5. La composizione è influenzata notevolmente dai processi di estrazione e purificazione, cosicché la composizione finale può essere assai differente da quella originaria
8. La composizione è influenzata notevolmente dai processi di estrazione e purificazione, cosicché la composizione finale può essere assai differente da quella originaria
14. siti di reazione 7X7 mm molecola allergenica in triplicato in ognuno dei siti di reazione maschera protettiva ed idrofoba di Teflon Diagnostica allergologica: microarray ISAC
18. ImmunoCAP vs ISAC: Aspetti tecnici Metodica attualmente non automatizzata (ma automatizzabile) Time-consuming: durata complessiva circa 5 ore; almeno nelle prime 3 ore richiesta presenza dell’operatore Risposte semi-quantitative (ISU) Non possibile dosaggio delle IgE totali Sufficienti 20 μl di sangue (puntura capillare), utile specialmente per pazienti pediatrici
20. Diagnostica molecolare: latex… Of the more than 240 natural rubber latex (NRL) polypeptides, 13 latex proteins (Hev b 1–13) have been officially recognized as allergens by the International Union of Immunological Societies (IUIS)
21. Diagnostica molecolare: latex… Questions still persist with regard to the reagents used in the diagnosis of latex allergy. Crude non-ammoniated latex extracts containing mixtures of allergenic and non-allergenic proteins have been used to prepare puncture skin-testing reagents and allergosorbents used in in vitro and in vivo analyses, respectively. The variable quality of the natural raw material remains a source of concern. Thus, we and others have focused on the development of component-resolved strategies for the diagnosis and management of human allergic disease.
23. Diagnostica molecolare: Hev b 1… Hev b 1, RubberElongationFactor: Primo allergene scoperto nel latex, è una piccola proteina idrofobica di 14.6 kDa con funzione enzimatica (catalizza la polimerizzazione) e rappresenta dal 10% al 60% delle proteine totali nel latex. Allergene maggiore.
24. Diagnostica molecolare: Hev b 2… Hev b 2, 1-3 Glucanasi: Enzima con funzione difensiva antimicotica. Esistono varie isoforme con differenti gradi di glicosilazione, e le catene carboidratiche sembrano avere un ruolo importante nel riconoscimento da parte delle IgE specifiche. La prevalenza di sensibilizzazione a rHev b 2 pare differire sensibilmente dalla sensibilizzazione alla molecola naturale.
25. Diagnostica molecolare: Hev b 3… Hev b 3, RubberParticleProtein: Enzima di 27 KDa, con attività omologa ad Hev b 1. Insieme ad Hev b 1 è un allergene maggiore nel latex, ed i dati di prevalenza della sensibilizzazione rispetto a queste due molecole sono sostanzialmente sovrapponibili.
26. Diagnostica molecolare: Hev b 4… Hev b 4, GlucosidasiCianogenica: Complesso molecolare non ancora ben caratterizzato dal punto di vista della struttura chimica né della funzione.
27. Diagnostica molecolare: Hev b 5… Hev b 5, Proteina Acida: È una proteina ricca di acido glutammico. Costituisce uno dei più importanti allergeni maggiori del latex. È in grado di determinare reazioni allergiche nei soggetti sensibilizzati soprattutto dopo contatto con prodotti a base di latice concentrato, mentre la concentrazione nei prodotti a base di latice naturale è bassa.
28. Diagnostica molecolare: Hev b 6… Hev b 6, Proheveina/Heveina: È una delle proteine presenti in maggiore concentrazione nel latex. Possiede funzioni difensive ed interviene nel processo di coagulazione. L’heveina (Hev b 6.02) deriva dalla proheveina (Hev b 6.01) dopo scissione di una porzione C-terminale (Hev b 6.03). La maggior parte dell’attività allergenica è dovuta ad Hev b 6.02 (allergene maggiore). Presenta elevata omologia con altre chitinasi presenti nei vegetali (avocado, banana, solanacee).
29. Diagnostica molecolare: Hev b 7… Hev b 7, PatatinLikeProtein: Hev b 7.01 (Hev b 13 – Esterasi Lipolitica): glicoproteina, costituisce un allergene maggiore del latex. Hev b 7.02 (Hev b 7): presenta elevata omologia con allergeni di patata (Sola t 1) e può causare cross-reattività anche con castagna e pomodoro.
30. Diagnostica molecolare: Hev b 8… Hev b 8, Profilina: Componente del citoscheletro presente nella maggior parte degli eucarioti (panallergene). Scarsamente presente nei manufatti, scarsa importanza clinica nel determinare reazioni avverse al latex.
31. Diagnostica molecolare: Hev b 9… Hev b 9, Enolasi: Enzima glicolitico che presenta elevata omologia con enolasi di derivazione micotica (Alt a 5 e Cla h 6). Rappresenta un allergene minore del latex; la cross-reattività nei confronti di miceti è ancora da valutare. Allergene minore.
32. Diagnostica molecolare: Hev b 10… Hev b 10, Manganese superossido dismutasi: Isolata per la prima volta in insieme ad Hev b 9, anche in questo caso elevata omologia con enzimi micotici (Asp f 6). Allergene minore.
33. Diagnostica molecolare: Hev b 11… Hev b 11, Chitinasi di Classe I: Analoga ad Hev b 6.02, con la quale mostra una certa omologia di sequenza. Non disponibili dati su cross-reattività con altre chitinasi presenti in altri vegetali. È un allergene minore (la parte omogenea ad Hev b 6.02 non pare avere un ruolo importante nel legame delle IgE).
34. Diagnostica molecolare: Hev b 12… Hev b 12, Lipid Transfer Protein: Proteine con funzione difensiva nei confronti di batteri, virus e funghi. L’espressione varia in funzione delle condizioni ambientali (aumenta in condizioni di “stress”). È un allergene minore del latex, non noti i dati relativi alla cross-reattività con altre LTP.
35. Diagnostica molecolare: latex… Differenti profili di sensibilizzazione HCW: Hev b 5 Hev b 6 Hev b 7.01 (Hev b 2) SB: Hev b 1 Hev b 3 Hev b 8 Cross reattività (profilina)
