulla marcatura con anti-IgE (“sandwich”):
Antigeni legati alla fase solida
Legame con IgE del paziente
Aggiunta anti IgE marcate

Diagnostica allergologica: ImmunoCAP
Gli allergeni covalentemente legati ad un supporto solido reagiscono con le IgE specifiche presenti nel siero del paziente
Dopo aver rimosso le IgE non legate vengono aggiunti anticorpi marcati rivolti contro le IgE del siero
Lavaggio delle IgE marcate non complessate alle IgE del siero
Misurazione della fluorescenza

siti di reazione 7X7 mm
molecola allergenica in triplicato in ognuno dei siti di reazione
maschera protettiva ed idrofoba di Teflon
Diagnostica allergologica: microarray ISAC

Harwanegg C, Hiller R. Clin Chem Lab Med 2005;43(12):1321-6.

Nome comune
Famiglia
Molecola
Risultato

ImmunoCAP vs ISAC: Aspetti tecnici
Metodica attualmente non automatizzata (ma automatizzabile)
Time-consuming: durata complessiva circa 5 ore; almeno nelle prime 3 ore richiesta presenza dell’operatore
Risposte semi-quantitative (ISU)
Non possibile dosaggio delle IgE totali
Sufficienti 20 μl di sangue (puntura capillare), utile specialmente per pazienti pediatrici

1. Diagnostica allergologica molecolare
2. CRD per allergia al latex

Diagnostica molecolare: latex…
Of the more than 240 natural rubber latex (NRL) polypeptides, 13 latex proteins (Hev b 1–13) have been officially recognized as allergens by the International Union of Immunological Societies (IUIS)

Questions still persist with regard to the reagents used in the diagnosis of latex allergy.
Crude non-ammoniated latex extracts containing mixtures of allergenic and non-allergenic proteins have been used to prepare puncture skin-testing reagents and allergosorbents used in in vitro and in vivo analyses, respectively.
The variable quality of the natural raw material remains a source of concern.
Thus, we and others have focused on the development of component-resolved strategies for the diagnosis and management of human allergic disease.

Diagnostica molecolare: Hev b 1…
Hev b 1, RubberElongationFactor:
Primo allergene scoperto nel latex, è una piccola proteina idrofobica di 14.6 kDa con funzione enzimatica (catalizza la polimerizzazione) e rappresenta dal 10% al 60% delle proteine totali nel latex.
Allergene maggiore.

Hev b 2, 1-3 Glucanasi:
Enzima con funzione difensiva antimicotica.
Esistono varie isoforme con differenti gradi di glicosilazione, e le catene carboidratiche sembrano avere un ruolo importante nel riconoscimento da parte delle IgE specifiche.
La prevalenza di sensibilizzazione a rHev b 2 pare differire sensibilmente dalla sensibilizzazione alla molecola naturale.

Hev b 3, RubberParticleProtein:
Enzima di 27 KDa, con attività omologa ad Hev b 1.
Insieme ad Hev b 1 è un allergene maggiore nel latex, ed i dati di prevalenza della sensibilizzazione rispetto a queste due molecole sono sostanzialmente sovrapponibili.

Hev b 4, GlucosidasiCianogenica:
Complesso molecolare non ancora ben caratterizzato dal punto di vista della struttura chimica né della funzione.

Hev b 5, Proteina Acida:
È una proteina ricca di acido glutammico. Costituisce uno dei più importanti allergeni maggiori del latex.
È in grado di determinare reazioni allergiche nei soggetti sensibilizzati soprattutto dopo contatto con prodotti a base di latice concentrato, mentre la concentrazione nei prodotti a base di latice naturale è bassa.

Hev b 6, Proheveina/Heveina:
È una delle proteine presenti in maggiore concentrazione nel latex. Possiede funzioni difensive ed interviene nel processo di coagulazione.
L’heveina (Hev b 6.02) deriva dalla proheveina (Hev b 6.01) dopo scissione di una porzione C-terminale (Hev b 6.03).
La maggior parte dell’attività allergenica è dovuta ad Hev b 6.02 (allergene maggiore).
Presenta elevata omologia con altre chitinasi presenti nei vegetali (avocado, banana, solanacee).

Hev b 7, PatatinLikeProtein:
Hev b 7.01 (Hev b 13 – Esterasi Lipolitica): glicoproteina, costituisce un allergene maggiore del latex.
Hev b 7.02 (Hev b 7): presenta elevata omologia con allergeni di patata (Sola t 1) e può causare cross-reattività anche con castagna e pomodoro.

Hev b 8, Profilina:
Componente del citoscheletro presente nella maggior parte degli eucarioti (panallergene).
Scarsamente presente nei manufatti, scarsa importanza clinica nel determinare reazioni avverse al latex.

Hev b 9, Enolasi:
Enzima glicolitico che presenta elevata omologia con enolasi di derivazione micotica (Alt a 5 e Cla h 6).
Rappresenta un allergene minore del latex; la cross-reattività nei confronti di miceti è ancora da valutare.
Allergene minore.

Hev b 10, Manganese superossido dismutasi:
Isolata per la prima volta in insieme ad Hev b 9, anche in questo caso elevata omologia con enzimi micotici (Asp f 6).
Allergene minore.

Hev b 11, Chitinasi di Classe I:
Analoga ad Hev b 6.02, con la quale mostra una certa omologia di sequenza.
Non disponibili dati su cross-reattività con altre chitinasi presenti in altri vegetali.
È un allergene minore (la parte omogenea ad Hev b 6.02 non pare avere un ruolo importante nel legame delle IgE).

Hev b 12, Lipid Transfer Protein:
Proteine con funzione difensiva nei confronti di batteri, virus e funghi.
L’espressione varia in funzione delle condizioni ambientali (aumenta in condizioni di “stress”).
È un allergene minore del latex, non noti i dati relativi alla cross-reattività con altre LTP.

Differenti profili di sensibilizzazione
HCW:
Hev b 5
Hev b 6
Hev b 7.01
(Hev b 2)
SB:
Hev b 1
Hev b 3
Hev b 8
Cross reattività
(profilina)

80 soggetti con allergopatia respiratoria
e polisensibilizzazione per inalanti

Risultati: Latex
k di Cohen = 0,18
(95% CI = 0,04-0,31)

Grazie!

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Allergia al Latex

by filfassio on Aug 15, 2011

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